TRIZOL同时提取RNA和蛋白

TRIZOL说明书

trizol 中文说明书trizol 试剂是一种从组织及细胞中提取总rna的专用试剂。

这种试剂是一种酚和硫氰酸胍的单相溶液，是将chomczynski 和sacchi发明的一步rna提取法的改进。

在样品匀浆或分析过程中，trizol 试剂可在分裂细胞及溶解胞膜的同时保持rna的完整。

在匀浆后加入氯仿，可将溶液分为水相和有机相。

rna均在水相中。

吸取水相加入异丙醇，得到rna沉淀。

去除水相后，样品中的dna及蛋白质可通过进一步连续的沉淀而得到。

中间相加入乙醇可沉淀dna而有机相加入异丙醇则能沉淀出蛋白质。

dna的再纯化可能对标化样品的rna产量有作用。

2．这一技术可以用于人，动物，植物或细菌株的微量组织（50—100mg）及细胞（5×106），也可以用于大量检材（≥1g）及细胞(﹥107).该方法简便易行,可用于同时检测大量样品,全部过程1小时内可以完成.用trizol 试剂分离的rna 没有dna及蛋白质成分.这种rna可用于northern印迹分析,斑点杂交,多聚(a)+检出及vitro转移, rna酶蛋白分析及分子克隆.用于pcr反应时,当两个引物位于同一外显子时应用扩增特异dna酶i处理提取出的rna.3． trizol 试剂可用于分子量从大到小的各种rna的提取.例如,大鼠肝脏提取出的rna,经琼脂糖凝胶电泳,eb染色后可显现出7kb和15kb的大分子量的rna谱带(包括mrna和hnrna), 位于～5kb(28s)和～2kb (18s)的两条主要的核糖体rna谱带及大小在0.1kb-0.3kb之间的低分子量rna(trna,5s).分离出的rna当溶于双蒸水中时a260/280为1.6-1.8之间.每毫克组织所能提取的rna量约为:肝和脾,6-10μg;肾,3-4μg;骨骼肌和脑,1-5μg;胎盘,1-4μg.从1×106培养细胞中提取的rna量约为:上皮细胞,8-15μg;成纤维细胞,5-7μg.需要但未提供的试剂:1. 氯仿2. 异丙醇3. 75%乙醇(depc处理水配制)4. 无rna酶水或0.5%sds溶液(制备无rna酶水:将水倒进无rna酶的玻璃容器中,加入depc至0.01%(v/v)放置过夜后高压灭菌). sds溶液必须用depc处理后高压灭菌的水配制.rna分离提取步骤:1．匀浆a. 组织每50-100mg组织加入1ml的trizol 试剂后用匀浆机或玻璃棒匀浆。

trizol法提取rna的原理

trizol法提取rna的原理
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，它是一种单步法，可以同时提取RNA、DNA和蛋白质。

该方法基于酚和胍的化学性质，通过酚的溶解性和胍的离子性来分离RNA、DNA和蛋白质。

Trizol法的原理是利用酚的溶解性质将细胞膜和细胞核膜破坏，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

然后，加入氯仿，使RNA、DNA和蛋白质分为两个相，RNA在上层，DNA和蛋白质在下层。

接着，加入异丙醇，使RNA从上层转移到异丙醇层中，形成RNA沉淀。

最后，将RNA沉淀用乙醇洗涤，去除杂质，得到纯净的RNA。

Trizol法的优点是简单、快速、高效，可以同时提取RNA、DNA 和蛋白质，适用于多种样品类型，如细胞、组织、血液、尿液等。

此外，该方法提取的RNA质量好，适用于后续的实验操作，如RT-PCR、Northern blot、RNA测序等。

但是，Trizol法也存在一些缺点。

首先，该方法对RNA的长度和结构有一定的限制，不适用于长链RNA和某些结构特殊的RNA。

其次，该方法对样品的处理和操作技巧要求较高，容易受到外界因素的影响，如温度、湿度、pH值等。

最后，该方法的成本较高，需要使用较多的试剂和设备。

Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用酚和胍的化学性质分离RNA、DNA和蛋白质。

该方法具有简单、快速、高效等
优点，但也存在一些缺点。

在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的RNA提取方法。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizoｌ法使用步骤一、分离纯化得基本原理研究基因得表达与调控时常常要从组织与细胞中分离与纯化ＲＮA。

