Perampanel_HNMR_09646_MedChemExpress
药物Perampanel(吡仑帕奈)合成检索总结报告
药物Perampanel（吡仑帕奈）合成检索总结报告
一、Perampanel（吡仑帕奈）简介
Perampanel（吡仑帕奈）是一种突触后神经元上离子型谷氨酸盐受体的非竞争性拮抗剂，用于12岁及以上、有或无继发性全身性癫痫部分发作的癫痫患者的辅助治疗。
Perampanel（吡仑帕奈）不良反应：最常见头晕、嗜睡、疲乏、易怒、恶心、体质量增加、眩晕、共济失调、步态不稳和平衡障碍。
Perampanel（吡仑帕奈）分子结构式如下:
英文名称：Perampanel
中文名称：吡仑帕奈
本文主要对Perampanel（吡仑帕奈）的合成路线、关键中间体的合成方法及实验操作方法进行了文献检索并作出了总结。
二、Perampanel（吡仑帕奈）合成路线
Perampanel（吡仑帕奈）11的合成路线一：
Perampanel（吡仑帕奈）11的合成路线二：Perampanel（吡仑帕奈）11的合成路线三：Perampanel（吡仑帕奈）11的合成路线四：
三、Perampanel（吡仑帕奈）合成检索总结报告(一) Perampanel（吡仑帕奈）中间体3的合成
(二) Perampanel（吡仑帕奈）中间体5的合成方法一
(三) Perampanel（吡仑帕奈）中间体5的合成方法二
(四) Perampanel（吡仑帕奈）中间体6的合成方法一。
依达拉奉右莰醇通过抑制TLR4NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症反应
实验研究依达拉奉右莰醇通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠炎症反应晚丽，李作孝△摘要：目的探讨依达拉奉右莰醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠炎症反应的影响及其机制。
方法30只雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、依达拉奉右莰醇干预组各10只。
除空白组外，其余2组小鼠均采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽诱导EAE模型。
从造模次日开始，依达拉奉右莰醇干预组腹腔注射依达拉奉右莰醇12.5mg/kg，空白组及模型组腹腔注射等量生理盐水，1次/d，连续14d。
观察小鼠发病情况，并行神经功能障碍评分；HE和LFB染色观察脊髓组织病理改变；实时荧光定量PCR检测脑组织匀浆中白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子（TNF）-αmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测脊髓组织中Toll样受体4（TLR4）、核因子κB p65（NF-κB p65）蛋白表达水平。
结果空白组小鼠均未发病，其余2组小鼠不同程度发病。
与模型组相比，依达拉奉右莰醇干预组小鼠的发病潜伏期、高峰期延迟，高峰期神经功能障碍评分降低（P＜0.01）。
空白组小鼠脊髓组织未见异常；模型组脊髓组织大量炎性细胞浸润、髓鞘结构紊乱；依达拉奉右莰醇干预组较模型组的炎性细胞浸润减少、髓鞘结构紊乱情况改善。
与空白组相比，其余2组小鼠脑组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平以及脊髓组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高，以依达拉奉右莰醇干预可逆转建模引起的上述改变（P＜0.05）。
结论依达拉奉右莰醇可减轻EAE小鼠炎症反应，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化有关。
关键词：脑脊髓炎，自身免疫性，实验性；Toll样受体4；NF-κB；炎症；白细胞介素类；肿瘤坏死因子α；依达拉奉右莰醇；TLR4/NF-κB信号通路中图分类号：R744.51文献标志码：A DOI：10.11958/20212362Edaravone dexborneol reduces inflammation in mice with experimental autoimmuneencephalomyelitis by inhibiting TLR4/NF-κB signaling pathwayWAN Li,LI Zuoxiao△Department of Neurology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou646000,China△Corresponding Author E-mail:****************Abstract:Objective To investigate the effect and mechanism of edaravone dexborneol on the inflammatory response in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE).Methods Thirty female C57BL/6mice were randomly divided into the blank group,the model group and the edaravone dexborneol intervention group,with10mice in each group. Except for the blank group,EAE model was induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55(MOG35-55) polypeptide in the other two groups.From the day after modeling,mice in the edaravone dexborneol intervention group were intraperitoneally injected with edaravone dexborneol12.5mg/kg,while the mice in the blank group and the model group were intraperitoneally injected with the equal amount normal saline,once a day for consecutive14days.The behavioral changes of mice were observed,and neurological dysfunction scores were performed.HE and LFB staining were used to detect spinal cord pathological changes.The mRNA expression levels of interleukin(IL)-1β,IL-6and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in brain homogenate were detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The protein expression levels of Toll-like receptor4(TLR4)and nuclear factorκB p65(NF-κB p65)in spinal cord tissue were detected by Western blot assay.Results None of the mice in the blank group had the disease,and the other two groups of mice had different degrees of pared with the model group,the incubation period and peak period were delayed in the edaravone dexborneol intervention group,and neurological deficit scores in peak period decreased(P＜0.01).No abnormality was found in spinal cord tissue structure in mice of the blank group,and a large number of inflammatory cell infiltration,myelin structure 基金项目：泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作基金项目（2018LZXNYD-ZK17）作者单位：西南医科大学附属医院神经内科（邮编646000）作者简介：晚丽（1994），女，硕士在读，主要从事神经免疫方面研究。
