细胞培养所需物资统计
细胞培养费用
细胞培养费用背景细胞培养是生物学研究中一项重要的实验技术，它可以帮助研究人员在体外环境中培养和繁殖细胞。
然而，细胞培养不仅需要耗费时间和精力，同时也需要一定的费用来购买培养基、细胞培养器具和其他必需品。
本文档将详细介绍细胞培养费用的相关内容。
细胞培养费用的组成细胞培养费用通常包括以下几个方面的开支：1. 培养基费用：培养基是细胞培养的基础，它提供了细胞所需的养分和环境条件。
根据不同细胞类型和研究需求的不同，培养基的成分和配方也有所差异。
培养基费用的多少取决于所选用的培养基品牌和规格。
培养基费用：培养基是细胞培养的基础，它提供了细胞所需的养分和环境条件。
根据不同细胞类型和研究需求的不同，培养基的成分和配方也有所差异。
培养基费用的多少取决于所选用的培养基品牌和规格。
2. 细胞系费用：如果需要进行细胞培养研究，就需要购买相应的细胞系。
不同细胞系的价格各不相同，通常受到细胞类型、来源和研究用途的影响。
一些常用的细胞系可能需要长期维持和更新，这也会增加细胞培养费用的开支。
细胞系费用：如果需要进行细胞培养研究，就需要购买相应的细胞系。
不同细胞系的价格各不相同，通常受到细胞类型、来源和研究用途的影响。
一些常用的细胞系可能需要长期维持和更新，这也会增加细胞培养费用的开支。
3. 培养器具费用：细胞培养所需的器具包括细胞培养箱、培养皿、离心管等。
这些器具的价格也不同，一般根据品牌、规格、材质和用途来确定。
培养器具费用：细胞培养所需的器具包括细胞培养箱、培养皿、离心管等。
这些器具的价格也不同，一般根据品牌、规格、材质和用途来确定。
4. 实验室耗材费用：在进行细胞培养过程中，还需要使用一些实验室耗材，如离心管、移液器、显微镜片等。
这些耗材的费用视实验需要以及使用频率而有所不同。
实验室耗材费用：在进行细胞培养过程中，还需要使用一些实验室耗材，如离心管、移液器、显微镜片等。
这些耗材的费用视实验需要以及使用频率而有所不同。
5. 设备维护费用：细胞培养过程中使用的设备，如细胞培养箱、显微镜等需要定期维护和保养。
细胞培养的必备设施、常用器材
一、细胞培养的必备设施
（一）无菌实验室 防止微生物污染和有害因素的影响 工作环境清洁、空气清新、干燥和
无烟尘。
（二）超净工作台
（三）恒温培养箱 变通电热恒温培养箱 CO2培养箱
(四)其他设备 倒置显微镜 电热鼓风干燥箱 电子天平 恒温水浴箱 离心机 压力蒸汽消毒器 液氮储存罐
（三）血清
血清必须贮存于–20 ～ -70℃，若存放于4℃， 请勿超过一个月。
一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。 若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养 基内一起过滤，勿直接过滤血清。
瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): 20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶 后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～ 45 ml。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度 改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
二、 灭菌
实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖， 高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置 于oven 中烘干。
实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌 170℃, 4 小时。
吸管、培养瓶、手术器械等置饭盒内高 压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置于 oven 中烘干。
（3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，以 115℃高压灭菌25分钟(以免葡萄糖破坏)，置 室温后4℃保存
（二）培养基（维持液、营养液）
目前常用的基础培养液均已商品化，如 RPMI1640，MEM，DMEM，F12等，可 根据培养需求合理选择，主要成分是氨 基酸、维生素、碳水化合物、无机离子 及其他一些辅助物质。
（三）橡皮器材（各种瓶或试管的塞子、 盖子）
【2017年整理】平滑肌细胞原代培养、传代、冻存方法及所需试剂
01年中国现代医学杂志贴壁法原代培养1.1细胞培养1.1.1培养液配制DMEM(美国Corning Cellgro公司),Hepes(15mmol/L),青霉素(100u/ml),链霉素(100mg/ml),优质胎牛血清(原代培养浓度20%,传代培养浓度10%,上海普飞澳洲胎牛血清)。
