细菌的革兰氏染色
细菌的革兰氏染色法
细菌的革兰氏染色法实验二细菌的革兰氏染色法学习细菌的革兰氏染色原理和方法。
单染色法：就可以观测微生物的大小、形状、和细胞排序状况，但无法辨别微生物以及它的特定结构等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。
常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
革兰氏染色机制：由于g－肽聚糖层较厚，交联度高，不含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融化了类脂质，减少了细胞的通透性，并使初染的结晶青色和碘的复合物不易喷出，经沙黄复染呈圆形红色。
而g＋细胞壁结构球状，用脱色剂处置后，肽聚糖层孔径增大，通透性减少，故细菌仍留存初染时的紫色。
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（24h培养物）、革兰氏染色液一套3.初染：在搞好的涂面上碱液草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至并无紫色。
4.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
5.脱色：除去残水后，碱液95%酒精展开脱色约15-20秒，后立即用流水冲洗。
6.复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。
7.镜检：观测染色结果并绘图。
记录所观察到的两种菌革兰氏染色颜色的差别，并绘图。
如图所示，被染为紫色的部分即为为金黄色葡萄球菌，红色部分即为为大肠杆菌。
六、问题与讨论必须获得恰当的革兰氏染色结果必须特别注意哪些操作方式？哪一步就是关键？why?按照操作顺序来看1、首先，必须特别强调的就是实验过程中全程的无菌操作：玻片的消毒、注射环路的杀菌以及实验所用材料试管的无菌采用；2、其次，是金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的刮取过程中，它们的量一定要适中，以免过多影响后期观察结果；3、再者，涂片操作方式完结后，通过酒精灯的蒸煮将细菌紧固，必须特别注意掌控研磨的程度，避免细菌全系列被打死；4、接下来的染色过程中，注意各染色剂染色的时间长度，尤其是95%乙醇脱色的时长，18秒为适宜时长；5、最后，就是化成水分，特别注意油镜的采用，先在低倍镜下打听视野，再转换成高倍镜、油镜。
细菌革兰氏染色步骤
细菌革兰氏染色步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌分类鉴定方法。
步骤如下：
1.准备细胞液片：将待染菌液滴在干净玻璃片上，并用火炉或灯火加热使其干燥。
2.固定菌液：用无定形火烧的镊子将玻璃片持在火炉/灯火上，烧过3-4次，让菌液固定在玻璃片上。
3.染色：将玻璃片浸入染色剂——紫晶染液中，静置1分钟。
4.漂洗：立即用水把紫晶染剂冲洗掉。
5.涂酒精：用乙醇涂抹菌液，使不产生色素复合物的细胞膜变性。
6.漂洗：用水把酒精冲洗掉。
7.染色：将玻璃片浸入染色剂——碘化钾液中，静置1分钟。
8.漂洗：用水把碘酸盐冲洗掉。
9.溶解：滴一两滴乙醚或丙酮，使不固定的染色剂冲出来，然后用热空气烘干涂片。
10.观察镜检：在显微镜下观察细胞的颜色和形态，区分不同的细菌群体。
革兰氏染色后，属于革兰氏阴性细菌的菌落呈现出红色或粉红色，而属于革兰氏阳性细菌的菌落呈现出蓝紫色或崩溃的黑色。
细菌革兰氏染色
05
革兰氏染色的注意事项与局限性
染色过程中的注意事项
染色时间
染色时间对染色结果的影响较大，过短或过长的 染色时间都可能导致染色效果不佳。
涂片厚度
涂片过厚或过薄都会影响染色效果，需保持适当 的涂片厚度。
脱色程度
脱色时间与脱色剂的浓度需严格控制，否则会影 响染色结果。
染色液的新旧
染色液使用一段时间后，颜色会变淡，影响染色 效果，需定期更换。
细菌革兰氏染色
目
CONTENCT
录
• 革兰氏染色的历史与发展 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的注意事项与局限性
01
革兰氏染色的历史与发展
革兰氏染色技术的起源
1884年，丹麦医生革兰发明了革兰氏染色法，用于 区分细菌的形态和性质。
革兰氏染色法最初用于鉴别肠道细菌，如大肠杆菌 和志贺氏菌。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，经过染色后菌体形态饱满，不易被 渗透，呈现出比较清晰的紫色或蓝紫色。
革兰氏阴性菌的染色结果
红色或淡红色
革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，经过革兰氏染色后呈现红色或淡红色，这是由于 其细胞壁较薄，容易渗透染色液，与碘液结合形成复合物，呈现出红色或淡红 色。
菌体形态透亮
由于革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，经过染色后菌体形态透亮，容易观察其形态 特征。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
