绵羊的胚胎移植技术要点分析

羊的胚胎移植是指将供体羊进行超数排卵配种后回收早期胚胎，移植到同一品种生理状况相同的另一只受体体内继续妊娠产生后代羔羊的技术。

该技术以“借腹怀胎”的方式，达到增加良种后代的目的，以胚胎冷冻保存的方式，达到对优良畜禽遗传资源的保护，为遗传资源保护和开发利用提供了技术支撑。

提供胚胎的个体称为供体，接受胚胎的个体称为受体[1]。

胚胎移植最早应用于牛的繁育，羊的胚胎移植起步晚、发展慢。

但是近年来，胚胎移植在羊的生产应用中研究增多，主要集中在超排处理、移植妊娠率、胚胎冷冻保存等方面，为该技术的推广及产业化夯实了基础。

本文将从供受体羊的选择与管理、移植季节选择、药物和器械准备、手术方法选择、冲胚及移植过程、胚胎冷冻保存、影响因素及应用前景等方面简述分析绵羊胚胎移植技术要点，以期为开展胚胎移植并取得良好效
果提供参考。

1供受体母羊的选择
1.1供体母羊的选择原则
生产中，供体母羊受遗传价值、健康状况、既往繁殖史、年龄和胎次、体质体况等方面的影响，一般选择2~4周岁的经产母羊较为适宜[2]。

供体母羊要提前选择，群体数量要大，以保证有足够的数量来观察发情周期，调整膘情在7成以上，不宜过肥或过瘦。

若供体母羊在喂乳期间，必须断奶30d 后再选择，且要加强补饲，恢复体况。

1.2受体母羊的选择原则
选择受体母羊不需要考虑遗传性能、种用价值，而要注重健康状况、繁殖性能，只要能适应当地气候环境条件，繁殖性能好，母性强，无传染性疾病和膘情在7成以上皆可。

收稿日期：2022-12-12
基金项目：农业农村部、财政部国家绒毛用羊产业技术体系专项（CARS-39-31）；贵州省第六批人才基地项目（黔人领发〔2018〕3号）；贵州省
科研机构创新能力建设专项（黔科合服企[2021]12-02）；毕节市重大科技计划“揭榜挂帅”项目（毕科合[2021]1-03）；2022年贵州省种业发展项目“威宁绵羊遗传资源抢救性收集和保护”
作者简介：郭振刚，男，1986年生，硕士，高级畜牧师。

*通信作者：吴萍，女，1980年生，高级畜牧师。

绵羊的胚胎移植技术要点分析
郭振刚1,2，宋德荣1，吴
瑛1,2，吴道全3，吴
萍1,2*
1.贵州省毕节市畜牧兽医科学研究所，贵州毕节551700；
2.贵州新乌蒙生态牧业发展有限公司，贵州赫章
553200；3.贵州省毕节市老科学技术工作者协会，贵州毕节551700
摘要羊的胚胎移植是指将供体羊进行超数排卵配种后回收早期胚胎，移植到同一品种生理状况相同的另一只受体体内继续妊娠产生后代羔羊的技术。

该技术以“借腹怀胎”的方式，达到增加良种后代的目的，以胚胎冷冻保存的方式，达到对优良畜禽遗传资源的保护，为遗传资源保护和开发利用提供技术支撑。

本文从供受体羊的选择与管理、移植季节选择、药物和器械准备、手术方法选择、冲胚及移植过程、胚胎冷冻保存、影响因素及应用前景等方面详细介绍了绵羊胚胎移植技术要点，以期为开展胚胎移植并取得良好效果提供参考。

关键词胚胎移植；超数排卵；同期发情；供体母羊；受体母羊
2供受体羊术前管理
供受体羊，因为接受胚胎移植，需要经历手术折磨，所以，做好饲养管理非常必要。

一是要保持饲养环境稳定，避免出现应激；二是要提供合理的日粮配方及青干草，保持一定的膘情；三是要提供清洁、卫生的饮水，保证健康；此外，还要做好羊群的登记，建立胚胎移植数据库，做到科学、精准管理供受体羊。

3胚胎移植季节的选择
研究表明，品种、光照、温度等都能影响羊的发情周期，大部分绵羊品种表现为明显的季节性，少数为常年发情[3]。

在每年的秋季，母羊的卵巢机能开始活跃，卵泡发育成熟，表现出发情特征；在春夏冬等季节，母羊的卵巢机能基本处于静默状态，卵泡不发育，不表现发情和排卵[4]。

因此，选择胚胎移植的适宜季节，要根据气候变化、羊的发情状况等来选择，最好是在羊的繁殖季节开展，效率最高。

4供体羊输精的选择
供体羊撤栓12h后将试情公羊放入羊群进行试情，将发情母羊标记、隔离。

配种可以采用2种方式，自然交配（人工辅助交配）和人工授精。

前者较为简单，将公母羊合群后，观察爬跨，登记即可，但要注意，间隔8h后，复配1次，直到母羊不接受爬跨为止；人工授精可以采用传统人工授精或腹腔镜人工授精技术。

借助腹腔镜授精可以将精液直接送入母羊子宫角内，该方法可以克服传统输精由于母羊子宫颈管道构造特殊、精子不易通过所导致的情期受胎率低的问题，大大提高了受胎率，但最好也间隔12h再输精1次。