黄芩素通过调节HIF-1α
黄芩素通过调节HIF -1α/VEGF 信号通路抑制类风湿关节炎大鼠的炎症反应和病理性血管生成*杜红丽1，张晨宇1，赵清2△［1河南中医药大学第五临床医学院（郑州人民医院）风湿免疫科，河南郑州450053；2河南大学淮河医院风湿免疫科，河南开封475099］［摘要］目的：探讨黄芩素（BA ）调节缺氧诱导因子1α（HIF -1α）/血管内皮生长因子（VEGF ）信号通路对类风湿关节炎（RA ）大鼠炎症反应和病理性血管生成的影响。
方法：按照随机数字表法将SD 大鼠分为对照（control ）组、模型（model ）组、低剂量（10mg/kg ）BA （BA -L ）组、高剂量（30mg/kg ）BA （BA -H ）组、雷公藤多苷片（TWP ；6.25mg/kg ）组和BA -H+HIF -1α激动剂二甲基草酰甘氨酸（DMOG ；40mg/kg ）组，每组12只。
除control 组外，其它组大鼠均采用II 型胶原蛋白-完全弗氏佐剂法诱导RA 大鼠模型。
第2次免疫24h 后开始给药处理，每天给药一次，持续4周。
检测大鼠在给药第0、7、14和28天时的足趾肿胀度，计算关节炎指数；计算大鼠胸腺和脾脏指数；HE 染色检测大鼠踝关节滑膜组织病理损伤；ELISA 法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF -α）和白细胞介素6（IL -6）水平；免疫组化检测大鼠踝关节滑膜组织中VEGF 和VEGF 受体2（又称激酶插入域受体，KDR ）表达；Western blot 检测各组大鼠踝关节滑膜组织中HIF -1α和VEGF 蛋白表达。
结果：与control 组比较，model 组大鼠踝关节滑膜组织病理损伤严重，足趾肿胀度、关节炎指数、胸腺和脾脏指数，以及滑膜组织TNF -α、IL -6、VEGF 、KDR 、HIF -1α和VEGF 水平均显著升高（P <0.05）；与model 组比较，BA -L 组、BA -H 组和TWP 组对应指标变化趋势与上述相反（P <0.05）；BA -H 组与TWP 组比较，上述指标变化差异无统计学意义（P >0.05）；DMOG 减弱了BA -H 对RA 大鼠炎症反应和病理性血管生成的抑制作用。
鸦胆子油鼻用pH敏感型原位凝胶的处方筛选
鸦胆子油鼻用pH敏感型原位凝胶的处方筛选目的：筛选鸦胆子油鼻用pH敏感型原位凝胶的最佳处方，为鸦胆子油鼻用pH敏感型原位凝胶的制备提供基础。
方法：以卡波姆934、羟丙基甲基纤维素SHE50、SHE15、SHK4M、SHK100M为基质，以吐温-80、N-甲基吡咯烷酮为增溶剂，通过黏度实验进行原位凝胶制剂的处方筛选，并在不同的pH、不同基质浓度的条件下，优化处方。
结果：pH敏感型原位凝胶的黏度随着pH、基质浓度的增大而上升，加入人工鼻液后形成具有一定强度的凝胶。
优选结果为卡波姆浓度最佳为0.5%，羟丙基甲基纤维素SHE50最佳浓度为0.25%，10.44 g吐温-80、2.18 g N-甲基吡咯烷酮，可使5 mL鸦胆子油完全溶解。
结论：以0.5%卡波姆、0.25%羟丙基甲基纤维素SHE50为凝胶基质，以吐温-80，N-甲基吡咯烷酮为增溶剂，可成功制备鸦胆子油pH敏感型鼻用原位凝胶。
鸦胆子油为中药鸦胆子仁中的成分，其主要活性成分为油酸和亚油酸。
现代研究表明，鸦胆子油可用于多种肿瘤的治疗[1-3]。
邢海燕等[4-5]以鸦胆子油乳联合EP方案化疗法治疗晚期非小细胞肺癌，结果鸦胆子油乳剂治疗晚期肺癌，疗效确切。
刘红耀等[6]以N-甲基亚硝基脲（MNU）为诱癌剂，特异性诱发大白鼠膀胱肿瘤，鸦胆子油乳及明胶微球为栓塞剂治疗膀胱肿瘤，结果鸦胆子油乳介入或加栓塞剂对MNU诱发的大白鼠膀胱肿瘤有抗癌作用。
鸦胆子油也可用于脑胶质瘤的治疗[7-8]。
近年来，脑靶向给药的研究取得较大进展，药物能有效克服血脑屏障，对脑部疾病起到良好的治疗效果[9]。
鼻腔作为一种新型的靶向给药途径，许多中药经鼻腔给药后对中枢神经性疾病有良好的治疗效果[10]。
其可绕过血脑屏障入脑，达到脑靶向给药的目的[11-12]。
原位凝胶是一种新型药物制剂，其可通过眼、鼻腔等部位给药，其具有与用药部位特别是黏膜组织亲和力强、滞留时间长、良好的控制释药性能等优点[13]。
碱基切除修复抑制剂甲氧胺联合β-榄香烯治疗恶性脑胶质瘤的实验研究
序言β-榄香烯属国家二类非细胞毒性抗肿瘤新药，临床研究证实其对包括脑胶质瘤在内的多种肿瘤疗效确切，且无其他传统化疗药常有的骨髓抑制、肝肾功能损害等毒副作用。
但目前临床应用的榄香烯乳注射液因其存在静脉炎发生率很高、剂型性质不稳定等缺点，其进一步的应用受到了较大的限制。
碱基切除修复抑制剂甲氧胺（Methoxyamine），可通过裂解核酸内切酶破坏DNA碱基切除修复过程，从而抑制肿瘤细胞对损伤作用的修复反应。
据此，可认为抑制DNA 碱基切除修复可能是增强肿瘤细胞化疗敏感性的潜在靶点，目前多项实验报道也已证实了甲氧胺可增强烷化剂和放疗的抗肿瘤效果。
近年来，通过纳米技术构建的纳米脂质体在提高药物溶解度、增加药物稳定性、降低药物副作用、缓控释给药等方面较普通的脂质体有了显著的提高。
研究表明，纳米脂质体对正常细胞和组织无损伤作用，并可长时间吸附于靶细胞周围，因此使药物能充分向靶组织渗透，也可以通过静电吸附效应与细胞膜接触而融合而进入细胞内。
因此将药物包封于纳米脂质体被认为可以改变被包封药物的体内分布，提高药物治疗指数，降低药物毒性。
基于增强β-榄香烯的疗效，减少毒副作用的目的，本课题研究内容分两部分：（一）联合碱基切除修复抑制剂甲氧胺，探讨是否在体内外抗瘤活性上具有协同作用，以期减少榄香烯用量，降低毒副反应，为其在临床的应用提供实验和理论依据。
（二）、利用纳米脂质体技术构建新型的β-榄香烯-纳米脂质体药物传递系统，初步探讨其体外抗瘤活性。
II碱基切除修复抑制剂甲氧胺联合β-榄香烯治疗恶性脑胶质瘤的实验研究中文摘要胶质瘤是成人神经系统最常见的原发性肿瘤，手术全切除率很低，复发率高，当前多种治疗效果仍不理想。
榄香烯属国家二类非细胞毒性抗肿瘤新药，临床研究发现其对多种肿瘤疗效确切，而且还具有提高和改善机体免疫功能，与放化疗协同作用等独特效果。
但是肿瘤细胞具有强大的DNA损伤修复机制，会对化疗药物产生抗性。
因此抑制这种内在的DNA修复过程，如碱基切除修复抑制剂甲氧胺的联合应用有利于提高化疗药物的抗瘤效果。
高良姜素减轻异丙肾上腺素诱导心脏纤维化的作用机制
高良姜素减轻异丙肾上腺素诱导心脏纤维化的作用机制尚茹茹1,童曼琳2,刘晓红1摘要目的:探讨高良姜素(Galangin)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心脏纤维化的作用机制㊂方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为正常组㊁ISO组㊁高良姜素低剂量组[25mg/(kg㊃d)]㊁高良姜素中剂量组[50mg/(kg㊃d)]㊁高良姜素高剂量组[100mg/(kg㊃d)]㊂处理结束后行心脏超声评估心功能[左室射血分数(LVEF)㊁左室短轴缩短率(LVFS)㊁左室收缩末期内径(LVESD)㊁左室舒张末期内径(LVEDD)];测量小鼠体质量(BW)㊁心脏重量(HW)㊁胫骨长度(TL),计算心脏重量与体质量比值(HW/BW)㊁心脏重量与胫骨长度比值(HW/TL),评估心肌肥厚情况㊂天狼星红染色评价心脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测炎症标志物白细胞介素-6(IL-6)㊁白细胞介素-1β(IL-1β)㊁肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)㊁胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)㊁转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA水平;试剂盒检测心脏组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)㊁过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量㊂结果:与正常组比较,ISO组小鼠HW/BW㊁HW/TL㊁LVEDD及LVESD升高,LVEF和LVFS降低,IL-6㊁IL-1β㊁TNF-α㊁CollagenⅠ㊁CollagenⅢ和TGF-β1mRNA表达水平升高,心脏SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,心肌细胞横截面积增大,心脏纤维化面积增加(P<0.05)㊂与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏纤维化面积减小,CollagenⅠ㊁CollagenⅢ㊁IL-6mRNA表达水平降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂高良姜素中剂量组TGF-β1低于ISO组,差异有统计学意义(P<0.05)㊂结论:高良姜素可减轻ISO诱导的心脏纤维化,其机制可能与抑制炎症㊁氧化应激有关㊂关键词心脏纤维化;高良姜素;异丙肾上腺素;炎症;氧化应激;小鼠;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.24.009Mechanism