鸡大肠杆菌病病原菌的分离鉴定及药敏试验
大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案
鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。
1 病料采集1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。
1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。
1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。
将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。
都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。
将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。
2 菌的分离培养及鉴定2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。
培养基：A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1），B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。
），C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。
2．2 样品触片镜检涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。
2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。
2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。
鸡大肠杆菌病的分离鉴定及药敏试验
２ ． １ 临床 观察
观察发病鸡群ｌ 临床症 状 ． 同时 对 病 死鸡 进 行 剖 检 ， 观察其病理变化 ， 详
实记录。 ２ － ２ 病 料 涂 片 染色 镜 检 将 病 料 进 行 触 片，进 行 革 兰 氏 染 色， 镜检。 ２ ． ３ 细 菌 的分 离 培 养 无 菌采 集 病 死 鸡 的 气 囊 、 心血 、 肝
牧 兽 医， ２ ０ ０ ９ （ ３ ６ ） ： Ｉ ５ ７
因 素 均可 促 发 或 加 重 大 肠杆 菌病 。 现
将 一 例鸡 大肠 杆 菌 病 的 分 离 与 鉴 定情 况 报 告 如下 ： ２ ０ １ ３ 年４ 月１ １ 日． 大 连 市 某 鸡 场 海 兰 蛋 鸡２ ８ ０ ０ 只 ，从 １ ９ ０ １ ３ 龄 开 始 陆续
９ ２ －９ ４
将 接种斜 面培 养１ ８ ～ ２ ４ ｈ 的 各 菌 株 菌 液 ，移 种 于 三 糖 铁 和葡 萄 糖 、 乳 糖、 麦芽糖 、 甘露醇 、 蔗糖发酵培养基 ， 并 接 种 于蛋 白胨 水 、 葡 萄 糖 蛋 白 胨水 、
【 ２ 】 田树飞， 李子平． 鸭 疫 里 默 氏杆 茵 病 原 与 防 治 研 究 进 展 ．安 徽 农 业 科 学 ， ２ ０ ０ ７ （ ２ ｏ ） ：
１ ６ ０－ｌ ６ １ ．
病混合或并 发感染而使 死亡率 升高 。