1.1.2培养器皿25cm2塑料培养瓶(Costar),培养面积25cm2;直径3.5cm培养皿。
1.1.3大鼠血管平滑肌细胞培养动物来源:健康Wistar大鼠,由第三军大学实验动物中心提供,雌雄不拘,体重150~180g。
动脉取材:断颈法处死Wis-tar大鼠,无菌条件下分离全段主动脉,立即置于含青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml的无菌生理盐水中。
每次取材2~3只大鼠。
贴壁法原代培养:超净工作台上,清除结缔组织,剥除动脉外膜。
纵向剖开血管,用眼科弯镊钝性刮除内膜面,以去除内皮细胞,剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。
用含青、链霉素的生理盐水反复冲洗,去除脂滴、血凝块等杂质及可能残留的内皮细胞和外膜成纤维细胞,然后将一次取材的2~3条血管的中膜组织混合在一起,置于无菌培养皿中。
滴加少许培养液使组织保持湿润,用眼科弯剪反复剪切成1mm×1mm大小的组织块。
并剪切好的组织小块均匀摆置于瓶底,组织块间距0.5cm。
盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶,让瓶底朝上并向瓶内注入适量培养液,于37℃孵箱内放置2~4h使组织块干涸并与瓶壁贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置培养3~5d。
待有细胞从组织块周围游出后换液。
1.1.4原代培养动脉VSMC的传代培养当大部分组织块长出细胞晕,并与相邻细胞的细胞晕接触时即可传代。
加入配制好的消化液使其恰好覆盖细胞表面,室温下大约1~2min,倒置显微镜下见细胞质回缩、细胞间隙增大时迅速翻转培养瓶使细胞脱离消化液,吸弃消化液,加入含胎牛血清培养液3~4ml终止消化并反复吹打瓶壁细胞使细胞脱壁,分散为单细胞悬液。
细胞培养中细胞计数标准操作规程
细胞培养中细胞计数标准操作规程一、目的：建立用于细胞培养过程的计数操作规范，以确保标准细胞在传代扩增前达到所需数量。
二、范围：细胞传代扩增前三、仪器：超净工作台、倒置显微镜四、试剂及耗材DMEM高糖完全培养基（DMEM基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于贴壁细胞培养）、1640完全培养基（1640基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于悬浮细胞培养）、0.25%胰酶、PBS缓冲液、75%乙醇、血细胞计数板、15mL离心管、1.5mL离心管、离心机、移液枪、吹风机等。
五、操作规程1.超净台紫外照射灭菌半小时，DMEM高糖完全培养基、1640完全培养基、PBS 溶液在37℃水浴锅中预热，0.25%胰酶平衡至室温。
2.从培养箱中取出培养至细胞丰度达80%以上的贴壁细胞的培养皿（10 cm2），用75%的乙醇喷洒后拿进超净台，用滴管移去培养皿中的培养液，用2mL的PBS 溶液清洗细胞一遍，弃去，以洗掉残存的培养液。
3.用移液枪吸取2 mL 0.25%胰酶至培养皿中，轻轻摇晃使胰酶覆盖整个平皿，在显微镜下消化3-5 min，观察培养皿中的细胞直至细胞变圆，从培养皿脱落。
4.向培养皿中加入2 mL的DMEM高糖完全培养基，终止胰酶消化，用吸管吹打细胞至细胞成单分散状态。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中，900 rpm离心3 min，小心弃去全部上清液。
（若为悬浮细胞，上述步骤可省略。
用吸管轻轻吹打培养液后全部转移入15mL离心管中，900 rpm离心4 min弃去上清即可。
）5.加入2mL PBS溶液将细胞沉淀吹打均匀。
6.取100µL细胞悬液至1.5mL离心管中，若为悬浮细胞，加入900µLPBS溶液稀释10倍；若为贴壁细胞，加入400µLPBS溶液稀释5倍。
7.将计数板及盖片用酒精浸泡洗净，用吹风机吹干，并将盖片盖在计数板上。
8.吸取10µL稀释后的细胞悬液滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告摘要：本实验旨在通过细胞培养的方法，观察和研究细胞的生长情况、传代和分化过程。
我们选择了XXX细胞株作为研究对象，并在适当的培养条件下进行培养和观察。
通过实验发现，细胞的生长能力受到培养基成分、温度和培养时间的影响。
细胞的传代实验进一步验证了细胞的增殖能力和稳定性。
此外，我们还进行了细胞分化实验，观察到细胞在特定培养条件下，能够展示出不同的形态和功能。
引言：细胞培养是生物学研究中常用的实验手段之一，也是体外研究细胞生物学行为的重要工具。
通过控制培养条件，可以使细胞在体外自组织和不断增殖，为我们研究细胞的生长、分化和功能提供了便利。
本报告将详细介绍细胞的培养、传代和分化实验的过程和结果。
材料与方法：1. 细胞株选择：选择XXX细胞株作为研究对象。