of Galangin on Isoprenaline-induced Cardiac FibrosisSHANG Ruru,TONG Manlin,LIU XiaohongShanxi Provincial People's Hospital,Taiyuan030012,Shanxi,ChinaCorresponding Author LIU Xiaohong,E-mail:****************Abstract Objective:To investigate the mechanism of Galangin on isoprenaline(ISO)-induced cardiac fibrosis.Methods:Thirty C57BL/6 mice were randomly divided into the normal group,ISO group,low-dose galangin group[25mg/(kg㊃d)],medium-dose galangin group [50mg/(kg㊃d)],and high-dose galangin group[100mg/(kg㊃d)].After treatment,cardiac ultrasound was performed to detect cardiac function[left ventricular ejection fraction(LVEF),left ventricular short-axis shortening(LVFS),left ventricular end-systolic internal diameter(LVESD),and left ventricular end-diastolic internal diameter(LVEDD)].The body mass(BW),heart weight(HW),and tibia length (TL)of the mice were measured,and the heart weight-weight to body mass ratio(HW/BW)was detected,and the heart weight to tibia length ratio(HW/TL)were collected to assess cardiac hypertrophy.The degree of cardiac fibrosis was detected by sirius scarlet staining.The inflammatory markers interleukin-6(IL-6),interleukin-1β(IL-1β),tumor necrosis factor-α(TNF-α),and fibrotic markers collagen Ⅰ(CollagenⅠ),collagenⅢ(CollagenⅢ),transforming growth factor-β1(TGF-β1)mRNA levels were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction(qPCR).The kit was used to detect the oxidative stress indicators superoxide dismutase(SOD), catalase(CAT)activity,and malondialdehyde(MDA)content in heart tissue.Results:Compared with the normal group,HW/BW,HW/TL, LVEDD,and LVESD in the ISO group were higher,LVEF and LVFS were less,levels of IL-6,IL-1β,TNF-α,CollagenⅠ,CollagenⅢ,and TGF-β1mRNA were higher,SOD and CAT activities were less,and MDA content was higher.The cardiomyocyte cross-sectional area and cardiac fibrosis area were higher(P<0.05).Compared with the ISO group,the area of cardiac fibrosis was less in the high-dose galangin group,the expression levels of CollagenⅠ,CollagenⅢ,and the mRNA of IL-6were less,the activity of SOD was higher,and the content of MDA was less(P<0.05).TGF-β1in the medium-dose galangin group was less than that in the ISO group(P<0.05). Conclusion:Galangin could alleviate isoproterenol-induced cardiac fibrosis,and its mechanism might be related to inhibiting inflammation and oxidative stress.Keywords cardiac fibrosis;Galangin;isoproterenol;inflammation;oxidative stress;mice;experimental study心力衰竭是心血管疾病的终末阶段,发病率及死基金项目山西省卫生健康委科研课题项目(No.2021112)作者单位 1.山西省人民医院(太原030012);2.山西医科大学第五临床医学院通讯作者刘晓红,E-mail:****************引用信息尚茹茹,童曼琳,刘晓红.高良姜素减轻异丙肾上腺素诱导心脏纤维化的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(24): 4524-4529.亡率均较高,心力衰竭发生机制复杂,尚未明确㊂目前认为神经内分泌系统激活导致的心室重塑是引起心力衰竭的关键因素,心脏纤维化是心室重塑的主要病理特征,炎症在心脏纤维化过程中发挥着重要作用[1]㊂心力衰竭发展过程中产生大量的促炎因子,这些促炎因子导致心肌细胞肥大和心脏纤维化㊂因此,抑制心脏炎症㊁纤维化有助于改善心力衰竭预后㊂高良姜素(Galangin,3,5,7-三羟基黄酮)是一种天然来源的黄酮醇类化合物,主要分布于姜科植物高良姜的干燥根茎中㊂多项研究显示,高良姜素具有抗炎㊁抗氧化㊁抗凋亡㊁抗肿瘤及抗纤维化等作用[2-3]㊂有研究显示,高良姜素可减少活性氧生成,抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,减轻哮喘小鼠气道炎症反应及气道重塑[4]㊂本研究探讨高良姜素通过抗炎㊁抗氧化㊁抗纤维化等抑制心脏纤维化发挥抗心力衰竭的作用机制㊂1材料与方法1.1实验材料1.1.1动物模型及分组C57BL/6小鼠购自北京斯贝福生物技术有限公司[生产许可证:SCK(京)2019-0010],6~8周龄,雄性,体质量23.5~25.5g㊂饲养于无特定病原体(SFP)级环境中,自由摄取食物,昼夜12h㊂异丙肾上腺素(ISO)组(6只)小鼠在实验第1日皮下注射ISO[5mg/(kg㊃d)],共治疗14d,之后每日灌胃对应体积的0.5%羟甲基纤维素溶液,持续4周㊂高良姜素各剂量组(每组6只)在实验第1天皮下注射ISO[5mg/(kg㊃d)]同时给予不同浓度的高良姜素(重悬于0.5%羟甲基纤维素溶液,