取洁净的载玻片，在中央涂一薄层琼 脂，用接种环取少量待检细菌涂布均 匀，然后迅速将涂有细菌的载玻片置 于酒精灯火焰上加热，使琼脂凝固。
冷却后将玻片翻转，用铅笔在背面画 一横线，再将玻片正面朝上放置于显 微镜载物台上。
固定
用夹子夹住载玻片一端，用火焰加热固定液（甲醇或乙醇）直至冒蒸汽，然后将 载玻片放入固定液中，持续加热1-2分钟，使细菌被固定在载玻片上。
细菌的革兰氏染色
2009年8月 一厂品控
目的要求
•学习并掌握革兰氏染色的方法
实验材料
•菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌。 •染料：草酸铵结晶紫液、革兰氏碘 液、95%乙醇、番红液（沙皇复染液） •其他：显微镜、载玻片、接种环、酒 精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲 苯等。
基本原理
•革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一 种鉴别染色法。 •1884年由丹麦医师Gram创立。
关键点
•严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够 时，阴性菌被误染为阳性菌。
•菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时 间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 都常呈阴性反应
大肠杆菌（G-）
枯草芽孢杆菌（G+）
金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
实验思考题
•大肠杆菌和枯草芽孢杆菌染色后，是G-还是 G+？ •为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄有所要求？ •你的实验结果与与培训中所述是否一致？如 果不一致，试分析原因。
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量 高，肽聚糖含量较低，乙醇溶解了 脂类物质，使细胞壁通透性增加， 结晶紫——碘复合物易被抽出，于 是被脱色。
•阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同 pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料 较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所 以染色时的条件要严格控制。
方法与步骤
•涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色 （1min）→水洗→路哥氏碘液媒染 （1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s） →水洗→番红复染（1min）→水洗→干 燥→镜检。
实验内容
•对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 萄球菌分别进行革兰氏染色。 •对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 行革兰氏染色。
简述革兰氏染色方法
简述革兰氏染色方法革兰氏染色方法是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
本文将从原理、步骤、应用以及优缺点等方面进行简述。
一、原理革兰氏染色方法是根据细菌细胞壁的化学组成差异而设计的。
细菌细胞壁是由多层薄而紧密的多糖和脂蛋白组成的，其中革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的胞内酶和胞外酶，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，胞内酶和胞外酶含量较少。
二、步骤1. 准备细菌涂片：将待染菌液滴于玻璃片上，用铅笔或曲别针将菌液均匀地涂开，然后用火焰烘烤片面，使其固定。
2. 染色：将涂片放在染色架上，先用蔗糖水浸润片面，然后滴加革兰氏紫液，静置1分钟。
3. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
4. 酒精分解：滴加碘酒，静置1分钟，使细菌细胞壁与染色剂形成络合物。
5. 洗涤：用95%乙醇冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
6. 染色：滴加伊红，静置1分钟，使细菌细胞壁和胞质染成红色。
7. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
8. 干燥：将片面用吹风机吹干，然后用显微镜观察。
三、应用革兰氏染色方法广泛应用于细菌学和临床微生物学领域。
通过革兰氏染色，可以快速区分细菌的类型，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
