细胞培养技术PPT课件

起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。 此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相 区别。
4、多型细胞型： 有一些细胞，如神经细胞难以确定其规
Wilhelm Roux (1850-1924 )
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1907年Harrison 和1912年 Carrel开始把组织培养作为一种 方法，用于研究离体动物细胞 的培养。
他建立的鸡胚胎成纤维细胞 持续了34年之久(1912-1946)
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Alexis Carrel
France
Rockefeller Institute for
• 细胞保存条件：液氮罐 • 实验室安全：
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超净工作台
超净工作台的工作原理 是利用鼓风机驱动空气通 过高效滤器除去空气中的 尘埃颗粒，使空气得到净 化。净化空气徐徐通过工 作台面，使工作台内构成 无菌环境。
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• 紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操 作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒
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• 无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效 过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台， 紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生 素
• 细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板， 培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清
• 细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震 荡器，高速离心机，移液器
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其它添加成分
缓 冲 系 统 ， 常 用 为 HEPES （ N’-2-hydroxyethylpiperazine-N’-ethanesulfonic acid），缓冲效能 (pKa)在20℃时为7.55，37℃为7.31； HEPES不是起 维持pH恒定的作用，而是起恒定和抵抗快速pH变化的， 所以调整pH常常用NaHCO3溶液。
• 庆大霉素：每毫升100单位——方便、广谱、 稳定。
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完全培养基的组成
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培养基的配制
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平衡盐溶液
主要用于作为稀释和灌注的液体，维持细胞 渗透压，提供缓冲系统，使培养液的酸碱度维 持在培养细胞生理范围内，提供细胞正常代谢 所需的水分和无机离子等。 常用的有PBS，Hank’s等。
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有机补充物，如丙酮酸钠， 谷胺酰氨等。 促细胞分裂因子，如生长因子类的FGF(成纤
维细胞生长因子)，EGF(表皮生长因子)。 贴壁和铺展因子，如胶原蛋白，纤粘蛋白等。 可根据培养细胞的特殊要求进行添加。
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体外培养细胞的形态
（一）贴壁型：大多数培养细胞贴附生长，属 于贴壁依赖性细胞，判断细胞形态时不能按照 体内组织学标推判定，仅大致分成以下四型： -成纤维细胞型 -上皮型细胞 -游走细胞型 -多型细胞型
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大容量高压灭菌器
手提式高压灭菌器
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滤菌器
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培养器材
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CO2培养箱
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自动双重纯水蒸馏器
纯水仪
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液氮罐
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培养细胞的生长条件
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细胞培养用液的配制
水：新鲜的三蒸水或去离子水
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培养基：
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合成培养基：
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和 数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许 多种培养基，如M199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
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成纤维细胞
心肌细胞
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2、上皮型细胞：
细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核， 细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜 状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连， 很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞 如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、 胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
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名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水 化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低。缺点：缺少某些成分，不能完全满足体 外细胞生长需要。
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抗菌素的使用：
• 在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌 素，以抑制可能存在的细菌的生长。
• 通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基 内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升 100单位。
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成纤维细胞型
名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源： 由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤 维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不 规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突 起，中有卵圆形核 生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连 成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离 的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突 起
Medical Research
New York, NY, USA
b. 1873
d. 1944
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One of Carrel's D-flasks which were manufactured from PYREX glass
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细胞培养的条件及环境
- 营养条件 - 无菌环境 - 恒定温度 - 气体 - PH值
来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如：皮肤及其 衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤
形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形， 中有圆形核
生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄 层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群 而单个活动
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上皮型细胞
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3、游走细胞型： 呈散在生长，一般不连成片，胞质常突
细胞培养基础
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主要内容
1.细胞原代传代培养概念及培养细胞的应用 2.细胞培养的条件及环境 3.体外培养细胞类型及形态 4.细胞培养基本技术 5.细胞原代培养方法 6.培养细胞活性测定 7.细胞传代培养方法、细胞保存
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细胞原代传代培养概念及培 养细胞的应用
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前言
1885年Roux最早尝试使组 织离体培养，材料是鸡胚神经 板，采用生理盐水为培养液， 并首次采用组织培养这个术语。
• 紫外灯大约分为3种，分别是UVA、UVB和UVC。 UVC是目前工业上所应用的紫外线杀菌灯 (253.7nm)，是最常见的一种。高功率紫外线灯 经8000小时，一般紫外线灯则在3000小时後功率 会降至原来70％，这时就应该更换。国内的标准 是：30W新灯管的辐射强度≥90uw/cm2为合格； 使用中辐射强度应≥70uw/cm2。少于此标准就要 更Байду номын сангаас。