有研 究表 明 ，辽 宁 地 区 以５ 月份到９ 月
【 ３ 】 罗映 霞， 余 双祥． 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 病 的 发
Ｔ Ｅ ／ 卡 那 霉 素Ｋ Ａ Ｎ 均 耐药 ， 提 示 这 些 药
物 不 能 用 于该 病 的防 治 。 在 大 范 围 发 病 时 可 以先 用 头 孢 类 药 物 进 行 治疗 。
安丘市鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
上鸡 大肠 杆 菌病 可 表现 为 精神 沉 郁 、消瘦 、腹 泻和 呼 吸 困难等 ， 病 理 剖检 表 现为 心包 炎 、肝周 炎 、气 囊炎 、脐炎 、关 节 炎 等 ，发 病 率 高 ，死 亡率 也 高 。此 外 ，大 肠杆 菌 可与 其他 呼 吸 道疾 病 ，如 慢 性 呼 吸道 病混 合感 染 而使 鸡 的死 亡 率升 高 。在 引起 鸡 发 病 的细 菌性 病 原 中 ，大 肠 杆 菌病 占据 了首 位” 。 由于 大肠 杆 菌 血 清型 众 多 ，不 同血 清型 大肠 杆 菌 之 间无交 叉 保护 性 ，因此 ，主要 通过 抗 菌 药 物来 防 治大 肠杆 菌 病 。然 而 ，抗 生素 的使用 不 当会 导 致细 菌 产 生 耐药 性 。 随着 近年 来 我 国养 殖业 的快 速 发展 ，以及 抗 菌药 物 在 鸡 大肠 杆 菌 临床 治疗 中 应用 率 的逐 渐提 高 ，大 肠 杆菌 的 耐药 性 问题 也逐 渐 引起 了人们 的关 注 。为 了更好 地 了解 安 丘地 区引起 鸡 发病 的致 病 性大 肠杆 菌 的 药物 敏感 性 ，以指 导该 地 区养 鸡 中合 理 用 药 ，本 试 验 对 临 床 上 疑 似 鸡 大 肠 杆 菌 病 的 病 料 进 行 了分 离 鉴
取分 离 菌 肉汤 培养 物 进行 葡 萄糖 、乳糖 、麦 芽糖 、甘露 醇 、 蔗糖 的发 酵 试验 ， 同时进 行 吲 哚 、ＭＲ、Ｖ Ｐ 、柠 檬 酸 盐 利用 试 验
和硫 化 氢试 验 。将 细 菌分 别 接种 到 相应 的 微量 发 酵管 中 ，置 ３ ７ ℃ 培养 。糖 发 酵试 验在 ２ ４ ｈ 观察 结果 ，其 他 生化 试验 在４ ８ ７ ２ ｈ Ｎ观 察 结果 。
鸡大肠杆菌病病原的分离及药敏试验
ｆ ２ ６ 药敏试验 ．．
用灭菌环取大肠杆菌纯培养物， 置于２ｍ Ｌ
灭菌生理盐水中 ， 用灭菌玻棒 充分混匀 ， 之后用玻棒蘸取稀释
液均匀涂布于普通平板 上 ， 室温干燥后将 药敏片贴于平板 经
上， 每板 ４片 ，７℃培养 ２ ， ３ ４ｈ 观察结果 。 １２ ７ 动物致病性试验 ．．
摘要 ： 山东 省某 鸡场 的病死鸡 中分 离得 到疑似大肠杆菌 的菌株 ， 从 并对该 菌进行 分离鉴定 、 化试验 、 生 致病性试 验和药敏试验 。结果表 明 ， 分离菌对菌必治 、 先锋噻肟 、 先锋 必、 庆大霉素高度敏感 ， 对阿米卡星 、 氧哌 嗪青霉素 中度敏
感， 对链霉素 、 氨苄青霉素 、 复方新诺 明不敏感 。说 明该鸡 场出现了耐药性的致病性大肠杆菌。