革兰氏阳性菌常见于致病菌中，如葡萄球菌、链球菌等；而革兰氏阴性菌常见于肠道菌群中，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
四、优缺点1. 优点：革兰氏染色方法操作简单、快速，可以在短时间内对细菌进行初步分类。
此外，染色结果直观明确，易于观察和分析。
2. 缺点：革兰氏染色方法对于某些细菌可能存在染色困难或染色效果不明显的情况，这可能会导致结果的不准确。
另外，染色后的细菌仅能观察细胞形态和分布情况，无法提供更详细的细胞结构信息。
总结：革兰氏染色方法是一种简单、快速的细菌染色方法，通过染色结果可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
该方法在细菌学和临床微生物学中有着广泛的应用，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
实验二细菌革兰氏染色
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
脱色—水洗—复染—水洗—干燥—镜检
菌悬液
涂片
干燥
滴加无 菌水
取菌苔
涂片
固定
Smear preparation
Heat fixing
Staining
crystal violet stain
wash with water
Counterstain with Safranin
3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。
4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色
成分
肽聚糖 磷壁酸 类脂质 蛋白质源自占细胞壁干重的%革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等 4、标本片：芽孢、荚膜、孢子丝
四、实验方法
注意事项：
（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。
（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
微生物实验-革兰式染色
细菌的革兰氏染色与显微观察一、实验原理革兰氏染色原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结，当用乙醇处理时，由于脱水而引发网状结构的孔径变小，通透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
显微镜成像原理：现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
在载玻片与镜头之间加滴镜油主要是为了增加照明亮度和增加显微镜的分辨率。
以油代替空气作为光的传播介质，减少光线的折射或全反射，使观察到的像更加清晰。
二、实验器材1.菌落：大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物。
2.溶液或试剂：蒸馏水、碘液、结晶紫染色液、95%酒精、番红染色液、香柏油。
3.仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、镊子、擦镜纸。
三、实验步骤革兰氏染色：1.涂片取出载玻片，点燃载玻片，燃尽载玻片上的酒精和灭菌，在中间轻轻点一小滴蒸馏水，用接种环在试管的斜面培养基上，轻轻挑取少量菌体，整个过程试管口都要处在酒精灯的上方，而且速度要快，以防污染培养基。
然后在载玻片的小水滴以转圈的动作涂片，待水滴混浊后停住，等其干燥、固定。
2.初染滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于菌落上，染色1～2min ，倾去染色液，有细水从载玻片上方向下冲洗，至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
3.媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
4.脱色将载玻片上面的水甩净，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脱色，直至流出的酒精刚好不出现蓝色，立即用水冲净酒精，将载玻片上水甩净。
细菌革兰氏染色PPT课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
实验细菌的革兰氏染色
结果判断的注意事项
观察时需注意染色结果是否清晰、准确，避免因操作不当或染色时间过长导致颜色 过深或过浅。
对于某些特殊细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等，革兰氏染色结果可能与其他 细菌不同，需结合其他实验结果进行鉴别。
学习革兰氏染色的操作步骤
结晶紫染色
涂片上滴加结晶紫染液，染色 1-2分钟，水洗去多余染液。
复染
涂片上滴加复染液，染色30秒 左右，水洗去多余复染液。
涂片
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上。
脱色
涂片上滴加脱色液，脱色30秒 左右，水洗去多余脱色液。
干燥
将涂片自然干燥或用吸水纸吸 干。
掌握革兰氏染色的结果判断
据。
实验中遇到的问题及解决方案