ＲNA质量得高低常常影响cＤNA库,ＲT-PCＲ与Ｎorthern Ｂloｔ等分子生物学实验得成败。

Ｔrizol就是一种新型总ＲNＡ抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出得核酸酶。

二、用户需自备得试剂与材料无水乙醇、氯仿、Ｇlycｏgen(可能需要)、 1、５ｍｌ Eppeｎｄｏrf管(ＲNase-frｅe)、 Tips(ＲNase－free)三、准备工作RNａse酶非常稳定,就是导致ＲNＡ降解最主要得物质。

它在一些极端得条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。

用常规得高温高压蒸气灭菌方法与蛋白抑制剂都不能就是ＲＮase完全失活。

它广泛存在于人得皮肤上,因此,在与RＮA制备有关得分子生物学实验时,必须戴手套。

RNase得又一污染源就是取液器,根据取液器制造商得要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用ＤEPC（焦炭酸二磷脂,一种ＲＮａse抑制剂)配制得7０％乙醇擦洗取液器得内部与外部,基本达到要求。

取ＲＮａｓｅ－free得物品时必须戴手套。

1、料制品得处理尽可能使用无菌,一次性塑料制品，已标明RNasｅ-Fｒee 得塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下:1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEＰＣ使DEＰC得终浓度为０、1%。

注意:DEP Ｃ为剧毒物,活性很强，小心在通风柜中使用。

2)处理得塑料制品放入一个可以高温灭菌得容器中,注入ＤEPC水溶液,使塑料制品得所有部分都浸泡到溶液中。

3)在通风柜中室温处理过夜。

4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已ＤEＰＣ水处理过得塑料制品得烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适得温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻与金属物品250°C烘烤3小时以上。

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质

TRIzol法同时提取RNA,,蛋白质TRIzol法同时提取RNA,,TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\\．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收；用异丙醇沉淀有机相可回收。

TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。

对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。

分离的总RNA无和污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。

在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。

共纯化的可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。

可用于Western Blotting。

规格：100ml 黄色透明液体储存条件：2-8℃避光保存12个月注意：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。