2. 培养基配制：根据细胞株的需求，配制适当的培养基，包括营养成分、生长因子等。
3. 细胞培养：将细胞接种于培养皿中，放置于恒温培养箱中，培养温度为37℃，CO2含量为5%。
4. 细胞观察：利用显微镜观察细胞的生长情况和形态变化。
5. 细胞传代：当培养皿中的细胞达到一定密度时，将其进行传代，即将细胞分散至新的培养皿中，并继续培养。
6. 细胞分化：在特定的培养条件下，诱导细胞分化形成不同功能细胞。
结果与讨论：1. 细胞培养实验：经过5天的培养，观察到细胞呈现出快速增殖的趋势。
细胞形态呈现为充实和贴壁生长，呈单层排列，细胞核呈椭圆形，并具有较高的核质比。
这表明细胞在适当的培养条件下能够正常生长和增殖。
2. 细胞传代实验：经过3次的传代实验，我们观察到细胞的增殖能力和稳定性。
每次传代后，细胞的形态、生长速度和增殖能力都相对稳定。
这说明细胞在体外培养过程中，能够保持其生物学特性和遗传信息的稳定性。
3. 细胞分化实验：在特定培养条件下，如改变培养基成分或添加特定的诱导因子，我们观察到细胞的形态和功能出现了明显的变化。
例如，在添加特定的分化因子后，细胞能够分化为不同细胞类型，如神经元和肌肉细胞。
细胞培养小实验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程，包括原代培养和传代培养。
2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。
3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
三、实验用品1. 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。
2. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，剪碎后用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，置于CO2培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
2. 传代培养（1）当细胞达到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液按1：2的比例传代到新的培养皿中。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
3. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数器。
（2）计数细胞数量，计算细胞密度。
4. 细胞形态观察（1）取细胞培养皿，用盖玻片覆盖。
（2）置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。
五、实验结果1. 细胞生长情况：原代细胞在培养皿中生长良好，细胞密度逐渐增加。
传代培养后，细胞生长速度略有下降，但总体状况良好。
2. 细胞形态：细胞呈多边形，细胞核清晰可见，细胞间连接紧密。
3. 细胞计数：细胞密度为1×10^6个/mL。
六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。
2. 细胞在体外培养过程中生长良好，细胞形态正常。
3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。
七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程，了解了无菌操作规范，并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
细胞培养实验步骤
细胞培养实验步骤细胞培养是一种常用的实验技术，用于研究和培养人类及动物细胞以及微生物细胞，以便进行细胞生物学、免疫学、生物药剂学等领域的研究。
下面是细胞培养的一般步骤，供参考：1.预备培养物品：包括培养基、生长因子、惰性气体（例如二氧化碳、乙烷等）等。
2.消毒操作：将培养器皿、培养板、培养液等较小的物品放入70%乙醇中浸泡，或用高温高压灭菌。
3.培养基配制：根据需要的培养细胞类型选择相应的基础培养基（例如DMEM、RPMI-1640等），根据实验要求添加适当的补充物质（如胎牛血清、抗生素等），调节pH值。
4.细胞分离和传代：a）将需要培养的细胞从体内或体外取出；b）用消化酶（如胰蛋白酶）或化学脱附剂（如牛血清白蛋白）处理细胞；c）通过离心等操作，去除胶原颗粒、纤维素等杂质；d）将细胞悬浮于培养基中，数量适量；e）将细胞装入培养皿中，加入适量的培养基。
5.细胞观察：使用显微镜观察细胞的生长状态、数量、形态特征等。
6.细胞培养环境控制：a）保持恒定的温度：多数细胞培养在37℃下进行；b）提供合适的湿度：使用培养器内的水槽或加入水来增加湿度；c）提供适度的无菌环境：在洁净工作台或无菌箱内进行，注意操作无菌技术，避免细菌等污染细胞。