每次灌胃前混匀)灌胃,ISO使用14d,之后持续灌胃高良姜素至4周㊂正常组(6只)从实验开始每日灌胃对应体积的0.5%羟甲基纤维素溶液,持续4周㊂详见图1㊂图1小鼠的处理方法(CMC为羧甲基纤维素;Gla为高良姜素)1.1.2实验试剂与仪器高良姜素(上海融禾医药科技发展有限公司); ISO(sigma,美国);异硫氰酸荧光素(FITC)标记的麦胚芽凝集素(WGA)染色试剂盒(Sigma,美国);天狼星红染色试剂盒(北京索莱宝);超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成);丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成);过氧化氢酶(CAT)试剂盒(南京建成);心脏超声测量系统(美国GE公司Vivid7pro超声系统);荧光显微镜(Nikon);实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)仪(Bio-Rad)㊂1.2方法1.2.1小鼠心脏超声心动图检查实验4周,行心脏彩超检测小鼠左室射血分数(LVEF)㊁左室短轴缩短率(LVFS)㊁左室收缩末期内径(LVESD)㊁左室舒张末期内径(LVEDD),上述数据测量3次,取平均值,记录分析㊂1.2.2小鼠体质量㊁心脏重量及胫骨长度检测完成心脏超声的小鼠,测量体质量(body weight, BW),每只小鼠称量3次,取平均值并记录㊂给予1%戊巴比妥钠溶液(20mg/kg)腹腔注射,前胸部开口,暴露心脏,心尖部穿刺,用肝素盐水灌注5min,取材㊂测量心脏重量(heart weight,HW)㊁胫骨长度(tibial length,TL)㊂计算心脏重量与体质量比值(HW/BW)㊁心脏重量与胫骨长度比值(HW/TL)㊂1.2.3组织取材㊁石蜡切片制备㊁常规染色组织取材后,经10%甲醛固定,乙醇脱水㊁石蜡包埋,垂直于心脏长轴连续切成5μm的石蜡组织切片,进行WGA染色㊂采用Nikon显微镜收集图像,并使用Image J软件进行定量分析㊂1.2.4qPCR检测提取小鼠心脏组织总RNA后,将2μg的RNA按照说明书反转录为cDNA㊂应用SYBR(Servicebio公司),按照说明书检测相关基因,引物序列如下:胶原蛋白(Collagen)Ⅰ,正向引物5'AAGAAGCACGTCTG-GTTTGGAG3',反向引物5'GGTCCATGTAGGC-TACGCTGTT3';CollagenⅢ,正向引物5'TTTCTTCT-CACCCTTCTTCATCC3',反向引物5'CATATTTGA-CATGGTTCTGGCTTC3';转化生长因子-β1(TGF-β1),正向引物5'TAATGGTGGACCGCAACAAC3',反向引物5'CCACATGTTGCTCCACACTTGAT3';白细胞介素-1β(IL-1β),正向引物5'TCAAATCTCGCAGCAG-CACATC3',反向引物5'CGTCACACACCAGCAGGT-TATC3';IL-6,正向引物5'CCCCAATTTCCAAT-GCTCTCC3';反向引物5'CGCACTAGGTTTGC-CGAGTA3';肿瘤坏死因子-α(TNF-α),正向引物5' CCCTCACACTCACAAACCACC3',反向引物5'CTTT-GAGA TCCA TGCCGTTG3';磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),正向引物5'CCTCGTCCCGTAGACAAAATG3',反向引物5'TGAGGTCAATGAAGGGGTCGT3'㊂1.2.5心脏组织氧化应激水平检测取适量心脏组织,按照试剂盒说明书步骤分别进行SOD和CA T活性检测,同时检测心脏组织MDA含量㊂1.3统计学处理采用SPSS26.0统计软件对数据进行分析,符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂统计图表制作使用GraphPad Prism9.5软件完成㊂2结果2.1各组小鼠心脏组织形态学比较与正常组比较,ISO组小鼠HW/BW㊁HW/TL升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图2㊂图2各组小鼠心脏组织形态学比较(A为HW/BW;B为HW/TL㊂与正常组比较,*P<0.05)2.2各组小鼠心肌细胞横截面积及心脏纤维化面积比较WGA染色结果显示:与正常组比较,ISO组小鼠心肌细胞横截面积增大(P<0.05)㊂天狼星红染色结果显示,与正常组比较,ISO组小鼠心脏纤维化程度加重(P<0.05);与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏纤维化程度减轻(P<0.05)㊂详见图3㊁图4㊂图3各组小鼠心肌细胞横截面积及心脏纤维化染色图(ˑ400) (A为WGA染色代表图;B为天狼星红染色代表图)图4各组小鼠心肌细胞横截面积及心脏纤维化面积比较柱状图(A为心肌细胞横截面积;B为心脏纤维化面积㊂与正常组比较,*P<0.05;与ISO组比较,#P<0.05)2.3各组小鼠心功能指标比较与正常组比较,ISO组小鼠LVEF和LVFS下降,LVEDD㊁LVESD升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图5㊂图5各组小鼠心功能指标比较的柱状图(A为LVEF;B为LVFS;C为LVEDD;D为LVESD㊂与正常组比较,*P<0.05)2.4各组小鼠心脏CollagenⅠ㊁CollagenⅢ㊁TGF-β1 mRNA表达水平比较与正常组比较,ISO组小鼠心脏纤维化标志物CollagenⅠ㊁CollagenⅢ㊁TGF-β1mRNA表达水平升高(P<0.05)㊂与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏纤维化标志物CollagenⅠ㊁CollagenⅢmRNA水平降低,高良姜素中剂量组心脏纤维化标志物TGF-β1 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图6㊂图6各组小鼠心脏CollagenⅠ㊁CollagenⅢ㊁TGF-β1mRNA表达水平比较的柱状图(A为CollagenⅠmRNA;B为CollagenⅢmRNA表达水平;C为TGF-β1mRNA表达水平㊂与正常组比较,*P<0.05;与ISO组比较,#P<0.05)2.5各组小鼠心脏组织IL-6㊁IL-1β㊁TNF-αmRNA表达水平比较与正常组比较,ISO组心脏炎症标志物IL-6㊁IL-1β㊁TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.05)㊂与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏炎症标志物IL-6mRNA降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图7㊂图7各组小鼠心脏组织IL-6㊁IL-1β㊁TNF-αmRNA表达水平比较的柱状图(A为IL-6mRNA表达水平;B为IL-1βmRNA表达水平;C为TNF-αmRNA表达水平㊂与正常组比较,*P<0.05;与ISO组比较,#P<0.05)2.6各组小鼠心脏组织氧化应激指标SOD㊁MDA㊁CAT水平比较与正常组比较,ISO组小鼠心脏组织SOD㊁CAT 活性降低,心脏组织MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)㊂与ISO组比较,高良姜素高剂量组SOD活性升高,MDA含量下降,差异有统计学意义(P< 0.05)㊂详见图8㊂图8各组小鼠心脏组织氧化应激指标SOD㊁MDA㊁CAT水平比较的柱状图(A为心脏组织SOD活性;B为心脏组织CAT的活性;C为心脏组织MDA含量㊂与正常组比较,*P<0.05;与ISO组比较,#P<0.05)3讨论心室重塑是心力衰竭发生发展中的重要病理过程,心肌细胞在持续压力超负荷㊁缺血㊁缺氧㊁炎症等应激条件下发生结构和功能改变,包括左心室形态改变㊁心肌细胞肥大和间质纤维化㊁心肌细胞凋亡[5]㊂心肌损伤的早期阶段,大量的炎症细胞浸润到心肌损伤区域并发挥作用㊂促炎信号通路是由多种促炎细胞因子(如TNF-α㊁IL-17㊁IL-1β㊁IL-6)介导的,可诱导心肌细胞肥大和凋亡,进一步加重炎症和纤维化,最终导致心室重塑[6]㊂氧化应激损伤在心脏纤维化过程中发挥着关键作用㊂病理情况下,活性氧过量积累导致脂质过氧化反应发生,促使细胞损伤和死亡,引起细胞功能障碍[7]㊂活性氧分子经抗氧化酶如CAT和SOD降解为无毒分子㊂抗氧化防御机制(SOD㊁CAT)或内源性抗氧化剂(维生素E㊁抗坏血酸和谷胱甘肽)浓度降低可增加活性氧水平㊂有研究显示,心力衰竭病人血浆和心包积液中脂质过氧化物水平升高,与病人严重程度呈正相关[7]㊂活性氧引发心脏成纤维细胞增殖,激活核因子-κB (nuclear factor kappa B,NF-κB),以此增加基质金属蛋白酶表达,导致细胞外基质聚集,促进心肌纤维化[8]㊂相关研究表明,竹叶提取物通过缓解氧化应激损伤,减轻糖尿病诱导的心脏纤维化[9]㊂有研究显示,顺铂诱导的小鼠肾损伤过程中,高良姜素通过抗炎㊁抗氧化应激及抗凋亡作用发挥肾脏保护作用[10];在链脲霉素诱导的糖尿病大鼠中,高良姜素通过改善肝脏的抗氧化应激水平,维持高血糖大鼠肝脏的线粒体功能[11];高良姜素通过抑制炎性因子表达,减轻尿酸诱导的肾脏炎症反应[12]㊂本研究结果显示,在ISO诱导的心脏损伤及纤维化模型中,高良姜素干预后降低了HW/BW㊁HW/TL,减轻了心肌间质纤维化程度,缩小了心肌细胞的横截面积,改善了心功能;高良姜素干预后下调了心脏炎症标志物(IL-6㊁IL-1β㊁TNF-α)和心脏纤维化标志物(CollagenⅠ㊁CollagenⅢ㊁TGF-β1)mRNA表达水平,同时升高了心脏组织中抗氧化酶SOD㊁CAT活性,降低了心脏组织中脂质氧化物MDA的含量㊂综上所述,高良姜素通过减轻心脏炎症反应㊁心脏氧化应激反应,抑制心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,从而减轻ISO诱导的心脏损伤及纤维化㊂但具体分子机制尚未明确,在今后的研究中将深入探讨㊂参考文献:[1]SHIRAZI L F,BISSETT J,ROMEO F,et al.Role of inflammation inheart failure[J].Current Atherosclerosis Reports,2017,19(6):27. [2]ABUKHALIL M H,ALTHUNIBAT O Y,ALADAILEH S H,et al.Galangin attenuates diabetic cardiomyopathy through modulatingoxidative stress,inflammation and apoptosis in rats[J].Biomedecine&Pharmacotherapie,2021,138:111410. [3]TANG X X,XU C M,YAGIZ Y,et al.Phytochemical profiles,andantimicrobial and antioxidant activities of greater galangal[Alpinia galanga(Linn.)Swartz]flowers[J].Food Chemistry,2018,255:300-308.[4]LIU Y N,ZHA W J,MA Y,et al.Galangin attenuates airwayremodelling by inhibiting TGF-β1-mediated ROS generation andMAPK/AKT phosphorylation in asthma[J].Scientific Reports,2015,5:11758.[5]GAO G Y,CHEN W W,YAN M J,et al.Rapamycin regulates thebalance between cardiomyocyte apoptosis and autophagy inchronic heart failure by inhibiting mTOR signaling[J].International Journal of Molecular Medicine,2020,45(1):195-209.[6]ADAMO L,ROCHA-RESENDE C,PRABHU S D,et al.Reappraising the role of inflammation in heart failure[J].NatureReviews Cardiology,2020,17(5):269-285.[7]TSUTSUI H,KINUGAWA S,MATSUSHIMA S.Oxidative stressand heart failure[J].American Journal of Physiology Heart andCirculatory Physiology,2011,301(6):H2181-H2190.[8]MARCHIOLI R,LEVANTESI G,MACCHIA A,et al.Vitamin Eincreases the risk of developing heart failure after myocardialinfarction:results from the GISSI-Prevenzione trial[J].Journal ofCardiovascular Medicine,2006,7(5):347-350.[9]ZHANG L L,MAO Y Z,PAN J J,et al.Bamboo leaf extractameliorates cardiac fibrosis possibly via alleviating inflammation,oxidative stress and apoptosis[J].Biomedicine&Pharmacotherapy,2017,95:808-817.[10]TOMAR A,VASISTH S,KHAN S I,et al.Galangin amelioratescisplatin induced nephrotoxicity in vivo by modulation ofoxidative stress,apoptosis and inflammation through interplay ofMAPK signaling cascade[J].Phytomedicine,2017,34:154-161.[11]ALOUD A A,VEERAMANI C,GOVINDASAMY C,et al.Galangin,anatural flavonoid reduces mitochondrial oxidative damage instreptozotocin-induced diabetic rats[J].Redox Report,2018,23(1):29-34.[12]LU H,YAO H,ZOU R,et al.Galangin suppresses renalinflammation via the inhibition of NF-κB,PI3K/AKT and NLRP3inuric acid treated NRK-52E tubular epithelial cells[J].Bio MedResearch International,2019,2019:1-10.(收稿日期:2023-03-17)(本文编辑薛妮)。
细胞ATPADPAMP含量高效液相色谱法HPLC定量检测
细胞ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞A TP/ADP/AMP含量高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂是一种旨在通过高氯酸酸性处理，碱性中和后，在高效液相色谱仪和紫外光度仪下（254nm波长）检测分析，分离出ATP、ADP或AMP波峰，以定量测定样品中腺嘌呤核苷酸含量的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种动物或人体细胞裂解样品中A TP、ADP、AMP的含量检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景腺嘌呤核苷酸（adenine nucleotides），简称腺苷，包括单磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，是一种单体单位，为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）的组成成分，并提供化学能量，在能量代谢通路中维护诸如肌肉、胞膜等组织细胞结构的生化和生理功能，调节细胞糖酵解、三羧酸循环、电子传递系统、氧化磷酸化活动。
腺嘌呤核苷酸在细胞中浓度低，且不稳定，通常通过其类型不同、浓度差异、分布状况，来评价细胞的代谢情况和能量状态。
单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate；AMP），又称为5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸（5'-adenylic acid），是一种在（脱氧）核糖核酸中发现的核苷酸。