如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。

忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

预防RNase污染注意事项：1.经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。

2.使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。

3.RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。

贴壁细胞 trizol提取法

贴壁细胞 trizol提取法
贴壁细胞是一种粘附在培养皿壁上的细胞，通常比悬浮在培养基
中的细胞更难被分离和提取。

为了从贴壁细胞中获取RNA或DNA样品，常使用Trizol提取法。

Trizol提取法是一种常用的细胞裂解方法，可以同时提取RNA、DNA和蛋白质。

其原理是通过Trizol试剂的作用，使细胞裂解，使
RNA/DNA从细胞溶胶中完全释放出来，然后通过酒精沉淀和洗涤步骤进行纯化。

首先，收集贴壁细胞，并用PBS缓冲液洗涤去除细胞培养基。

然后，加入适量的Trizol试剂，充分裂解细胞，使RNA/DNA溶于试剂中。

待细胞完全裂解后，加入适量的氯仿/异丙醇混合液，使RNA/DNA分离
为上层水相和下层有机相。

接下来，将上层水相转移到新的离心管中，并加入等体积的异丙醇。

轻轻混合后，离心沉淀RNA/DNA。

然后，将上清液去除，并用70%
乙醇洗涤沉淀。

最后，用RNA/DNA溶解缓冲液重溶并保存。

Trizol提取法是一种快速、高效的细胞裂解和RNA/DNA提取方法，适用于贴壁细胞样品的处理。

通过该方法，可以获得高质量的RNA/DNA 样品，从而进行后续的分子生物学实验和分析。

TRIZOL试剂提取细胞RNA和蛋白步骤

TRIZOL试剂提取细胞RNA和蛋白步骤
1. 0.3-0.4 ml Trizol 加入每个6 cm皿，刮取细胞到离心管中，静置5-10分钟。

2. 加入0.1 ml氯仿，震荡，静置10分钟，4度13000 rpm 离心15分钟。

3. 取上清用于提取RNA，下层用于提取蛋白。

上清的处理(RNA)：
1、上清打入新的RNase free离心管，加等量异丙醇，震荡，静置10分钟。

2、4度12000 g离心15分钟，弃去上清（倒掉，枪头在管口吸），沉淀为RNA。

3、加入1 ml 75% 乙醇（现配，用DEPC水稀释无水乙醇）洗涤沉淀。

4、4度12000g 离心5分钟，弃去上清（倒掉，枪头在管口吸），管口倒置，在卫生纸上，晾干15分钟。

5、加入20微升DEPC水溶解沉淀，微量分光光度计测质量。

下层的处理(蛋白)：
1、把中层吸掉，下层液加200微升无水乙醇混匀，静置5分钟，4度5500rpm离心10分钟，取上清移入新的离心管。

2、往新的离心管液体里加入1毫升异丙醇，充分混匀，室温静置10分钟，4度13000rpm 离心10分钟，弃上清。

3、加入1毫升0.3 mol/L 95%乙醇盐酸胍溶液，室温静置20分钟，4度13000rpm离心10分钟，弃上清。

4、重复步骤3 2次
5、加入1毫升无水乙醇，室温静置20分钟，4度13000rpm离心10分钟，弃上清。

6、室温干燥15分钟，用现配1% sds溶液溶解蛋白，不溶物以4度12000rpm离心10分钟去除。

7、上清液与5x loading buffer混匀，煮沸10分钟，存于-20度冰箱待用。

trizol提取rna的原理

trizol提取rna的原理Trizol提取RNA的原理RNA是生物体内的重要分子之一，可以传递遗传信息、参与蛋白质合成等生命活动。

因此，RNA的提取对于生物学研究具有重要意义。

Trizol是一种常用的RNA提取试剂，本文将介绍Trizol提取RNA 的原理。

Trizol是由酚和胍组成的一种试剂，能够同时提取RNA、DNA和蛋白质。

其基本原理是利用酚的特殊溶解性质，使RNA在酚相中分离出来。

具体步骤如下：1. 细胞破碎需要将待提取RNA的样品（如细胞、组织等）用Trizol等试剂破碎。

这一步的目的是打破细胞壁和细胞膜，使RNA暴露在外。

Trizol中的胍可以去除RNA分子上的蛋白质质量，避免RNA被蛋白质干扰。

2. 分离RNA将样品中的RNA与Trizol中的酚混合，使RNA分子在酚相中溶解。

酚可将RNA分子周围的水分子脱水，从而使RNA分子聚集在一起。

此时，RNA分子会与DNA和蛋白质分子分别在不同的液相中。

3. 沉淀RNA为了分离RNA纯化，需要将RNA从酚相中沉淀出来。

这一步需要加入异丙醇，异丙醇能够将RNA分子从酚相中析出。

异丙醇浓度越高，RNA得到沉淀的几率越大。

4. 洗涤RNA将RNA沉淀后，需要用75%的酒精洗涤，去除异丙醇等离子体残留。

此外，需要加入DEPC处理的水来去除RNase（核酸酶）等污染物，保证RNA的完整性和纯度。

5. 溶解RNA将RNA沉淀物用TE缓冲液等稳定性较好的溶液进行溶解，即可得到高质量的RNA样品，用于后续实验。

总的来说，Trizol提取RNA的原理是通过酚和胍的组合，将RNA 分子从其他分子中分离出来。

该方法具有操作简单、高提取率、可同时提取DNA和蛋白质等优点。

但也存在一些局限性，如RNA完整性不能完全保证、RNA含量较低时易出现污染等。