5药品及手术器械的准备
在胚胎移植工作中使用的药物，必须厂家可靠，有效成分含量准确，经试验表明性能稳定，并且按照药物运输和保存条件妥善运输和保存[5]。

主要药物和器械如下：收卵器械包括冲卵管、肠钳套乳注射器、胶管、带硅胶管的16号针头、集卵杯、烧杯。

检卵设备包括体视显微镜、六孔杯、回收管、二氧化碳气体、培养箱、带硅胶管的7号针头、平底蒸发皿、显微操作仪及附件。

移植手术时还需要注射器、移卵针。

手术器械包括毛剪、外科剪、刀片、外科刀、创巾钳、活动刀柄、手术镊、缝合线、止血钳、持针器、缝合针、创巾若干、手术保定架、紫外灯、高压消毒锅。

药品及试剂包括FSH和PMSG、普鲁卡因、肾上腺素及止血药品、2%静松灵、纱布、药棉、抗生素及其他消毒液、生理盐水等[6]。

6超数排卵与同期发情
6.1超数排卵原理
超数排卵是指在发情周期的任一时间，对母羊注射外源激素，如FSH和PMSG等，增加血液中促性腺激素浓度，使发育卵泡的闭锁率降低，增加卵泡发育成熟的数量，从而排出比自然发情情况下多的卵子[7]。

6.2超数排卵方法
目前，最常采用的超排处理方法是：阴道孕酮栓+PMSG+FSH法。

如郭振刚等[8]在贵乾半细毛羊上的研究表明，采取埋置海绵孕酮栓+PMSG法进行同期发情及递减法注射FSH进行超数排卵处理及自然交配后，手术法子宫角回收供体胚胎，结果10只供体共计获得胚胎106枚，可利用胚胎73枚，平均冲胚达10.60枚/只，平均可用胚胎7.30枚/只，胚胎合格率达68.87%，试验结果达到国内同类研究的平均水平。

6.3受体羊的同期发情
同期发情是受体羊处于与供体羊同一生理基础的先决条件，发情生理越接近，胚胎移植后的受胎率就越高[9]。

如王玉琴等[10]研究表明，采用2~12h 的扩展囊胚进行移植，妊娠率可达94.74%。

这是由于胚胎只能移植到与之发育要求相适应的受体生殖环境中，才能继续发育。

因此，如采用鲜胚进行移植，在供体超排的同时，必须对受体进行同期发情处理，使之生殖生理状态与供体同步化。

7供体羊手术冲胚检胚以及受体羊的手术移植
7.1手术
术前准备。

超排前供受体母羊禁食至少24h，术前2h禁水。

保定。

利用胚胎移植手术架躺卧式保定，将四肢固定在手术架上，防止手术中剧烈活动。

备皮处理。

羊只保定麻醉后，用肥皂水浸湿乳
房周边约10cm直径的肚腹，用刮毛刀或刀片刮净羊毛，注意不要划伤皮肤，再使用毛巾擦拭干净皮肤，最后用酒精喷洒消毒，覆盖手术创巾，以创巾钳固定四角，推进手术室静待手术。

手术。

手术时，在乳静脉与腹中线之间，用手术刀切开皮肤及筋膜，倒过手术刀，以钝头分离腹直肌或前拉腹直肌，显露腹股沟管处，在腹股沟管处剪开或用手术刀钝头直接剖开以显露腹腔。

切口不宜过大，否则影响缝合和愈合，也不能过小，不方便取出子宫而对子宫造成刺激或损失，大小1.5~2.0cm宽。

腹腔暴露后，伸进食指和中指在骨盆腔、膀胱周围触摸子宫，然后轻轻勾住子宫体，将卵巢、子宫拉出，查看黄体位置并记录。

7.2冲胚
冲胚方法分为输卵管法、冲卵管法和子宫法，生产中多采用输卵管法和子宫法。

输卵管冲胚法：操作时，将冲卵管一端从输卵管伞部喇叭口插入6#、8#头皮针，进入2~3㎝深处，打活结或用钝圆夹子固定，另一端接集卵器，用注射器吸取37℃冲卵液5~10mL，在子宫角靠近输卵管部位，将针头朝输卵管方向扎入，一人操作时，一只手的手指在针头后方捏紧子宫角，另一只手推注射器，冲卵液由宫管结合部流入输卵管，经输卵管流至集卵器。

