细胞基质的质量控制

发布日期20021023

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标题细胞基质的质量控制

作者审评二部

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细胞基质的质量控制

大多数现行疫苗是通过组织培养的方法制备的，所谓组织培养是体外培养一

定量的动物细胞并接种病毒，利用病毒在细胞内增殖，得到预期的病毒抗原，

然后制成疫苗。

众所周知，疫苗的质量控制是全面的质量控制，包括原材料、生产过程、半

成品、成品，细胞基质是疫苗生产的主要原材料，其质量控制直接影响终产

品的安全性。本文简要介绍WHO对细胞基质质量控制的要求。

一、细胞基质的种类

1.原代细胞：动物组织经胰酶消化培养成单层细胞，用于病毒的培养。如地

鼠肾细胞、沙鼠肾细胞、猴肾细胞、兔肾细胞、鸡胚细胞等。在疫苗的生产

中使用了40多年，证明是安全有效的。

优点：1）相对简单；2）具有广泛的敏感性。

缺点：1）有较严重的潜在的病毒污染问题，动物的级别很难达到SPF级；

2）来自不同动物的质量和敏感性有差异；3）动物来源越来越困难，尤其是

灵长目动物。

2.二倍体细胞：具有一定的传代寿命，超过一定代次，细胞衰老。如2BS

细胞、MRC-5细胞等。在疫苗的生产中使用了30多年，证明是安全有效的。

优点：1）能够充分鉴定和标准化；2）使用种子库系统生产。

缺点：1）不易大规模生产，尤其是不能微载体生物反应器。2）对培养基及

牛血清的要求较高。

3.传代细胞：理论上具有无限传代的寿命。如Vero细胞、BHK21细胞等。

优点：1）能够充分鉴定和标准化；2）使用种子库系统生产。

3）可大规模生产，可用于微载体生物反应器。4）对培养基及牛血清的要求不高。

缺点：理论上有致肿瘤性的危险。但已证明Vero细胞在134~150范围内使用，无致肿瘤性。

二、动物细胞的潜在危险

1.病毒污染：

1）人类或灵长目动物细胞可能携带潜在病毒，如乙型肝炎病毒、逆转录病毒等。

2）禽类组织细胞隐藏着外源和内源性逆转录病毒，

3）啮齿类细胞隐藏着外源和内源性逆转录病毒，

2.细胞DNA

l原代细胞和二倍体细胞的残余DNA无危险性。

l传代细胞系的DNA具有是其他细胞生长失控和产生致肿瘤活性的潜在能力。并认为＜10ng/剂量是安全的。

3.促生长蛋白

生产细胞可分泌生长因子，认为不构成严重危险。但使用传代细胞生产的疫苗，应进行纯化，去除细胞蛋白。

三、WHO的有关要求

（一）对所有生产细胞的要求

1.GMP

1）规范的操作；

2）原材料的选择，细胞的供体应无传染病或病因不能确定的疾病。

2.细胞培养中的有关检测

1）牛血清：无细菌、真菌、支原体和感染性病毒。有些国家还要进行无噬菌体的检测；有些国家使用辐射的方法灭活潜在污染的病毒。用TSE非疫区的牛血清。

2）胰酶：无细菌、真菌、支原体和感染性病毒，特别进行牛或猪细小病毒的检测；有些国家使用辐射的方法灭活潜在污染的病毒。

3）生产结束时的检测：无细菌、真菌、支原体。

4）生产结束时检测外源性病毒。

（1）25%的对照细胞（不接种病毒）无病变；（2）豚鼠红细胞血吸附法检

测阴性；（3）转种人二倍体细胞、本细胞系的其他批次、其他种属的细胞系无病变并血吸附阴性。

（二）对传代细胞的要求

1.建立主代细胞库、工作细胞库

对于主代细胞库须进行一次全面的外源因子检定，检测可能存在的内源性和外源性外源因子，特别注意已知以潜伏状态存在于来源物种中的因子。主代种子库检定合格后，工作种子库和生产细胞只进行一般的外源因子检查。l无菌试验（细菌、霉菌、支原体）

l细胞法检测病毒外源因子：至少用107细胞转种人二倍体细胞、本细胞系的其他批次、其他种属的细胞系，无病变并血吸附阴性。

l用动物和鸡蛋检测病毒因子：

1）乳鼠2窝（每窝至少10只），脑内、腹腔注射。

2）成鼠10只，15~20克，脑内、腹腔注射。

3）豚鼠5只，350~450克，腹腔注射

4）家兔5只，1.5~2.5kg，皮下注射

5）鸡胚10只，9~11日龄，尿腔囊。

6）鸡胚10只，5~6日龄，卵黄囊。

以上每组接种待检细胞数量不少于107个，动物观察至少4周，鸡胚至少观察5天，应键存。

l逆转录病毒的检测：一般用高敏感性的细胞扩增待检细胞培养物中的逆转录病毒，然后进行检测。

1）感染性检测

2）透射电镜检测

3）逆转录酶分析

l致肿瘤性检测

动物：1）裸鼠；2）新生小鼠或大鼠经抗胸腺血清处理；3）无胸腺小鼠。每只动物皮下注射107细胞，以Hela细胞（106 ）作阳性对照，有结节的观察1~2周，解剖做病理检查。无结节的，一半观察21天，另一半观察12周，解剖做病理检

查，应为阴性。

（三）二倍体细胞

除要传代细胞的检测项目外，增加细胞染色体分析。

检测200个分裂中期的细胞，计算染色体数目，检测超二倍体、亚二倍体、

多倍体、断裂和结构异常的比例。

四、小结

细胞基质在疫苗生产中必不可少，其质量的优劣可直接影响疫苗的质量。细

胞基质无外源因子污染，是保证疫苗具有安全性的重要因素之一。对于已使

用多年并被实践证明是安全的细胞系，可通过细胞种子库及检定进行质量控

制；对于一个新的细胞系，应进行全面的系统的鉴定和检定，确保其不含有

内源性和外源性的污染。

类别:审评二部

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