因此，在具体实验中需要结合实际情况选择合适的RNA提取方法。

Trizol中文说明书

Trizol 中文说明书TRIzol 试剂是一种从组织及细胞中提取总RNA的专用试剂。

这种试剂是一种酚和硫氰酸胍的单相溶液，是将Chomczynski 和Sacchi发明的一步RNA提取法的改进。

在样品匀浆或分析过程中，TRIzol 试剂可在分裂细胞及溶解胞膜的同时保持RNA的完整。

在匀浆后加入氯仿，可将溶液分为水相和有机相。

RNA均在水相中。

吸取水相加入异丙醇，得到RNA沉淀。

去除水相后，样品中的DNA及蛋白质可通过进一步连续的沉淀而得到。

中间相加入乙醇可沉淀DNA而有机相加入异丙醇则能沉淀出蛋白质。

DNA的再纯化可能对标化样品的RNA产量有作用。

2．这一技术可以用于人，动物，植物或细菌株的微量组织（50—100mg）及细胞（5×106），也可以用于大量检材（≥1g）及细胞(﹥107).该方法简便易行,可用于同时检测大量样品,全部过程1小时内可以完成.用TRIzol 试剂分离的RNA 没有DNA及蛋白质成分.这种RNA可用于Northern印迹分析,斑点杂交,多聚(A)+检出及Vitro转移, RNA酶蛋白分析及分子克隆.用于PCR反应时,当两个引物位于同一外显子时应用扩增特异DNA酶I处理提取出的RNA.3． TRIzol 试剂可用于分子量从大到小的各种RNA的提取.例如,大鼠肝脏提取出的RNA,经琼脂糖凝胶电泳,EB染色后可显现出7kb和15kb的大分子量的RNA谱带(包括mRNA和hnRNA), 位于～5kb(28s)和～2kb (18s)的两条主要的核糖体RNA谱带及大小在0.1kb-0.3kb之间的低分子量RNA(tRNA,5s).分离出的RNA当溶于双蒸水中时A260/280为1.6-1.8之间.每毫克组织所能提取的RNA量约为:肝和脾,6-10μg;肾,3-4μg;骨骼肌和脑,1-5μg;胎盘,1-4μg.从1×106培养细胞中提取的RNA量约为:上皮细胞,8-15μg;成纤维细胞,5-7μg.需要但未提供的试剂:1. 氯仿2. 异丙醇3. 75%乙醇(DEPC处理水配制)4. 无RNA酶水或0.5%SDS溶液(制备无RNA酶水:将水倒进无RNA酶的玻璃容器中,加入DEPC 至0.01%(v/v)放置过夜后高压灭菌). SDS溶液必须用DEPC处理后高压灭菌的水配制.RNA分离提取步骤:1．匀浆a. 组织每50-100mg组织加入1ml的TRIzol 试剂后用匀浆机或玻璃棒匀浆。

trizol成分

trizol成分Trizol是一种广泛用于药学和生物学领域的化学试剂，最初用于从细胞和组织中提取RNA，后来逐渐被用于DNA和蛋白质的提取。

Trizol由多个成分组成，包括酚、异硫氰酸盐砜和氯仿。

下面将详细介绍这些成分及其在Trizol中的作用。

第一个成分是酚。

酚是一种疏水性有机化合物，具有一定的抗氧化性能。

在Trizol中，酚主要用于离体细胞和组织的裂解和去蛋白化。

酚的疏水性能使其能够与细胞膜脂质相互作用，破坏细胞膜，从而释放细胞内的核酸、蛋白质和其他细胞成分。

第二个成分是异硫氰酸盐砜。

异硫氰酸盐砜是一种亲水性有机化合物，具有相对较强的还原性。

在Trizol中，异硫氰酸盐砜主要用于从细胞和组织中提取DNA和RNA。

与酚结合后，异硫氰酸盐砜能够破坏细胞核膜和线粒体膜，释放细胞核和线粒体内的DNA和RNA。

此外，异硫氰酸盐砜还具有还原性，在提取过程中可以保护核酸免受氧化损伤。

第三个成分是氯仿。

氯仿是一种有机氯化合物，具有较强的脂溶性和挥发性。

在Trizol中，氯仿主要用作有机溶剂，用于提取DNA和RNA分离出的有机相。

氯仿的脂溶性使其能够与异硫氰酸盐砜和酚形成两相体系，从而有效地分离核酸和蛋白质。

此外，氯仿的挥发性也有助于溶液中有机相的脱水和浓缩。

除了上述主要成分外，Trizol中还包含盐酸、EDTA和蒸馏水等辅助成分。

盐酸主要用于调节Trizol溶液的pH值，使其适合DNA和RNA的提取。

EDTA是一种螯合剂，能够与金属离子形成络合物，从而避免金属离子对核酸的损伤。

蒸馏水则用于稀释和调节Trizol溶液的浓度。

总结起来，Trizol是一种广泛应用于生物学和药学领域的化学试剂，主要用于DNA和RNA的提取。

其主要成分包括酚、异硫氰酸盐砜和氯仿，通过破坏细胞膜、释放细胞内核酸，并通过两相体系分离核酸和蛋白质。

辅助成分包括盐酸、EDTA 和蒸馏水，用于调节pH值、防止金属离子损伤和稀释溶液。

果蝇总RNA和总蛋白的提取及分析

果蝇总RNA和总蛋白的提取及分析摘要：本次实验主要分为两大部分。

第一部分是以果蝇成体为材料，通过Trizol试剂直接从果蝇细胞或组织中提取总RNA，然后进行反转录制备cDNA，最后通过琼脂糖凝胶电泳来测定总RNA和cDNA的纯度，进而来进行分析。

第二部分仍以果蝇成体为材料（有的小组是果蝇幼体），提取果蝇总蛋白，通过SDS-PAGE检测果蝇总蛋白表达，最后对果蝇的蛋白含量进行了分析。

关键字：RT-PCR；cDNA；琼脂糖凝胶电泳；SDS-PAGE1 材料及仪器1.1 实验材料黑腹果蝇成虫2-3d龄，约6只，雌雄均等。

果蝇是一种非常重要的模式生物，通常所指的是黑腹果蝇，学名：Drosophila melanogaster，在分类学上所属动物界，节肢动物门，昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。