7.细胞培养的传代：细胞的生长速度快，细胞排列紧密，细胞密度太高会使细胞分泌代谢产物过多，阻碍细胞增殖，因此需要定期传代。
传代前要先将细胞分散（用胰蛋白酶或牛胰酶等处理），将培养皿中的细胞悬液分装到新的培养皿内。
8.细胞培养的净化：细胞培养过程中，细胞环境容易被菌落污染，因此需要进行细胞净化。
方法有：检测培养液的菌落数目，观察培养皿内是否有细菌、真菌等的生长，如发现污染现象，立即停止使用被污染的培养皿和培养液。
9.细胞培养的冻存：细胞培养过程中，保留一部分细胞进行冻存，以备后续的实验使用。
常用方法是将细胞悬液和DMSO混合后，存放在液氮中保存。
以上是细胞培养的一般步骤。
但不同类型的细胞具有不同的培养要求，实验者还需根据实际情况进行具体调整和处理。
细胞培养实验用品准备方案
细胞培养实验用品准备方案1.种类：1.1.细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与PaSteUrPiPet外，其它均为塑料无菌制品。
1.2.TC级培养盘表面均有coating高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask,plates,dishes,rollerbottle 依实验需要使用。
1.3.plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4.塑料离心管：15ml,50ml,均有2种不同材质，*ψpolypropylene(PP)为不透明材质，polystyrene(PS)为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。
1.5.glasspastuerpipet:9inch,用以抽掉废弃培养液等。
1.6.玻璃血清瓶(PyreXorDuranglassware)：100ml,250ml,500ml,1000ml2.清洗：2.1.新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05NHCl浸泡数小时，洗净后才开始使用。
2.2.用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净，勿加清洁剂清洗。
3.灭菌：3.1.实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121C,151b,20分钟，置于oven中烘干O3.2.实验用玻璃PaSteUrPiPet以干热灭菌170℃,4小时。
3.3.液体或是固体废弃物可用10%hypochloride溶液(次氯酸，即漂白水)或是蒸汽高压灭菌121℃,151b,20分钟处理。
无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3%。
来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培养箱)灭菌：先用3%。
新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75%酒精(3%。
细胞三代培养记录表
细胞三代培养记录表
细胞培养记录表是用于记录细胞培养过程中关键信息的重要工具。
通常包括细胞的信息、培养基配方、培养条件、细胞状态等内容。
在进行细胞培养时，记录表可以帮助实验者追踪细胞的生长情况，及时发现问题并进行调整。
一般来说，细胞培养记录表应包括以下内容：
1. 细胞信息，包括细胞株的名称、来源、传代次数、冻存情况等。
2. 培养基配方，记录使用的培养基成分及配比，以及是否添加补充物如血清、抗生素等。
3. 细胞培养条件，包括培养皿规格、接种密度、培养温度、CO2浓度、培养时间等。
4. 培养过程记录，记录每次培养的日期、细胞的观察情况、细胞传代情况、培养基更换情况等。
5. 细胞状态评估，记录细胞的形态、增殖情况、是否出现异常
现象等。
通过细胞培养记录表，实验者可以及时了解细胞的生长情况，发现并解决潜在问题，保证细胞培养的质量和稳定性。
这对于细胞实验的可重复性和结果的准确性至关重要。
同时，细胞培养记录表也是实验室管理和质量控制的重要组成部分，能够帮助实验室建立完善的质量管理体系，确保实验数据的可靠性和科学性。
因此，细胞培养记录表的完整性和准确性对于科研工作具有重要意义。
鸡胚原代细胞培养
鸡胚原代细胞培养[实验材料]9～10日龄鸡胚，Hank”s液50mL,0．5％水解乳蛋白液或MEM培养液20mL （内含犊牛血清1mL，双抗0．2mL，pH7．2)，O．25％胰蛋白酶5mL、7％NaHC031mL，手术剪，镊子，灭菌的培养皿，50mL三角瓶，滴管若干，链霉素小空瓶若干(加入细胞悬液培养用)，高压灭菌塞子若干，培养盘，蛋座,95％酒精，水浴锅。
[实验内容及操作程序]1．配液制备细胞前先在Hnak”s液中加青、链霉素，使其含量为青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL，用7％NaHC03调整pH至7．2~7．4,将胰蛋白酶调整pH7．6（玫瑰红色).置37℃水浴锅中预热备用。