问题
染色过程中出现颜色不均 的现象。
问题
部分细菌在染色后形态不 清晰。
问题
部分细菌在染色过程中脱 落。
解决方案
调整染色时间或染色液的 浓度，确保染色均匀。
解决方案
优化制片步骤，确保细菌 均匀分布在载玻片上，以
便观察。
解决方案
增加固定步骤，使用更好 的固定剂，以保持细菌在
在观察革兰氏染色结果时，需注意区分污染菌和实验菌，避免误判。
06
实验结论
实验总结
实验过程顺利，染色效果明显， 成功地进行了细菌的革兰氏染色。
通过实验，我们掌握了革兰氏染 色的基本原理和操作方法，了解 了不同细菌在染色后的形态特征。
实验中，我们观察到了革兰氏阳 性菌和阴性菌在染色后的明显差 异，为后续的细菌鉴定提供了依
革兰氏染色的重要性
细菌的革兰氏染色原理
细菌的革兰氏染色原理细菌的革兰氏染色是一种用于区分细菌的染色方法，最早由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格兰发明并于1884年提出。
该方法通过染色技术，在显微镜下观察细菌细胞壁的反应，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
革兰氏染色的原理基于细菌细胞壁的化学成分和结构的差异。
细菌细胞壁是由表面的胞壁多糖、磷脂和蛋白质组成。
革兰氏阳性细菌的细胞壁相对较厚，主要由葡聚糖和梅纳硇蛋白组成。
而革兰氏阴性细菌的细胞壁较为薄，外层主要是脂多糖和脂蛋白。
革兰氏染色的步骤包括染色、漂洗和计数。
首先，将待测的细菌样品涂布在玻璃片上，形成一个薄膜，然后用碘酒溶液滴在细菌上。
碘酒溶液可以使细菌细胞壁中的晶体紫染料结合得更牢固。
然后将玻璃片放入洗涤盘中，用洗涤液冲洗，将多余的染料冲掉。
接下来，将洗涤过的玻璃片放入乙醇溶液中漂洗，使细胞壁透明起来，并将乙醇溶液中的紫色冲掉。
然后将玻璃片放入洗涤盘中，用洗涤液冲洗乙醇。
最后，将洗涤盘中的玻璃片倒扣在显微镜载玻片上，用显微镜观察细菌。
革兰氏阳性细菌呈紫色或紫红色，而革兰氏阴性细菌呈无色或浅红色。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的特性。
革兰氏阳性菌染色后呈紫色是因为细菌的胞壁中的晶体紫染料结合了碘酒溶液，形成了紫色的复合物。
而革兰氏阴性菌染色后无色或浅红色是因为细菌的细胞壁相对较薄，无法固定晶体紫染料。
革兰氏染色的结果对细菌的分类和鉴定非常重要。
革兰氏染色可以帮助区分出细菌的不同类型，指导临床用药和治疗。
例如，革兰氏阳性菌通常是病原菌，如金黄色葡萄球菌和链球菌等，而革兰氏阴性菌通常是一些肠道菌群中常见的细菌，如大肠杆菌和沙门氏菌等。
此外，革兰氏染色也对细菌的结构和形态提供了重要的信息。
通过观察细菌的形态，可以预测其生长和繁殖的方式，以及对环境的适应能力。
需要注意的是，虽然革兰氏染色是一种重要的细菌鉴定方法，但并不是所有的细菌都可以通过革兰氏染色来区分。
有些细菌在染色过程中可能会发生变化，导致染色结果不准确。
细菌革兰氏染色
细菌革兰氏染色细菌革兰氏染色又称革兰染色，是一种微生物学上最常用的染色技术之一。
它是由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年首次发明的。
革兰氏染色的原理是利用某些细菌耐受乙醇的能力不同，将它们分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
通过这种区分方式，有助于对某些细菌的分类和鉴定。
革兰氏染色原理革兰氏染色涉及到两种染料，即革兰氏染色液和碘化物液。
革兰氏染色液的主成分是紫色素，能够穿透菌体进入到细胞内部，使其产生着色效果。
碘化物液是一种褐色液体，用于增强革兰氏染色的效果。
当细菌经过革兰氏染色之后，革兰氏阳性菌会呈紫色或紫红色，而革兰氏阴性菌则会呈现出蓝绿色或浅紫色。
这是由于不同类型的细菌细胞壁结构和成分的不同所导致的。
具体步骤如下：1.将已培养的细菌涂在玻璃片上。
2.在加上革兰氏染色液，并在玻璃片上加热。
3.再加上碘化物液进行固定染色。
4.用乙醇或醇/醚对玻璃片进行冲洗。
5.最后用草酸进行洗涤并干燥。
细菌革兰氏染色的应用由于革兰氏染色技术简单和易于操作，因此在医学、食品、水处理等领域有着广泛的应用。
医学上，革兰氏染色能够帮助医生进行感染病原菌的诊断，例如革兰氏阳性菌是阴道炎的病原菌之一。
在水处理领域，可以用于分离和鉴定可降解有机物质的培养菌株。
除此之外，在食品加工行业中，革兰氏染色也扮演着重要的角色。
行业工作者经常需要使用革兰氏染色来检测食品接触到的病原菌，以保障公众的健康。
细菌革兰氏染色的注意事项需要注意的是，在进行细菌革兰氏染色实验的时候，要注意保证无菌操作，以免影响实验结果。
此外，在染色操作过程中需要掌握好操作时间，以便产生准确的结果。
细菌革兰氏染色是一种简单、快捷、经济、且可靠的细菌鉴定方法。
它对于医学、食品及水处理系统的监测都具有重要的价值，是一种广泛应用的科学工具。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的形态特征，了解其细胞壁的结构差异。
实验材料和方法：材料，革兰氏阳性菌（如葡萄球菌）、革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）、墨汁、碘酒、95%乙醇、碘液、革兰染色试剂盒、显微镜等。