果蝇以其繁殖迅速、生长周期短、易于养殖、相对性状丰富、基因组较为简单等显著特点成为了遗传学、分子生物学、发育生物学等重要学科的主要实验动物之一，对果蝇基因组的测序分析也较为透彻，因此，本实验选用果蝇为实验材料，可以使数据更加具有代表性和说服力。

1.2 试剂及仪器1.2.1 试剂O，琼 Trizol裂解液（50mg/ml），氯仿，异丙醇，75%乙醇，RNase free H2O，10×PCR Buffer （含Mg2+），dNTP 脂糖，TAE电泳缓冲液，DNA marker，dd H2（10 mM each），引物：rp49F、rp49R；CG8189F、CG8189R， Taq DNA polymerase （2U/µl），TBS缓冲液（20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, pH7.9），蛋白上样缓冲液，染色液，脱色液1.2.2 器材1.5ml离心管，匀浆棒，高速台式离心机，200µl及1ml微量移液器及吸头，天平，量筒，锥形瓶，微波炉，制胶板，电泳槽，电泳仪，凝胶成像仪，PCR仪，水平摇床等。

trizol法提取rna作用

trizol法提取rna作用
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，主要用于从细胞或组织样本中提取RNA。

它的作用可以从多个角度来解释。

首先，Trizol（也称为TriReagent）的作用是通过离心和相分离的方法将细胞或组织样本中的RNA分离出来。

Trizol中的酚会破坏细胞膜，使得细胞内的RNA得以释放。

随后，氯仿的加入会使得RNA与DNA、蛋白质等其他成分分离开来。

最后，通过异丙醇的加入和离心，RNA会沉淀出来，从而可以用乙醇洗涤和溶解来纯化提取RNA。

其次，Trizol法的作用还涉及到保护RNA不被降解。

在提取RNA的过程中，Trizol会迅速使得RNA与蛋白质和DNA分离，并且在RNA被释放出来的同时，Trizol中的酚和异丙醇会迅速抑制RNA 酶的活性，从而有效地保护RNA不被降解。

此外，Trizol法的作用还在于其高效性和广泛适用性。

它可以用于多种样本类型，包括细胞培养物、动植物组织等，而且能够同时提取RNA、DNA和蛋白质，使得实验效率更高。

同时，Trizol法还可以根据实验需求进行规模化，从微量到大量样本的RNA提取都
可以实现。

总的来说，Trizol法通过破坏细胞膜、分离RNA、保护RNA不被降解以及其高效性和广泛适用性等作用，成为了一种常用且有效的RNA提取方法。

希望这些信息能够帮助你更全面地了解Trizol法的作用。

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)

Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)RNA提取是一种常用的实验技术，它可以用于研究基因表达、蛋白质合成等方面。

而Trizol法是一种常用的RNA提取方法，下面我将详细介绍该方法的实验步骤及原理。

一、实验材料和设备1. 细胞样本：如洋葱、酵母等植物或动物细胞；2. Trizol试剂盒：包括Trizol reagent、DMEM/F12培养基、异丙醇、氯仿等试剂。

3. 离心机：用于分离细胞和RNA;4. 紫外分光光度计：用于测定RNA的浓度和纯度。

二、实验步骤1. 取适量的细胞样本，加入适量的DMEM/F12培养基中，用离心机离心去除细胞碎片和杂质。

2. 将上清液转移到新的管子中，加入2 mL异丙醇，轻轻摇匀，使其与细胞充分混合。

3. 加入1 mL Trizol reagent,混匀后室温下静置10 min;4. 离心管中液体分为4层，从上往下分别是黄色(含有RNA)、白色(含有蛋白质)、透明(上清液)和红色(含有DNA)。

取出黄色层进行下一步处理。

5. 用吸头将黄色层的RNA吸取到一个新的试管中，加入适量的氯仿，轻轻摇匀。

6. 离心试管，将RNA和氯仿分离。

7. 用吸头将上层的白色RNA溶液吸出一部分，加入等量的异丙醇，混匀后离心。

8. 将上清液倒掉，留下含RNA的沉淀物。

9. 用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。

三、实验原理Trizol法提取RNA的原理是利用Trizol reagent中的Trizol和氯仿对细胞进行裂解，使RNA释放出来。

具体来说，Trizol reagent中的Trizol是一种有机溶剂，它能够破坏细胞膜并将细胞内的RNA溶解在水中。

而氯仿则是一种脂溶性溶剂，它能够与RNA结合形成复合物，使得RNA更容易被提取出来。

在实验过程中，首先加入异丙醇的作用是破坏细胞膜，使RNA更容易释放出来。

然后加入Trizol reagent,使其与细胞充分混合并裂解细胞。

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。

对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。

分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。

在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。

共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR 和酶切。

蛋白质可用于Western Blotting。

规格：100ml 黄色透明液体储存条件：2-8℃避光保存12个月注意：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。