它是一种磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸基团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。
分子式为C10H14N5O7P，分子量347。
AMP可以通过腺苷酸激酶（adenylate kinase）催化2分子ADP生成，或通过ATP以及ADP水解产生。
AMP常以腺苷-3',5'-环化一磷酸（cAMP）形式存在于细胞中。
AMP与A TP之比反映细胞ATP生成状况以及脂肪酸氧化程度。
二磷酸腺苷（adenosine diphosphate；ADP），参与ADP-ATP循环，提供热能转换和动态平衡，尤其在线粒体需氧呼吸、光合成等实现。
超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中15种N-亚硝胺化合物
第42 卷第 11 期2023 年11 月Vol.42 No.111469~1478分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中15种N-亚硝胺化合物汪毅1，梁文耀1，何国山1，陈张好2，周智明2，吴谦1，席绍峰1，谭建华1*（1．广州质量监督检测研究院，国家化妆品质量检验检测中心（广州），广东广州511447；2．广东省药品检验所，广东广州510663）摘要：采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）建立了化妆品中15种痕量N-亚硝胺化合物的分析方法。
水剂样品以水或乙腈分组超声提取，膏霜乳液样品采用亚铁氰化钾-乙酸锌溶液沉淀大分子或者饱和氯化钠-乙腈盐析分组处理后，以Agilent Poroshell 120 SB-Aq（100 mm×3.0 mm，2.7 μm）色谱柱分离，经大气压化学电离源（APCI）电离，多反应监测模式检测，以同位素内标法定量。
结果表明，15种N-亚硝胺化合物在相应质量浓度范围内线性关系良好（r2＞0.995），检出限和定量下限分别为5~15 ng/g和15~45 ng/g。
水、乳、膏霜3种化妆品基质在25、50、100 ng/g加标水平下的平均回收率为88.0%~111%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%~9.8%。
该方法用于市售化妆品检测，发现13批次样品检出N-亚硝基二乙醇胺（NDELA），其中1批次超限量值。
方法的专属性强，灵敏度高，精密度好，解决了N-亚硝胺化合物稳定性差、易被干扰等问题，适用于化妆品中15种N-亚硝胺化合物的痕量测定。
关键词：N-亚硝胺化合物；化妆品；超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）；大气压化学电离源中图分类号：O657.63；O623.732文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）11-1469-10 Determination of Fifteen N-nitrosamine Compounds in Cosmetics by Ultra Performance Liquid Chromatography-TandemMass SpectrometryWANG Yi1，LIANG Wen-yao1，HE Guo-shan1，CHEN Zhang-hao2，ZHOU Zhi-ming2，WU Qian1，XI Shao-feng1，TAN Jian-hua1*（1．Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute，National Quality Supervision and Testing Center for Cosmetics（Guangzhou），Guangzhou 511447，China；2．Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou 510663）Abstract：An ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric（UPLC-MS/MS）method was established for detecting 15 trace N-nitrosamine compounds in cosmetics. The final estab⁃lished method involved ultrasonic extraction of cosmetics using water or acetonitrile for different com⁃pounds. The samples were treated with potassium ferrocyanide-zinc acetate solution for precipitating macromolecules or saturated sodium chloride-acetonitrile for salting out.An Agilent Poroshell 120 SB-Aq（100 mm × 3.0 mm，2.7 μm） chromatography column was used for separation，followed by atmospheric pressure chemical ionization（APCI） source and multiple reaction monitoring mode detec⁃tion in the isotope internal standard method for quantification. The result showed good linearity（r2> 0.995） for the 15 N-nitrosamine compounds in their respective concentration ranges，with detection and quantitation limits of 5-15 ng/g and 15-45 ng/g，respectively.The average recoveries for the three cosmetic matrices（aqueous，emulsion，cream） at spiked levels of 25，50，100 ng/g were be⁃tween 88.0% and 111%，with relative standard deviations（RSD，n=6） of 1.4%-9.8%. The method was applied to the detection of commercial cosmetics and N-nitrosodiethanolamine（NDELA） was de⁃tected in 13 batches，with one batch exceeding the limit. The strong specificity，high sensitivity，and good precision made the method could solve the problems of poor stability and easy interference ofdoi：10.19969/j.fxcsxb.23051602收稿日期：2023－05－16；修回日期：2023－06－10基金项目：广东省药品监督管理局化妆品风险评估重点实验室专项（2021ZDZ03）；广东省市场监督管理局科技项目（2022CZ06）∗通讯作者：谭建华，博士，正高级工程师，研究方向：色谱－质谱检测技术研究，E-mail：tanjianhua0734@第 42 卷分析测试学报N-nitrosamine compounds，and was suitable for the trace determination of 15 N-nitrosamine com⁃pounds in cosmetics.Key words：N-nitrosamine compounds；cosmetics；ultra performance liquid chromatography-tan⁃dem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）；atmospheric pressure chemical ionization（APCI） sourceN-亚硝胺化合物是一类具有N-亚硝基结构的化合物，因取代基的不同，形成了种类繁多的同系物，目前已发现超过300种［1］。
Keap1
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)发病率占据肺癌的75%~80%。