方法：1. 取一片清洁的玻璃片，用酒精棉球擦拭干净，标记好样本编号。
2. 取一根无菌的接种环，在无菌条件下取一部分革兰氏阳性菌涂抹于玻璃片的一侧，用另一根无菌接种环取一部分革兰氏阴性菌涂抹于玻璃片的另一侧。
3. 将玻璃片放在通风处晾干，然后用火烧消毒。
4. 将墨汁涂抹在细菌上，静置1分钟后用水冲洗干净。
5. 用碘酒浸渍1分钟，倒去碘酒，用95%乙醇洗涤10秒钟，然后用水冲洗干净。
6. 最后用碘液浸染30秒钟，然后用水冲洗干净，晾干后即可进行观察。
实验结果：观察革兰氏阳性菌在显微镜下呈紫色，球状或椭圆形，细胞壁较厚，没有外膜；而革兰氏阴性菌在显微镜下呈红色，细胞形态多样，细胞壁较薄，有外膜。
两者在染色后呈现出明显的形态差异。
实验讨论：革兰氏染色是细菌学中的一种重要染色方法，通过染色后的观察可以初步判断细菌的分类，对于细菌的形态特征有着重要的参考价值。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后呈现出不同的颜色和形态特征，这与其细胞壁的结构有关。
革兰氏阳性菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖组成，而革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的脂多糖，这也是它们在染色后呈现不同颜色的原因。
结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色实验，并观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌分类方法，可以帮助我们初步了解细菌的结构和分类。
对于进一步的细菌鉴定和分类有着重要的意义。
实验注意事项：1. 在进行实验前要做好无菌操作，避免细菌的外源污染。
2. 实验中的染色试剂要注意保存，避免受到光照和高温影响。
3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的放大倍数，以便更清晰地观察细菌的形态特征。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验名称：细菌的革兰氏染色实验
实验目的：通过细胞壁结构的不同，观察细菌的革兰氏反应，了解细菌的形态特征及分类情况。
实验原理：细菌细胞壁的结构不同，根据革兰氏染色方法可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，其中革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，通过观察染色后的细菌颜色能够大致了解细菌的分类情况。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂（含靛派液、碘酒、脱色剂、碱性洗涤液）
2. 外部消毒液、无菌采样棒、无菌平板
3. 革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）
4. 革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）
实验步骤：
1. 将需要实验的细菌分别接种于无菌平板上。
2. 用外部消毒液将无菌采样棒消毒并晾干。
3 .取一个无菌采样棒分别在革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的菌落上轻轻刮取，避免沾到无关菌种。
4. 将采样棒沾有菌落的一端放入一滴靛派液中浸润，再在菌液上加2-3滴碘酒，静置1分钟，使靛派液和碘酒渗透到其内部。
5. 倒掉靛派液和碘酒，用脱色剂加水洗涤液一一洗去染色剂，每次洗涤2-3秒，规定洗4次，每次可以轻轻甩去液体。
6. 最后观察染色后的细菌颜色，革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。
实验结果：本次实验观察到革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）染后呈紫色，革兰氏阴性菌（大肠杆菌）染后呈红色。
实验结论：通过细菌的革兰氏染色实验，发现革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，这种染色方法为快速鉴别大肠杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌提供了简单、快捷的方法。
实验四细菌革兰氏染色
再见
涂片染色程序： 涂片 自然干燥 固定 干燥 镜检
染色
大肠杆菌、枯草杆菌 水
革兰氏染色可将所有的细菌分为两大类，蓝 色的革兰氏阳性菌和红色的革兰氏阴性菌。 是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。
革兰氏染色步骤为：紫、碘、酒、红四步。
1、草酸铵结晶紫染色1-2 min（碱性染料着 染）→水洗； 2、革兰氏碘液染1-3 min（媒染剂媒染） → 水 洗； 3、酒精脱色30s-1 min（脱色剂） →水洗； 4、稀释的石炭酸复红10-30s（复染） →水 洗。 →干燥→镜检。
革兰氏染色时注意事项：