如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。

忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

预防RNase污染注意事项：1.经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。

2.使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。

3.RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。

果蝇总RNA和总蛋白的提取及分析

果蝇总RNA和总蛋白的提取及分析摘要：本次实验主要分为两大部分。

第一部分是以果蝇成体为材料，通过Trizol试剂直接从果蝇细胞或组织中提取总RNA，然后进行反转录制备cDNA，最后通过琼脂糖凝胶电泳来测定总RNA和cDNA的纯度，进而来进行分析。

第二部分仍以果蝇成体为材料（有的小组是果蝇幼体），提取果蝇总蛋白，通过SDS-PAGE检测果蝇总蛋白表达，最后对果蝇的蛋白含量进行了分析。

关键字：RT-PCR；cDNA；琼脂糖凝胶电泳；SDS-PAGE1 材料及仪器1.1 实验材料黑腹果蝇成虫2-3d龄，约6只，雌雄均等。

果蝇是一种非常重要的模式生物，通常所指的是黑腹果蝇，学名：Drosophila melanogaster，在分类学上所属动物界，节肢动物门，昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。

果蝇以其繁殖迅速、生长周期短、易于养殖、相对性状丰富、基因组较为简单等显著特点成为了遗传学、分子生物学、发育生物学等重要学科的主要实验动物之一，对果蝇基因组的测序分析也较为透彻，因此，本实验选用果蝇为实验材料，可以使数据更加具有代表性和说服力。

1.2 试剂及仪器1.2.1 试剂O，琼 Trizol裂解液（50mg/ml），氯仿，异丙醇，75%乙醇，RNase free H2O，10×PCR Buffer （含Mg2+），dNTP 脂糖，TAE电泳缓冲液，DNA marker，dd H2（10 mM each），引物：rp49F、rp49R；CG8189F、CG8189R， Taq DNA polymerase （2U/µl），TBS缓冲液（20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, pH7.9），蛋白上样缓冲液，染色液，脱色液1.2.2 器材1.5ml离心管，匀浆棒，高速台式离心机，200µl及1ml微量移液器及吸头，天平，量筒，锥形瓶，微波炉，制胶板，电泳槽，电泳仪，凝胶成像仪，PCR仪，水平摇床等。

Trizol法提取组织和细胞RNA

Triz ol法提取组织和细胞RNA操作步骤：1、用剪刀将半个绿豆大小的组织剪碎，加入1 ml Trizol , 振荡器上震荡1分钟。

常温放置10 min，使核蛋白体完全分解。

2、加入200 ul 三氯甲烷（氯仿），盖紧管盖，剧烈震荡15 sec。

常温静置10 min。

3、在4度条件下，11000 rpm 离心15 min。

4、将水样层转移到一个新的离心管中，加入500 ul 异丙醇。

颠倒混匀后，常温静置10 min。

『离心后分为三层，下层为红色的苯酚-氯仿层，中间层，和上层的水样层。

RNA存在于水样层中』5、在4度条件下，11000 rpm 离心10 min。

6、用枪小心吸走液体，留沉淀在管底。

加入1 ml 75%的乙醇，在振荡器上震荡5sec，洗涤沉淀一次。

7、在4度条件下，8000 rpm 离心5 min。

8、将上清小心去掉，干燥沉淀10 min，加入适量的水溶解沉淀10 min。

9、检测浓度，鉴定RNA产量和纯度。

Takara PrimeScript RT reagent Kit逆转录Real-time PCR 用cDNA 操作步骤：1、按下列组分冰上配制RT反应液5×PrimeScript Buffer 4 ulPrimeScript RT Enzyme Mix 1 ulOligo dT Primer 1 ulRandom 6 mers 1 ulTotal RNA X（1 ug）RNA Free dH2O 补足20 ul2、混匀后，按如下反应条件进行：37度15 min85度 5 sec反应结束后将产物于-20度保存，待Real-time PCR检测。