类 生产 中危 害最 为严重 的传染病 之一 ， 该病 主要通过 消化 道 和呼吸道传播 。禽大肠杆 菌病 以幼年雏 和青年雏 发生较 多 ， 发病较早 的可以提前到 ４日龄 ， 常 １ 通 月龄发病较多 ， 年家 成 禽也有发生 。该病 引起 的生长 发育 迟缓 、 生产性 能下 降 、 饲料报酬下 降以及药费 、 死亡率 增加 的现 象给养殖 业造成 了 极 大的经济 损失 ； 同时 ， 禽大肠 杆菌病 还会 与其他 呼吸 系 统疾病混合感染 ， 造成家禽大 面积死亡 ， 有的甚至直接诱发新 城疫 、 禽流感等危 害性极大 的疾病 ， 造成更大 的经 济损失 。我 国每年 因大肠杆菌病死 亡 的鸡达 ３１０多万羽 ， ７ 经济损 失达 ３亿多元 。０ ０年 ６月 ， ２１ 山东 省某 鸡场 ４ ０日龄 肉鸡 出现个 别死亡现象 ， 解剖发 现病死鸡有肝 出血、 死现象 ， 坏 从临床症
２ 结 果 与 分 析
鸡致病性大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验
中 图 分 类 号 ：８ ２６ ￥ ５ ．１ ４ ２
文 献 标 识 码 ：Байду номын сангаас Ｂ
文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （ ０ ）２ ０ ０ — ２ １０ — ０ ０ ２ １ ０ — ０ ３ ０ １
鸡 大肠 杆 菌 病 是 由大肠 杆 菌 的某些 致 病 性 血清 型 引
临床 剖检 有典 型心 包炎 、 周炎 、 肝 气囊炎 或 卵黄 性腹 膜炎 ，
疑 似 为 大 肠 杆 菌 感 染
１２ 试 剂 ． ・
分 离 、 定 ， 到接 种后 ７ｄ为止 。７ｄ后仍 存 活 的鸡 进行 鉴 直 解 剖 ．观 察病 变 作 细菌 分离 鉴 定 根 据 鸡 的死 亡 数 和病 变 程度确 定 分离株 的致 病性 １３ ．． 药 敏 试验 ４ 按 ＷＨ Ｏ推 荐 的 Ｋｒｖ Ｂ ｕ ｒ 片 扩散 ｉ — ａｅ 纸 ｂ
加 大肠 杆 菌病 给养禽 业造 成 了严 重的 经济 损失 ． 国每 我 年 因大 肠杆 菌病 造成 的经 济损 失达 ３ 多元 ． 亿 而且还 有增
加 的 趋 势 … 据 对 南 阳 市 及 周 边 主 要 养 禽 集 中 区 及 兽 医 门
诊 的调查 ． 规模 养禽场疫 病 的发 生 以大肠 杆菌病 居首位 。 由 于其 血清型 复杂 ． 耐药菌株 不断增 加 ． 给防治工 作带 来 了巨
苯尼 考 等有 一定 的 耐药 性 对 头孢 噻肟 、 丁胺 卡那霉 素 、 壮 观霉 素 和新 霉素 较 敏感
３ 讨 论 ３１ 血 清 型 分 析 ．
是卫 生 状 况差 、 养 密度 大 、 理 粗放 、 毒 不 严格 、 用 饲 管 消 使
鸡大肠杆菌病病原菌的分离鉴定
传 播 ，我 们对 送 检 的 疑 似大 肠 杆 菌 病 例进 行 病 原 的 分离 鉴 定 ，并 对分 离 菌
的 培养 特 性 、致病 力 及 抗 菌 药物 的敏 感 性 进 行 了 研究 ，为 有 效 防 制鸡 大 肠
３５ 药 敏 试 验结 果 分 析 ．
药 敏试 验 得 到 的 结 果说 明 ，三 株
摘 要 无菌采取 山西省长治市蛋鸡场送检的疑似大肠杆菌病的病死鸡的
心血 、 、 、 ， 行病原茵的分离、 定、 肝 脾 肾 进 鉴 生化 试 验 和 动 物 试 验 ， 果 显 示 引 起 该 结
依据 肠 杆 菌 科 细 菌生 化 鉴 定 编 码 手册 ， 号 可能 为 液 化 沙雷 氏菌 ，符 合 １
符合 率 不 高 ，要 想 进一 步 确 定 细 菌 的