1、要用幼龄培养物作革兰氏染色； 2、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳 性
革兰氏染色原理： 细菌细胞壁的化学组成和结构
不同 。
革兰氏阳性菌：细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的
肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用， 使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分 子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈 现紫色。
95% 酒精
脱色 20~30s
结草 晶酸 紫铵
初染 1min
媒染 碘 2-3min
液
思考题：
1、革兰氏染色的关键步骤是什么？ 2、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作 正确，结果可靠？ 3、进行革兰氏染色时注意那些事项？ 作业：原理、方法、结果、分析讨论及绘图 绘图：绘出用革兰氏染色法染出的细菌形态图 要求：视野要圆；细菌的大小要合理；并写出菌名 及放大倍数；用铅笔。标出染的细菌种类及颜色。
革兰氏阴性菌：细胞壁肽聚糖层薄，网状结构交
联少，类脂含量较高， 经乙醇处理后，类脂被溶解， 细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合 物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭
实验三 细菌的革兰氏染色
实验三细菌的革兰氏染色一、目的：1.了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
2.对比革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和芽孢经过革兰氏染色之后的不同。
二、原理：细菌细胞壁成分不同，可分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。
革兰氏阳性菌具有很厚的肽聚糖壁，在碘液处理后结晶紫与碘液的复合物会在乙醇对细胞壁脱水后被肽聚糖壁保留，不容易被乙醇洗出，细胞壁呈蓝紫色。
而革兰氏阴性菌不具有很厚的肽聚糖壁，而且脂质很多，因此复合物很容易被能溶解脂质的乙醇洗出，最后经过番红复染呈现红色。
以对处于对数期的菌体染色为宜。
三、材料：1.菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）2.染料：草酸铵结晶紫染液，卢哥氏染液，95%酒精，番红染液3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，擦镜纸，吸水纸，二甲苯，香柏油，接种环，酒精灯四、实验步骤：1.涂片：取一个经过灭菌的载玻片，烘干，滴加三滴无菌水（间隔尽量大）。
点燃酒精灯，充分灼烧接种环。
在火焰附近拔出试管塞，分别灼烧试管口和塞子，使用冷却的接种环从中刮取少量群体，在一滴无菌水中涂匀。
如是制作纯种大肠杆菌、纯种金黄色葡萄球菌和混有杂菌的大肠杆菌的涂片，干燥固定。
2.染色：（1）初染：加草酸铵结晶紫染液一滴覆盖于涂片处约一分钟，水洗；（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖一分钟，水洗；（3）脱色：倾斜载玻片，并衬以白背景，用95%的乙醇滴洗直至流出的乙醇不带紫色为止，立即用水冲净乙醇；（4）复染：用番红染液覆盖一分钟（可适当延长时间至2分钟），水洗，风干；（5）镜检：使用低倍镜和高倍镜将需要观察的位置放在视野中央，用沾有二甲苯的擦镜纸和干净擦镜纸擦洗油镜，在涂片上滴加香柏油，在油镜下观察，拍照。
（6）清理：整理桌面，将显微镜复位，废片放入废片缸内。
五、结果与讨论本次实验的成败我认为主要有这几个方面：首先，涂片的时候一定只能刮取少量菌体，而且不能带起培养基，否则会比较严重地影响观察。
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? 一、目的： 学习细菌的革兰氏染色法。
二、原 理
? 革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家所创立的。革兰 氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革 兰氏阴性菌（G—）两大类，该染色法所以能将细菌分为G+ 菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所 决定的。
革兰阳性菌细胞壁的化学组成
N-乙酰胞壁酸
N-乙酰葡萄糖胺
四肽链 五肽桥
β -1,4糖苷键
肽聚糖（15-50层）
细胞膜（双层脂质 蛋白嵌镶）
脂质
蛋白质
革兰阴性菌细胞壁的化学组成
脂蛋白
脂质双层 脂多糖
蛋白质
外膜 肽聚糖（1-3层） 细胞膜 脂质
革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁
区别要点
革兰阳性菌
革兰阴性菌