用Trizol提取DNA,RNA及蛋白质的方法及注意事项

TRIZOL试剂警告：接触皮肤或误吞将导致中毒或灼伤。

接触皮肤之后立即用去垢剂和水冲洗。

若感到不适，请遵医嘱（可能的话出示标签）。

收到药品后，在室温下存储。

以已证明TRIZOL在常温下可稳定储存12个月。

说明：TRIZOL是一种从细胞和组织中提取总RNA的现用试剂。

该试剂是一种苯酚异硫氰酸酯单相溶液，它发展自Chomczynski 和Sacchi的RNA一步抽提法。

在细胞破碎和溶解细胞组分时，TRIZOL可以保持细胞匀浆或抽提物中RNA的完整性。

离心后加入氯仿，将溶液分为水相和有机相。

RNA只留在水相中。

转移水相后，用异丙醇沉淀回收RNA。

除去水相后，样品中的DNA和蛋白质也可以用后续沉淀方法回收。

用乙醇从相界面间沉淀DNA，异丙醇从有机相回收蛋白质。

DNA 的共纯化可能对样品间RNA产量的正常化有用。

这项提取技术对人、动物、植物或细菌来源的各种量的组织（低至50-100mg，高至≥1g）和细胞（低至5×106，高至＞107）都有良好的效果。

其简单的操作方法允许同时处理大量样品。

整个过程可在1小时内完成。

用TRIZOL提出的总RNA 不含蛋白质和DNA污染，可用来做Northern 电泳分析、斑点杂交、poly (A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。

在PCR和扩大DNA酶Ⅰ梯度分离中，建议使用一个内含子中的两个引物。

TRIZOL简化了各种类型的大分子及小分子RNA的分离。

例如，从鼠肝分离的RNA经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，显示出介于7到15kb的大分子RNA 条带,（由mRNA和hnRNA组成的）两个约5kb（28S）和2kb（18S）核糖体RNA 的条带，以及介于0.1到0.3kb（tRNA, 5S）的小分子RNA的条带。

所分离的RNA 稀释于TE时A260/A280之比大于等于1.8。

谨防RNase的污染：在提取中任何不正确的操作方法中都可能偶然引入RNase。

由于其活性难以抑制，因此只能直接避免其引入。

如何用trizol同时提RNA和蛋白

样品加氯仿分层后,移去上层水相,每使用1ml TRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2-8℃不超过2000×g离心5分钟。

2.取上清，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml TRIzol加1.5ml异丙醇，室温放置10分钟，2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。

3．用含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。

每使用1ml TRIzol加2ml洗涤液，室温放置20分钟，2-8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。

4.用2ml无水乙醇室温放置20分钟，2-8℃7500×g离心5分钟，弃上清。

5．把无水乙醇倒掉，开盖子静置4-8min分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完全溶解，不溶物2-8℃10000×g离心10分钟除去。

分离得到的蛋白质样品可用于Western Blot或-5至-20℃保存备用。

注意事项：
1.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2-8℃一个月以上或-5至-20℃一年以上。

2．这一步可省去：用0.1% SDS在2-8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western Blot。

常见问题分析：
得率低：
A.样品裂解或匀浆处理不彻底
B．最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。

Trizol法提取RNA、DNA及蛋白质

Trizol法提取RNA、DNA及蛋白质1、向组织或细胞中加入1ml TRIZOL，吹打混匀，室温静置5min；2、加入TRIZOL 1/5(200ul)氯仿，振荡混匀，室温静置3min，4°C 12000g离心15-20min；注：上层水相可以通过异丙醇沉淀RNA，中间层通过乙醇能使DNA沉淀析出，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。

RNA提取3、将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入等体积异丙醇，混匀，室温放置10 minutes;4、4°C，然后离心12,000 g ，10 minutes，去上清留沉淀；5、加入1ml 75%乙醇（RNase-free）洗涤沉淀，votex 5s；6、4°C， 12,000 g ，离心10 minutes，去上清留沉淀；7、加入1ml无水乙醇洗涤，votex 5s ，4°C， 12,000 g ，离心10 minutes，去废液留沉淀；8、晾干；9、加入50ulRNase free ddH2O溶解；10、测浓度，-80℃保存。