种 属 问 题 还 要 采 用 分 子 生 物 学 的 手
段。
酶、 尿素 酶 试 验 。
２４ 致 病 性试 验 ．
进 行 预 防 和 治疗 ，达 到 有效 控 制 疾 病
的 目的 为 了控制 鸡 大 肠 杆 菌在 鸡 群 中的
１２ 细 菌 分 离培 养 ＿
２ １ 病 鸡及 病 死 鸡 的病 理 剖 检 变化 ． 病 鸡 肝 脏 肿 大 、 脆 ， 点 状 坏 死 质 有 灶 ，表 面覆 盖 有 黄 白 色 的纤 维 素 性 渗 出物 ； 脏 肿 大 ， 充 血 、 血 ， 分 鸡 脾 肺 淤 部 肺 脏 有 ｌ ２ｉ ｎ 小 坏 死 灶 ： 肾 脏 肿 一 ｌ大 ｎ 大 。 尿 酸 盐 沉 积 ； 二 指肠 有 出血 性 有 十
细菌对多种药物存在很 高的敏感性 ， 这 与该 养 殖场 极 少 使 用抗 生素 有 很 大 关 系 ， 如 丙 氟 哌 酸 、 那 霉 素 、 霉 比 卡 氯
鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验
鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验作者：荆丽珍来源：《农家致富顾问·下半月》2019年第08期摘要本试验目的是采用6种常用抗菌药物进行药敏试验，再筛选出敏感药物，为预防和治疗大肠杆菌病提供理论依据并指导临床用药。
方法是对送检的病死鸡和濒死鸡进行了剖检、病理学诊断和病原检测，无菌采取的病死鸡组织进行细菌的分离鉴定，并通过药敏纸片法对其纯化培养物进行药敏试验。
关键词大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验鸡大肠杆菌病是由某些致病性血清型大肠埃希菌引起的鸡的不同类型疾病的总称。
大肠杆菌致病性菌株的致病因子是由侵袭力、感染力和致病性这三个主要特征决定。
大肠杆菌主要有菌体抗原、荚膜抗原、鞭毛抗原三个病原类型，这三种抗原形成了众多的血清型。
该菌对外界抵抗力比较弱，一般高压蒸汽灭菌锅121℃30min便可将其杀死，对一般消毒药的抵抗力也很弱，常用的消毒药水均能将其杀死。
本实验对海阳六合鸡场送检的濒临死亡的鸡只和病死鸡进行了解剖检查，并且进行了病理学诊断和病原检测，确诊该海阳鸡场发生了大肠杆菌病。
通过做药敏试验，选择出几种药物，而这些药物通常是对此致病菌比较敏感的，然后進行药物治疗，以此达到控制疫情效果。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料及实验动物所有病料来自海阳六合养殖场送检的疑似大肠杆菌病的病鸡、濒临死亡鸡40只，已经死亡鸡只的死亡时间不超过18h。
实验动物为：20只健康小白鼠和20只7日龄健康雏鸡。
1.1.2 仪器与设备恒温箱，光学显微镜，全自动高压灭菌器，超净工作台，美国微量移液器、剪刀、试管等。
1.1.3 培养基与试剂伊红美兰琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通肉汤培养基、营养琼脂培养基。
卡那霉素、新霉素、庆大霉素、青霉素、链霉素和四环素等药敏片，硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管。
1.2 方法1.2.1 外部观察和病理剖检根据大肠杆菌病的流行病学特点，表现出来临床症状，以及对送检的40只病死鸡和濒临死亡的鸡只进行的病理临床剖检及相关病理症状观察，根据表现出来的相关剖检特征，可以对大肠杆菌病作出初步诊断。