肽聚糖组成 聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥 聚糖骨架、四肽侧 链
? （4）结晶紫染色 ：将玻片置于废液缸玻片搁 架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶 紫染色液染色1分钟；水洗：倾去染色液， 用水小心地冲洗。
? （5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水 洗去碘液。
? （6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇 脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。
? （7）复染：滴加复红复染3-5min；水洗： 用水洗去涂片上的复红染色液。
结晶紫
1
2
碘液 酒精
3？ 4
复红
三、实验器材
? 1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和葡萄 球菌。
? 2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒 精、石炭酸复红 、蒸馏水、乙醚-乙醇混 合液、香柏油。
? 3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、 酒精灯、擦镜纸、显微镜。
四、实验方法：
（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中 央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌 涂片，做成浓菌液，注意取菌不要太多。 ? （2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火 焰上方文火烘干。 ? （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通 过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
? （8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。
? （9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍， 最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染 色反应性。
革兰氏阳性杆菌
革兰氏阴性杆菌
（10)实验完毕后的处理：
? ①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净， ? a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 ? b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合液（二甲
苯）将镜头擦2-3次。 ? c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意
擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心 轻拿，按号放入显微镜柜中。 ? ②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干 净，放入回收容器内。
五、注意事项
? 1.革兰氏染色成败的关键是 酒精脱色 。如脱色过
度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏 阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用 量多少等因素的影响，难以严格规定。 ? 2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后（冲 反面），应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀 释而影响染色效果。来自肽聚糖层数 肽聚糖含量
强度
可多达50层
仅1-2层
占细胞壁干重50%-80% 占细胞壁干重5%-10%
较坚韧，三维立体结构 较疏松，二维平面结构
磷壁酸
有
无
外膜
无
有
青霉素、溶菌酶
敏感
不敏感
? G+菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网格结构紧密， 含脂量低，当被酒精脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层 网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了不溶性结 晶紫-碘复合物的逸出，还是原来的颜色； Gˉ细菌的 细胞壁肽聚糖层较薄，含量较少，而脂类含量高，当 酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁透性增大，结晶 紫-碘复合物也随之被抽提出来，故 Gˉ细菌细菌菌体 呈复染液的红色。