DNA提取3、将上层水相转移干净，这对分离DNA很关键；4、加入300ul无水乙醇/1ml TRIZOL，颠倒混匀，室温静置3min；5、4°C，2,000 g ，离心5 minutes；6、转移上清液，用于蛋白提取；7、加入1ml柠檬酸钠/无水乙醇（0.1M柠檬酸钠10%乙醇，pH8.5）洗涤，室温孵育30min（不时轻轻颠倒混匀）；8、4°C， 2,000 g ，离心5 minutes，去废液留沉淀；9、重复步骤7和8；10、加入1ml 75%乙醇洗涤沉淀，室温孵育10-20min（不时轻轻颠倒混匀）；11、4°C， 2,000 g ，离心5minutes，去上清留沉淀；12、无水乙醇洗涤，votex 5s，4°C， 2,000 g ，离心10 minutes；13、晾干；14、加入50ul ddH2O或TE溶解，测浓度，冰箱保存。

qPCR之Trizol 提取RNA的步骤和技巧

Trizol 提取RNA的步骤和技巧T ri zo l/T ri p u r eTrizol/TriPure 试剂适用于从不同的生物样本(包括人类、动物、植物、酵母、细菌和病毒来源的样本) 中分离总 RNA 或同时分离RNA、DNA 和蛋白质。

试剂仪器准备氯仿，异丙醇，75%乙醇（DEPC 水），无RNase 水或0.5%SDS, 12000g 高速离心机，聚丙烯离心管，水浴（55-60 度），*密度梯度离心试剂（用于白血细胞提取），*糖原（用于小于10mg 的组织样本）匀浆裂解样品根据样品类型的不同，在室温下完成匀浆裂解操作；样品体积不能超过Tripure试剂的10％；同时，按建议体积量加入Tripure试剂，保证充分裂解，避免DNA污染。

对高脂肪、蛋白、多糖、胞外基质的样品（例如肌肉，脂肪，块茎类植物等），需要额外步骤去除不溶性成份。

（如果后续还要提取DNA，则省略该步骤）在此，可以继续进行实验，或将匀浆样品在-80度保存（一月以上）。

溶液相分离1、匀浆样品在室温下放置5min，使核蛋白复合体充分分解。

2、每1ml Tripure匀浆液中加入0.2ml氯仿，盖紧离心管。

3、手动剧烈摇荡离心管15s。

4、室温下放置2-15min。

5、4度12000g 离心样品15min。

6、离心后匀浆液分层，最上层是无色的水相，RNA主要分布在其中，约占总体积的50%。

7、倾斜离心管45度，小心吸取上层水相至新的离心管，避免吸取其他各相液体。

8、如果要分离DNA和蛋白，保留剩余液体；有机相可以在4度过夜保存。

R N A沉淀1、对小量提取的RNA（小于约10^6细胞，或10mg组织），添加入5-10ug 无RNase 的糖原作为共沉淀的载体。

2、每1ml Tripure匀浆样品，加入0.5ml异丙醇到离心管。

3、室温放置10min。

4、4度12000g 离心样品10min。

R N A清洗1、轻轻吸取上清，加1ml 75%乙醇/1ml Tripure匀浆样品到离心管。

trizol法提取蛋白质

Trizol法提取RNA+蛋白1.取冻存组织加入1ml Trizol（invitrogen）匀浆，样品量不可超过总体积的10%，室温孵育5min，超声粉碎至组织完全溶于液体中；2.加入0.2ml氯仿，剧烈晃动15s，室温孵育2-3min，4℃12000×g离心15min；此时溶液分为水相和有机相。

3.小心吸取并丢弃上层水相（该水相中富含细胞总RNA，用于提取RNA，进行PCR 实验）；4.在剩下的中间层及有机相中加入0.3ml无水乙醇，颠倒充分混匀后室温放置2-3min，4℃下2000×g离心5min；5.小心吸取并收集上层有机相（沉淀为DNA），转移到新的离心管中，加入1.5ml 异丙醇，轻轻混匀后室温放置10min，4℃下12000×g离心10min；此时沉淀为蛋白。

6.弃上清液，加2ml 0.3M盐酸胍（95%乙醇溶解）清洗沉淀3次，每次清洗过程中，先将沉淀保存于清洗液中20min，然后在4℃下7500×g离心5min。

最后一次清洗后，丢弃上层液相，将沉淀悬浮于2ml乙醇中，涡旋震荡15s后在室温下放置20min，然后在4℃下7500×g离心5min。

7.丢弃上层液相，将沉淀真空干燥5-10min。

然后将沉淀溶解于1% SDS（十二烷基硫酸钠）中。

在50℃水浴中反复吹打以助溶。

不溶物在4℃下10000×g离心10 min 去除。

收集上清，转移到新的收集管中。

该上清中的蛋白样品可直接用于Western Blotting实验或保存于-20℃。

常见问题：1.得率低：样品裂解或匀浆处理不彻底；最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解2.蛋白质降解：组织取出后未马上冷冻3.电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。