此种方法的优点是卵的回收率高、冲卵液用量少、检卵省时，缺点是容易造成输卵管伞部粘连[11]。

子宫角冲胚法：在供体羊发情后6~7d采卵，将子宫暴露后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处，用注射液吸入冲卵液20~30mL，将冲卵针头（套管针）从子宫角尖端插入，确认针头在子宫角宫腔内后连接注射器，缓缓注入冲卵液。

当子宫角出现膨胀时，立即将回收卵针头从肠钳基部的上方迅速插入，引导冲卵液收集于集卵杯内。

相同方法对另一侧子宫进行冲卵。

进针时避免损伤血管。

该法的优点是子宫角冲卵法对输卵管损伤较小，主要用于超排母羊发情后的5.5~6d，从子宫可以收集到桑椹胚至扩展囊胚，此时的胚胎可用于移植、冷冻或其他研究等，但该方法的缺点是胚胎的回收率较低。

7.3检胚
鉴别可用胚胎和不可用胚胎是进行下一步胚胎移植的关键，只有发育良好的胚胎才能用于移植，否则严重影响移植受胎率。

一般来说，可用胚胎是卵裂球轮廓清晰、球体圆滑又饱满，而不可用胚胎表面不光滑、有毛边且不圆。

卵裂球轮廓清楚、球体饱满、透明度适中鉴定为1级；1/3卵裂球死亡的可鉴定为2级；1/2卵裂球死亡鉴定为3级；其余定为4级[12]。

只有1、2、3级胚胎方可用于移植。

7.4移植
胚胎移植可采用手术法和腹腔镜法。

手术法，在掏出子宫和卵巢后，查看黄体发育状况，在黄体侧，用钝形针头在子宫角穿孔，将移植管沿子宫角方向插入宫腔，注射胚胎，随即轻轻复位子宫，缝合皮肤。

胚胎移植时，原则上来自输卵管的胚胎移入输卵管，来自子宫角的胚胎移入子宫角的前1/3处。

腹腔镜法，借助腹腔镜找到子宫，再以胚胎移植针从另一侧进入腹腔，将胚胎注射到相应位置。

该方法操作简便，但是需要一定的经验。

7.5缝合
创口缝合按照外科手术操作原则进行。

缝合过程中不得触碰其他无关物品。

操作时要迅速、细心，不让子宫体长时间暴露。

切忌多次、用力拉扯子宫。

胚胎移植后，仔细检查移植器中是否有胚胎遗漏，确认无遗漏后方可缝合。

手术创口采用2层缝合法，内肌层缝合和皮肤缝合，缝合肌肉层后撒适量青霉素、链霉素粉，以防止创口感染，缝合皮肤后用碘酒消毒处理。

8术后受体的饲养管理
胚胎移植后的受体，要精心观察和护理，注意返情。

若发现受体发情，要做进一步的观察和检查。

在移植后45d左右，可采用兽用B超进行早期妊娠诊断。

对已妊娠的受体要分群管理，预防流产，同时补充营养全面的饲草料，既要保证胎儿的正常发育，又要避免发育过度而引起难产。

另外，还要根据当地疾病发生情况，及时接种相应疫苗。

9影响胚胎移植效果的因素
9.1受体羊品种
受体羊品种的选择，在胚胎移植中具有至关重要的作用。

研究表明，不同品种用作受体羊移植单胚时，妊娠率和胚胎成羔率均无差异，但是移植双胚胎时，胚胎妊娠率和胚胎成羔率有显著差异[13]。

9.2移植胚胎数量
赵霞[14]研究表明，移植2枚和3枚胚胎时山羊的妊娠率显著高于1枚。

黄承俊等[15]研究也表明，移植2、3枚胚胎的妊娠率明显高于移植1枚胚胎时的妊娠率。

因此，实际生产中，应根据羊的品种、体型大小及获得的有效胚胎数量等来确定最佳移植数量。

9.3采胚方法
研究表明，输卵管法平均采集可用胚数高于子宫角法，但是子宫角法采胚更具较高的妊娠率和产羔率，是理想的采胚方法[16]。

腹腔镜技术可缩短单次移植时间，减少手术损伤，利于动物健康，在加速胚胎移植的产业化应用中则更为广泛。

10胚胎移植技术的应用前景
作为最实用的高效繁育技术，胚胎移植可以结合优良公羊和母羊的品种优势，同时作为人工授精技术的延伸，将在家畜品种培育和改良中得到广泛应用。

一方面，通过人工授精充分发挥良种公羊的覆盖率，另一方面，胚胎移植还可以充分发挥优良母羊的生产性能，这对羊的高效繁育具有重要的意义。

而随着整个胚胎移植技术体系的不断优化，其产业化应用也将进一步得到提高。

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【责任编辑：刘少雷】。