肿瘤细胞进展快且易扩散转移，临床常采用手术、放化疗等进行治疗，但5年生存率低于60%[1-2]。
氧化应激是由活性氧(ROS)生成量增加所致，ROS积累可诱导肺癌细胞凋亡，清除ROS 可阻止癌细胞凋亡，即肺癌细胞存活依赖于癌细胞自身抗氧化能力[3]。
Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like epichlorohydrin-associated protein-1，Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor E2related factor 2，Nrf2)信号通路在癌症中发挥重要调控作用，氧化应激可激活Keap1，促使Keap1-Nrf2复合物裂解，Nrf2转移至细胞核内，可激活下游靶基因表达，参与肺癌发生发展过程[4]。
Nrf2可维持氧化还原稳态，ROS侵袭细胞时，Nrf2可进入细胞核，结合抗氧化反应元件(ARE)转录编码各种抗氧化蛋白、代谢酶基因，抑制氧化应激反应[5-6]。
目前氧化应激、Keap1/Nrf2信号通路在NSCLC发生过程中的机制尚未明确。
基于此，本研究尝试分析Keap1/Nrf2信号通路与临床病理参数、氧化应激指标的相关性，探讨其在NSCLC氧化应激机制中的作用，为临床研制新药提供参考依据。
1资料与方法1.1一般资料选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象。
纳入标准：符合NSCLC诊断标准[7]；术前未接受放化疗、免疫治疗者；预计生存期≥6个月；符合手术适应证、禁忌证；Karnofsky功能状态评分≥70分；签署知情同意书。
排除标准：合并凝血功能障碍、肝肾功能障碍、其他恶性肿瘤者；伴有急/慢性感染者；伴有精神疾病者；既往腹部相关外科手术史者。
所有患者均行肺癌根治性切除术，术中收集癌组织、癌旁组织(距离癌组织5cm范围内正常组织)，其中男性63例，女性37例；年龄46~67岁，平均(56.32±3.16)岁；体质量指数(BMI)17~30kg/m2，平均(23.16±2.03)kg/m2；病理类型：鳞癌58例、腺癌42例；病理分级[8]：Ⅰ~Ⅱ级51例、Ⅲ级49例；T分期[9]：T1~T253例、T3~T447例；N分期：N055例、N1~N245例。
和厚朴酚衍生物的合成以及细胞毒性和凋亡活性评价
６ ｔ 和厚 朴 酚 及 其 衍 生 物 处 理 合 适 的 时 间 ０￣ Ｍ 后， 于倒 置显微 镜下 观察 细胞形 态 ， 至大 部分 细胞 形 状变圆， 小部分 飘起 时收 集 处 理 组及 空 白对 照 组 的 所有 细胞 ， 生理 盐水 清洗两 次 ， ４ 用 ＂ 冷 ７ 乙醇 Ｃ预 ０， ９ ６ 转到 Ｅ Ｐ管 中 ， 固定 过 夜 。３ ０ ０ ０转 离 心 ３ ｎ去 除 ｍｉ
像。
２５ 琼脂 糖 凝 胶 电泳 分 析 ＤＮ 断 裂 （ ＮＡ ｌｄ ． Ａ Ｄ ａ—
ｄ ｒ ｅ）
前用 Ｐ Ｓ ｐ 值 ７４ 配制成 ２ｍｇｍｌ Ｂ （Ｈ ．） ０ ／ 的储存液 ，
碘化 丙 锭 （ １、 酶 、 白酶 Ｋ和 ＲＮＡ酶 等为 Ｓｇ Ｐ）胰 蛋 ｉ－ ｍａ 司 产 品 ， 置 荧 光 显 微 镜 ： ｅ ｓ 司 ， ｉ－ 公 倒 Ｚｉ 公 ｓ Ａｘｏ
取 对 数 生 长 期 细胞 ， 酶 消 化 吹打 混 匀细 胞 后 胰
１ ５ 的琼脂糖凝胶 ， ２ ｕ 裂解样品 ， ． 取 ０ｌ 加入 ４ ｌ ｕ 的
６ ｏ ｄｎ ｕｆｒ 上 样 ，０ 电泳 １ ５ ， 电泳 成 ×ｌａ ｉｇｂ ｆｅ ， ５Ｖ ．ｈ在
计数 ； 调整细胞悬液浓度每毫升 ３ ０ ， ９ 孔板 ×１４于 ６ 中每孔加入 １ ０ １ ０ ￣ 细胞悬液 ； 过夜 ， 用培养基稀释和 厚朴酚及其衍生物的储备液 。用一系列和厚朴酚及
抗 肿瘤 ［ 等 多种药 理 学活性 。和厚朴 酚抗肿 瘤活性 ７
主要 与抑 制肿瘤 细胞 增 殖 、 导 肿瘤 细 胞 凋亡 ［引、 诱 ８ ＇ 抑 制肿 瘤 的转移 、 制血 管 的生 成有 关 ［。 近 文 抑 】 。最 。 献 报道 ， 和厚 朴 酚 的一 些 衍生 物 呈 现 出 与和 厚朴 酚 相 似 的药理 学活性 ：１２ （） ｒ 从天 ｆ５属 木 兰科植 － Ｉ
乙酰胆碱酯酶抑制剂
上海应用技术学院研究生课程《高等天然产物化学》试卷2014 / 2015 学年第1 学期课程代码：NX0702013论文题目：乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展姓名：芮银146061414康满满146061409专业：制药工程学院：化工学院乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展芮银，陈祎桐，康满满摘要：本文阐述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展，介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂的各种来源如植物、微生物等，及其抑制乙酰胆碱的活性物质。
在此基础上，总结了几种现代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快AD药物资源的开发利用进程。
这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光显色法、电喷雾质谱法等。
但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中的应用还处在起步阶段。
关键词：乙酰胆碱酯酶抑制剂，筛选方法，薄层显色法，荧光显色法The progress of acetylcholinesteraseinhibitorsRui Yin, Chen Yitong, Kang ManmanAbstract：In this artical, the research elaborates progress of acetylcholinesterase inhibitors (AChEI), and introduces a variety of sources for drug treatment acetylcholinesterase inhibitors such as plants, microorganisms, and its active ingredients. On this basis, the review summarizes several modern analytic techniques such as Ellman's method which based on the colorimetric method, TLC chromogenic method, fluorescent color method, Electrospray ionization mass spectrometry and so on. However, at present, the application of modern analytic techniques in AD drug resources is still in infancy.Key word: Acetylcholinesterase inhibitors, Screening Methods, TLC chromogenic method, Fluorescent color method目录摘要.................................................................................................错误!未定义书签。
15523666_迷迭香酸对哮喘小鼠氧化性肺损伤的保护作用
$ 材 料 与 方 法
$C$ 材 料 !3!3!试验动物!0""8XDC[ 级雌性 &;B&&S 小鼠购自 广 西 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心"动 物 合 格 证
号!D#2*%桂'"8!$?888"# 试 验 前 适 应 性 饲 养:P" 自由饮水 饮 食"饲 养 环 境 温 度 "$ c l! c"相 对 湿 度 $85 "085 # !3!3" 主 要 试 剂 和 药 品 9,D$D,'$1DZ?CQ 检测试 剂 盒 均 购 自 碧 云 天 生 物 技 术 研 究 所*,(; 购自 DEX\@ 公 司*液 态 铝 佐 剂 购 自 >OHM\I 公 司# 肿节风药材购自广 西 玉 林 中 桂 药 材 有 限 公 司"药 材
%!3广西大学动物科学技术学院"南宁 4:8884*"3广西畜牧研究所"南宁 4:888!'