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。
为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。
关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。
1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。
液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。
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［ ］ 淑琴 ， ３杨 梁宏志 ， 屈凤琴 ， 等．鸡病 发生情 况调查 及防制对策 ［ ］ Ｊ．
中国家禽 ，０ ０ ５ ：４— ５ ２０ （ ） ４ ４ ．
试验 的病料均是从具有心包炎 、 肝周炎 、 气囊炎等病理特 征 的病 死鸡身上采集 ， 进行病原 菌的分离培养 、 生化鉴定 、 动 物试验 和药敏试验 ， 共分离到 ４株致病性大肠杆菌 ， 均对沙拉
划线接种 于麦康凯培养基 ，７℃培 养 ２ ， ３ ４ｈ 观察菌 落生长情
况 。在麦康凯培养基上挑取直 径 １～ ｍ桃红 、 ３ｍ 粉红色 的露
珠状 菌落 ， 分别 划线接 种于普 通琼脂 培养基 、 伊红美 蓝培养
基、 普通营养肉汤培养 基 中，７℃培养 ２ ， 行观察 ； ３ ４ｈ 进 挑取
一
［］ ６ 倪语星 ， 秀华 ． 洪 细菌 耐药性 监测 与抗感 染治疗 ［ ．北 京 ： Ｍ］ 人
民军医出版社 ，０ ２４ ５ ． ２０ ：７— ０
［］ ７ 陆承平 ． 医微生物 ［ ．北京 ： 出版社 ，０ １ １５ 兽 Ｍ］ 科技 ２０ ： ． ２ ［］ ８ 路振香 ， 时维静 ， 杨用光 ．中草药 对大肠杆 菌体外 抑菌试 验［ ］ Ｊ．
参考 文献 ：
［］ １ 胡桂学．兽 医微 生物实 验教 程 ［ ．北京 ： Ｍ］ 中国农业 大学 出 版
社 ．０ ６：５—３ ． ２０ ３ ８
可见肝脏肿 大 ， 出血点坏死点 ； 有 肠严重鼓气 ， 心包淤血 ： 出 肺
血， 脾脏淤血 。采取死亡小 鼠心血、 肝和脾接种在普通琼脂平 板及普通肉汤 ，７℃培养 ２ ， 细菌生 长。革兰 氏染色 及 ３ ０ｈ有 生化鉴定表明此菌与接种 细菌 为同种细菌 。说明该菌对小 鼠 具有较强 的致 病 力。Ｂ组饲 养 ７ ｄ后全 部 存 活 ， 检 未 见 剖 病变 。 一 ．
为耐 药 。 ２ 结 果 与分 析 ２ １ 分 离培 养 结果 ．
１ １２ 仪 器设备 ．．
ＨＧ ０ ２型 电热鼓 风干燥箱 ， １１— 南京 实验
仪厂 ； Ｈ ・ １ Ｈ Ｂ １型 电热恒 温培 养箱 ， 门建红 医疗 器 械 厂 ； 厦
ＯＹ Ｐ Ｌ Ｍ ＷＳ—Ｃ 型显 微 镜 。 Ｈ
边缘整齐 、 直径 为 １５～２ ５ｍ ｑ的小 菌落 ； ． ． ｎ 在伊红美 蓝琼脂
上形成紫黑色 、 具有金属光泽的小菌落 ； 在普通琼脂斜 面上为
灰 白色菌落 ； 在普通 肉汤 中呈均匀浑浊 ， 管底有灰 白色沉淀 ，
振荡呈云雾状散开 ， 并有粪臭味。
动物中毒性及营养代谢 性疾病研究 。Ｅ— ａ ：ｎｕｙ ６．Ｏｌ ｍ ｉｆ ｇｏ＠１３ Ｃｆ ｌａ 。