2. 取胚及剪碎将胚蛋气室端向上直立于蛋座上，用碘酊消毒气室,以镊子击破卵壳并弃之，撕破卵膜揭之，继撕破绒尿膜、羊膜，取出胚胎于灭菌平皿中.剪去头部、翅爪及内脏，用Hank”s液（简称H液）洗去体表血液，移人灭菌三角瓶中，用灭菌剪刀剪碎鸡胚，使成为约1mm3大小的碎块,加5mL H液轻摇，静止1～2min，使其组织块下沉。
吸去上层悬液，依同法再洗2次，至上悬液不混浊为止，吸干H液留组织。
3．消化自水浴锅内取出预热的胰酶,按组织块量约3～5倍加入三角瓶中，1个鸡胚约需5mL胰酶，三角瓶上加塞,以免CO2挥发及污染。
37℃水浴约20min 左右，每隔5min轻轻摇动1次，由于胰酶作用，使细胞与细胞之间的氨基和羧基游离，待液体变混而稍稠，此是再轻摇可见组织块悬浮在液体内而不易下沉时，则需中止消化，如再继续消化下去可破坏细胞膜而不易贴壁生长，如果消化不够，则细胞不易分散。
4．洗涤取出三角瓶后静置1min，让组织块下沉后，吸去胰酶液,用10mL Hank”s液反复轻洗3次，以洗去胰酶，吸干上清液，留组织块。
5．吹打加2mL含血清的0．5％水解乳蛋白营养液或:MEM培养液,以粗口吸管反复吹吸数次，使细胞分散，此时可见营养液混浊即为细胞悬液。
细胞培养常用器材与试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作步骤培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。
若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。
这一过程可在超净工作台外操作。
实验步骤一、原代细胞的培养1.紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2.将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。
3.取1个高压后的新培养瓶，瓶口在酒精灯上消毒2-3次，旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次分别放于酒精灯两侧，把保种管在超净台外用酒精棉球擦拭下2/3后拿进超净台内在酒精灯上消毒保种管口2-3次放于台面左手边，取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取保种管内的细胞液，悬空移入培养瓶内。
4.拿出1支高压后的5ml定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于电动移液器上，再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3次，悬空进入培养基瓶内吸取4ml培养基再悬空移入培养瓶内，将培养瓶瓶口和瓶盖在酒精灯上消毒2-3次后拧紧平放，在瓶身做好实验标记。
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铝泊纸
器具灭菌
脱脂棉
细胞培养
牛皮纸
细胞培养
灭菌指示带
细胞培养
不锈钢弯头止血钳
细胞培养
不锈钢剪刀
细胞培养
称量纸
培养基配制
不锈钢药勺（一套）
培养基配制
试剂
培养基
细胞培养
根据细胞种类确定
胰蛋白酶
细胞培养
根据细胞种类确定
胎牛血清
细胞培养
根据细胞种类确定
PBS
细胞培养
根据细胞种类确定
碳酸氢钠
细胞培养
根据细胞种类确定
培养基配制
蓝盖血清瓶（100ml\250ml\500ml\1000ml）
培养基配制
烧杯（100ml\250ml\1000ml）
培养基配制
玻璃棒
培养基配制
封口膜
细胞培养
冻存管
细胞冻存
记号笔
细胞培养
一次性针头滤器（0.22um）
试剂配制
一次性针头注射器（10ml\50ml）
试剂配制
细胞计数板
细胞培养
盖玻片
细胞培养所需物资统计
分类
名称
用途
备注
仪器
超净工作台
细胞培养
二氧化碳培养箱
细胞培养
倒置显微镜
细胞培养
台式低速离心机
细胞培养
移液器（1000ul\200ul\10ul）
细胞培养
高压锅
细胞培养
烘箱
细胞培养
蠕动泵（及配套硅胶管）
细胞培养
电子天平
细胞培养
-80℃冰箱
细胞冻存
液氮灌
细胞冻存
冰箱（冷藏+冷冻
培养基存放
耗材
细胞培养瓶（T75,T25）
细胞培养
移液管（5ml\10ml\25ml）
细胞培养
枪头（1000ul\200ul\20ul）
细胞培养
8通道移液器
细胞培养
酒精灯
细胞培养
打火机
细胞培养
不锈钢饭盒
细胞培养
离心管（15ml\50ml）
细胞培养
离心管架
细胞培养
滤器（与血清瓶配套，直径6cm）
二氧化碳气体
细胞培养
超纯水
细胞培养
二甲基亚砜
细胞冻存
液氮
细胞冻存
95%乙醇
细胞培养
辅助
洁净工作服
无菌操作
一次无菌手套
无菌操作
一次性无菌口罩
无菌操作
一次性无菌帽
无菌操作