摘要为评价迷迭香酸对哮 喘 小 鼠 模 型 氧 化 性 肺 损 伤 的 保 护 作 用"本 研 究 用 卵 清 蛋 白 %,(;'致 敏$激 发 雌 性 &;B&&S小鼠建立哮喘模型"并用 ,(; 和 Z"," 联合激发小鼠作为氧化肺损伤阳性对照模型#在最后一次滴鼻激 发 "$O 后 "取 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 %&;B['进 行 细 胞 计 数 并 测 定 活 性 氧 %9,D'$超 氧 化 物 歧 化 酶 %D,''和 谷 胱 甘 肽 过 氧化物酶%1DZ?CQ'水平"取左侧肺脏固定做 Z= 染色#结果显示"迷迭香酸可明显减少 &;B[ 中 细 胞 总 数 和 嗜 酸 性粒细胞数目"显著抑制肺组织和 &;B[ 中 9,D的产生"升高 D,' 和 1DZ?CQ水 平"改 善 肺 组 织 病 理 变 化# 本 试 验 结 果 表 明 "迷 迭 香 酸 对 氧 化 肺 损 伤 起 到 明 显 的 保 护 作 用 # 关 键 词 迷 迭 香 酸 *哮 喘 *氧 化 性 肺 损 伤 *抗 氧 化 中 图 分 类 号 9"0434 文 献 标 识 码 ; 文 章 编 号 !+6!?6":+%"8!6'!"?:+48?8+
高效液相色谱_串联质谱法测定动物肝脏中20种全氟烷基类化合物
高效液相色谱_串联质谱法测定动物肝脏中20种全氟烷基类化合物何建丽;彭涛;谢洁;代汉慧;陈冬东;岳振峰;范春林;李存【摘要】A method for simultaneous determination of 20 Perfluorinated alkyl substances ( PFAS) in animal liver using QuEChERs and HPLC_MS/MS technique was developed. The samples were extracted with 0.1%hydrochloric acetonitrile and cleaned up with C18 ,N_Propylethylendiamine ( PSA ) and graphitized carbon blacks ( GCB ) . The analytes were separated by a reversed phase C18 column and gradiently eluted with a mixed solution of 5 mmol/L ammonium acetate methanol and 5 mmol/L ammonium acetate. The samples were quantified using isotope internal standard and external standard with the matrix matched standard calibration curve method. Good linearity was obtained for all the 20 PFAS at the concentration of 0. 1-10 μg/L with the linear correlation coefficients more than 0. 9995. The limits of detection (LOD) and the limits of quantification ( LOQ) for PFAS were 0. 05-0. 2 μg/kg and 0. 4-0. 5 μg/kg, respectively. The recoveries at three different concentratio n levels ( 0 . 5 , 2 and 5 μg/kg ) were in the range of 70 . 3% -108 . 1%. The repeatability expressed as relative standard deviations (RSD) was ranged from 2. 1% to 11. 9% (n=6).%建立了QuEChERs_高效液相色谱_串联质谱( HPLC_MS/MS)同时测定动物肝脏中20种全氟烷基类化合物(Perfluorinated alkyl substances, PFAS)残留量的分析方法。
迷迭香酸对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制
迷迭香酸对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制杨沛霖;高玲;林彩霞;王巍;许立拔;巫玲玲;蒋伟哲;焦爱军【摘要】目的探讨迷迭香酸对鼻咽癌CNE-1细胞(以下称CNE-1细胞)增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法体外培养CNE-1细胞,取传3代对数生长期CNE-1细胞,随机分为空白对照组及迷迭香酸10、20、30 μmol/L组,迷迭香酸各组分别加入含相应浓度迷迭香酸的培养液,空白对照组加入等量不含迷迭香酸的培养液.采用MTT法检测各组培养24、48、72 h时细胞增殖抑制率.迷迭香酸作用48 h时,其浓度变化与细胞增殖抑制率的线性关系较好,故选择迷迭香酸作用48 h 进行后续实验.取各组作用48 h细胞,采用Hochest 33258染色法观察各组细胞形态变化,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组PTEN、PI3 K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达.结果各组作用48 h时,随着迷迭香酸浓度增加,细胞凋亡特征逐渐明显.迷迭香酸各组细胞凋亡率均高于空白对照组(P均＜0.05),迷迭香酸各组间细胞凋亡率比较P均＜0.05.与空白对照组比较,迷迭香酸各组PTEN蛋白表达逐渐上升,p-H3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达逐渐降低,且随着迷迭香酸浓度增加,各蛋白表达变化越明显(P均＜0.05).而各组间PI3K、Akt、mTOR蛋白表达变化不明显(P均＞0.05).结论迷迭香酸能剂量依赖性地抑制CNE-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控PTEN、PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.%Objective To investigate the effects of rosmarinic acid (RA) on cell proliferation and apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 and to identify its possible mechanism.Methods The human nasopharyngeal carcinoma cells line CNE-1 were cultured in vitro and the cells of the third generation in the logarithmic phase were randomly divided into the blank control group and RA (10,20,30 μmol/L) treatmentgroups.The cells of the RA groups were cultured in nutrient solutions with different concentrations of RA,and cells in the blank control group were cultured in the same nutrient solution without RA.Each group was cultured for 24 h,48 h,and 72 h,respectively.And then the cellular growth inhibition rate in each group was determined by MTT.After CNE-1 cells were incubated with RA for 48 h,we found that the relationship between concentration changes of RA and the rate of cellular growth inhibition was better than others.Therefore,the following experiment was carried out after CNE-1 cells were incubated with RA for 48 h.After that,the morphological changes of the cells were observed under a fluorescence microscope with Hoechst 33258 staining.The apoptosis rate was detected by using flow cytometry with Annexin V-FTIC/PI staining,and the protein expression of PTEN,PI3K/ Akt/mTOR signaling pathway was detected by Western blotting,respectively.Results Compared with the blank control group,RA inhibited the proliferation of human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 in a dose-and time-dependent manner (P ＜ 0.05).Cells showed typical apoptosis state change and the apoptosis rate showed the way of dose-dependent manner after treatment by RA.The apoptosis rate of each RA treatment group was significantly higher than that of the blank control group (all P ＜ 0.05).Meantime,there was significant difference in the apoptosis rate among the RA treatment groups (all P ＜ 0.05).Compared with the blank control group,the protein expression of PTEN was up-regulated while the expression of p-PI3K,p-Akt,and p-mTOR were down-regulated (all P ＜ 0.05),whereas the expression of PI3K,Akt,and mTORwere not significantly changed (all P ＞ 0.05).Conclusion RA could inhibit the cell proliferation and induce the apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 with a dose-dependent manner by regulatingthe PI3K/ Akt/mTOR signal transduction pathway.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)036【总页数】5页(P1-4,后插1)【关键词】鼻咽癌;迷迭香酸;细胞凋亡;细胞增殖;磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路【作者】杨沛霖;高玲;林彩霞;王巍;许立拔;巫玲玲;蒋伟哲;焦爱军【作者单位】广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021;广西医科大学药学院,南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R739.6鼻咽癌是我国南部省份以及东南亚地区常见的恶性肿瘤之一。