一
２ ４一 ８
江苏农业科学 ２ １ ０ １年第 ３ ９卷第 ３期
表 ２ 分离菌药敏试验抑菌圈大小
２ ２ 形态学观 察结果 ． 革 兰氏染色 镜 检 ， 见 到革 兰 氏阴性 ， 可 两端 钝 圆 ， 约 长 １ ５～ ． ｍ的短 小 杆 菌 ， ． ３ ０ｍ 多单 在 ， 有 ２个 菌体 相 连 ， 偶 无
（ 河南科技学 院动物科学学 院， 河南新乡 ４ ３ ０ ） ５ ０ ３
摘要： 对发病鸡病料进行大肠杆菌病原 菌的采集 分离 鉴定 ， 并进行动物试验及药 敏试 验。结果表 明 ， 该菌 为革 兰 氏阴性短小杆菌 ， 为致病性大肠杆菌 ； 药敏试 验显示沙拉噻呋对该菌全部敏感 ， 对痢特灵 、 利福平 、 氟派酸 、 头孢噻 呋和
卡那霉素 、 庆大霉素部分敏感 ， 其他抗 菌药物完全没有抑制效果 。
关键词 ： 鸡大肠杆菌 ； 分离 鉴定 ； 药敏试验
中图分类号 ： ８８ ３ ￥５ ．１ 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ２—１０ （０ １ ０ ０ ８ ０ １０ ３２ ２ １ ）３— ２ ３— ２
１２ 方 法 ．
群关 系 ， 而且使致病性大肠杆菌对多种抗菌药产生耐药性 ； 另 外， 大型集约化 养殖场饲养密度 过大 ， 风换气不 良 ， 通 饲管用
具及环境消毒不彻底是加速本病流行的因素。对于本病 的防 治应注重预 防， 加强饲养 管理 ， 改善饲喂环境 ， 同时注意免疫 ，
用 药 注 意 产 生 耐 药 性 和 药 物 残 留的 现 象
１２ ３ 生化试 验 将 分离纯 化的细菌在无 菌条件下进 行糖 ．．
发酵试 验 、 甲基红试 验 、 Ｖ—Ｐ试验 、 吲哚试验 、 硫化氢试验 、 尿
素酶试验 、 枸橼酸盐 利用试验检测 。
１２ ４ 致病性试 验 ．． 菌液制备 ： 将分离 菌接种于营养 肉汤 ， 于３ ７℃培养 ２ ， ０ｈ 结果呈均匀混浊 ， 管底有黏性沉淀 ， 液面管
学实验室提供 ； 硫化氢 、 葡萄糖蛋 白胨水 、 白胨水 、 蛋 蔗糖 、
尿素 、 葡萄糖 、 芽糖 、 麦 乳糖 、 柠檬酸盐 、 棉子糖 、 山梨醇 和甘露
验组 ， 用鸡 大肠杆菌 肉汤培养物接种 ， 腹腔注射 ０ ２ｍ ／ ； ． Ｌ 只 Ｂ 组为对照组 ， 腹腔 注射灭 菌生理盐水０ ２ｍ Ｚ只。 ． Ｉ 注射后每隔 兽医 院提 供的初步 确诊
为大肠杆菌病病鸡 ４家病 料。主要表现 为急性败血 症型 、 心 包炎 、 卵管腹膜炎 、 输 肝周炎 、 肠炎和气囊炎 等 ６种病型 。
１ １４ 实验动物 ．．
健康 小 白鼠 ２ ０只 ， 体重 ２ ２ ， ０— ５ｇ 由河南
一
醇１ ２种细菌微量生化反应管 ， 自杭州天河微生物试剂有 限 购
公 司。
段时间观察 １ ， 次 连续 观察 ７ｄ 。剖检病 、 鼠， 死 取死 鼠的肝
脏进行涂片染色镜 检 ， 再将其 接种 于麦康凯琼脂 ， 挑取可疑菌
落进行分离培养 ， 进行观察。 １２ ５ 药敏试验 ．． 药敏 试验参见 文献 ［ ］ ５ 。贴上 纸片后 置 于３ ７℃培养 ２ ４ｈ后观察结果并 测量抑菌圈大小 。 判定标 准： 抑菌圈直径 大 于 １ ｉ ５ｒｎ为高度 敏感 ； ａ 抑菌 圈 直径 在 １ ０—１ ｍ之间为中度 敏感 ； ５ｍ 抑菌圈直径小 于 １ ｍ ０ｍ
鸡大肠杆菌病是 由大肠埃希氏菌的某些血清型菌株所引
