固体培养基和液体培养基PPT学习教案

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培养基的营养物质
2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？
不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、 和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要 满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例 如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不 能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、 嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压 等的要求。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止 杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶 都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可 采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通 过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是 专为防止空气中微生物的污染而设计的。
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物的过程。区分为高程度消毒、中程度消毒、低 程度消毒三种方式。
（2）灭菌的定义：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包 括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而 达到完全无菌之过程。
灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通 也是最重要的技术。
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3.常用的消毒与灭菌的方法
(1)消毒的方法： 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔 灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……
细菌的构造
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、 菌（纤）毛、 荚膜、细胞壁、 细胞膜、细胞 质，细胞质中 又有液泡、储 存性颗粒、核 质等。
图 1-3 细 菌 的 结 构
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*细胞壁
结构特点：坚韧且有弹性
细胞壁有哪些功能？
Байду номын сангаас
伤 寒
①固定细胞外形；
杆
③阻拦大分子物质进人细胞；
菌
细
④使细胞具有致病性及对噬
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
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三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌 ）
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操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过 三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
胞
菌体的敏感性。
壁
中
②保护细胞免受外力的损伤；
含
毒
素
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有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
消毒：指使用较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害 的微生物（不包括芽孢和孢子）。 灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内 外所有微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普 通也是最重要的技术。
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2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明通常用通常用适当染料适当染料染色染色后显微镜观察后显微镜观察细菌细胞由外向里细菌细胞由外向里依次有依次有鞭毛鞭毛荚膜荚膜细胞壁细胞壁细胞膜细胞细胞膜细胞质质细胞质中细胞质中又有液泡储又有液泡储存性颗粒核存性颗粒核细菌的结构细菌的结构结构特点
固体培养基和液体培养基
会计学
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选择培养基
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的 培养基:分离杂交瘤细第14胞页/共57页
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8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭 菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌 15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干 热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平 板，无杂菌污染才可用来接种.
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1．碳源、氮源及生长因子的来源与
功营能养要归素纳
来源
功能
碳
无机碳 源
CO2、NaHCO3、 CaCO3等含碳无机 物
①构成细胞物质 和一些代谢产物；
源
有机碳 源
糖类、脂质、蛋白 ②有机碳既是碳 质、有机酸、石油、源又是能源 花生粉饼等
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氮
无机氮 源
无机氮：NH3、铵 盐、硝酸盐、N2 等
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养 基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平 板培养微生物。
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2、纯化大肠杆菌
微生物的接种技术
接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法
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2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却 后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条 起始处要少，每次从上一次划线的末端开始， 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减 少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
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（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专 供微生物生长繁殖使用的混合营养液。
1.培养基的类型和用途
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基 、半固体培养基。其中固体培养基用于菌种保存 及分离、鉴定菌落、活菌计数等，半固体培养基 可观察微生物的运动，液体培养基常用于发酵工 业。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离 单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的 菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条 状的菌落。
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1.为什么在操作的第一步以及每次划线之 前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然 需要灼烧接种环吗？为什么？
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(2)灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌： 160-170 ℃下加 热1-2h。
3、高压蒸气灭菌 ：100kPa、121 ℃下维持1530min.
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最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭 所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体， 同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
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菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
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菌落
细菌的菌落特征 因种而异
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细菌的营养类型
根据细菌所利用的能源和碳 源的不同，将细菌分为两大 光营合养自养类型型:光。合细菌
血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白 、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷 析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
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液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
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固体培养基：菌落，菌苔
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半固体培养基：
微生物包括哪五类： 放线菌
真菌
原生动物
病毒界
原核生物 界
真菌界 原生生物界
特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜 或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.
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细菌的外形与大小
细菌：单细胞不分枝的原核微 生物。
细菌细胞微小而透明，通常用 适当染料染色后显微镜观察
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3.微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
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1.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
无动力 有动力(弥散)
(是否运动)
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4.培养基的用途 液体培养基：增菌 固体培养基：纯化，增菌 半固体培养基：动力检测，保种
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3、获得纯净培养物的关键是什么？ 4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？
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消毒与灭菌
平板划线法:通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟 逐步稀释分散到培养基的表面.
在数次画线后,可以分离到由一个细胞 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就 是菌落.
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平板划线的操作方法
➢ 交叉划线法 ➢ 连续划线法
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平板划线时不能划破培养基的原因
1
一、课题目标： 了解有关微生物及培养基的基础知识，
进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。
二、课题重点和难点：
无菌技术的操作 。
三、技能目标：
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和 平板划线法等基本操作技术，熟练、规范 地进行无菌操作，成功地培养微生物。
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一、基础知识： (一)微生物
病毒 细菌
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
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3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置 ，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 。
合成培养基:
根据细胞生存所需物质 的种类和数量，用人工方法 模拟合成的。
合成培养基主要成分是 氨基酸、维生素、碳水化合 物、无机盐和其它一些辅助 物质。
优点：标准化生产，组分 和含量相对固定;成本低
缺点： 缺少某些成分， 不能完全满足体外细胞生长 需要。
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆 、和组织提取液（如鸡胚 和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培 养效果好 缺点：来源受限;成分复杂 ，影响对某些实验产物的 提取和实验结果的分析;易 发生支原体污染;
将无机氮合成含 氨的代谢产物
源
有机氮 源
牛肉膏、蛋白胨、
核酸、尿素、氨 基酸
合成蛋白质、核 酸及含氮的代谢 产物
生长因子
①酶和核酸的组
维生素、氨基酸、 成成分；②参与
碱基
代谢过程中的酶
促反应
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人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和 繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
无菌技术
分类
灭菌法
高效消 毒法 中效消 毒法 低效消 毒法
定义
方法
杀灭一切微生物 物理法：热力、辐射、微 波、等离子体
化学法：醛类、烷化剂
杀灭一切致病微 紫外线、含氯剂、臭氧、
生物
复配剂等
杀灭除芽孢外的 超声波、碘类、醇类、酚
致病微生物
类
杀灭细菌繁殖体、单链季胺盐、双胍类、中
亲脂病毒
草药、金属离子
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培 养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
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倒平板技术
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1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时 ，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
化自能养自养菌型::分硝化类细,菌举,铁例细菌?,硫细
菌
异养菌: 腐生菌 寄生菌
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大部分病原菌
放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
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真菌
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1、培养基可以分为哪两类？ 2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？ 3、获得纯净培养物的关键是什么？ 4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？ 6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种 环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数 目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧 接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避 免细菌污染环境和感染操作者。