起 的一类传染病的总称 。它是 条件性 致病菌 ， 只有一些 特殊
血清型 的大肠杆 菌对人 和动物有 病原性 。该病 的 临诊
１２ １ 分离培养 ．．
无菌采取濒死鸡和死亡 ２ ４ｈ以内具 有败
血症 、 心包炎 、 肝周炎 等病 理变化的鸡心脏 、 肝脏 、 脏 ， 脾 直接
科技学院临床兽 医学 实验室提供 。
分离菌在麦康凯琼脂上形成 红色 、 圆形隆起 、 光滑 湿润 、
收稿 日期 ： １ — １ ０ ２ １ ０ —４ ０ 基金项 目： 十一 五” “ 国家科技重大项 目（ 编号 ： ０ Ｂ Ｋ ２ ２ ） ２ ６ Ａ ０Ａ １ 。 ０ 作者简介 ： 范国英（ ９ ３ ） 女 ， 焦作人 ， １７ 一 ， 河南 副教授 ， 博士 ， 主要从事
病型复杂多样 ， 包括大肠埃希氏菌性败血症 、 气囊炎 、 心包炎 、 卵黄性腹膜炎 、 关节炎 、 炎 、 脐 眼炎 、 肠炎 、 脑病 、 肿头综合征等
许多病型 。该病常易成为其他 疾病 的并 发病或继 发病 ， 各 种应激特别是环境卫 生及饲养管 理条件不 良， 均可 加剧该病 的发生。大量抗 生素长期使用和滥用 ， 导致耐药菌珠的 出现 ，
江苏农 业科学
范国英 ， 刘俊伟 ， 钟
２１ 年第 ３ 卷第 ３ ０１ ９ 期
华， 等．鸡大肠杆菌病病原菌的分 离鉴定及 药敏试验 ［ ］ Ｊ ．江苏农 业科学 ，０ １３ （ ） ２ ３—２４ ２ ｌ ，９ ３ ：８ ８
鸡 大肠杆菌病病原 菌 的分离鉴定及药敏试验
范 国英 ，刘俊 伟 ，钟 华 ，陈俊 杰
１ １ １ 药品与试剂 ．．
药敏 试纸 、 普通 肉汤培养基 、 麦康凯 琼
脂培养基 、 伊红美兰琼脂培养基 、 草酸铵结晶紫 、 革兰 氏碘液 、 石炭酸复红染液 ， 革兰 氏染 色剂 均 由河南 科技学 院临床兽 医
壁有菌环 。 动物试验 ：０只小 白鼠分成 ２组 ， ２ 每组 ｌ ０只。Ａ组为试
［］ ４ 蔡宝祥．动物传染病诊断学［ ］ ４版．北 京： Ｍ ． 中国农业 出版社 ，
２ ０１： ６ —４ ０ ４ ７．
［］ ５ 姚火 春． 兽医微生 物实验指 导 ［ ．２ ． 京 ： Ｍ］ 版 北 中国农业 出版
社 ，０ ２ ２ ２ ． ２ ０ ：０— １
噻呋敏感 。药敏试验结果 显示分离 菌对沙拉 噻呋全部 敏感 ， 对 痢特灵 、 利福平 、 氟派酸 、 头孢 噻呋和卡那霉素 、 庆大霉素部 分 敏感 ， 对其他抗菌药物均 不敏感 。说 明当前鸡 大肠 杆菌 的 耐药谱较广 。不过本次试 验 由于 时间紧 ， 菌株少所得 结果有
培 养基变黄 或阳性 反应 ； ” “一 表示阴性 反应 。
２ ４ 致 病 性 试 验 结 果 ．
为中度敏感； 抑菌圈直 径小于 １ ｎ ０ｌ ｍ为耐药。
是 由于鸡场长期大量使用抗 生素 ， 不但破坏 了肠道 正常 的菌
Ａ组 ４只小 鼠 ６ ｈ内死亡 ， ２ ６只 ４ ｈ内死亡 。病 理剖检
芽孢 。
２ ３ 生 化 试 验 结 果 ．
生 化 试 验 结 果 见 表 １ 由 表 １可 知 分 离 菌 生 化 鉴 定 结 。
果， 符合大肠杆菌的特性 。
表 １ 分离菌生化鉴定结果
注： ①” “ 表示产酸产 气 ， 培养基 变黄含 有气泡 ； “＋” 表示 产酸 ，
注： 抑菌圈直径大于 １ ｍ ５ ｍ为高度敏感； 抑菌圈直径在 Ｉ ５ｌｎ Ｏ一１ ｌ 之间 ｌ ｌ
典型菌落接种于普通琼脂斜 面 ，７℃培养 ２ 。 ３ ４ ｈ 以备 生化试