柱色谱分离实验报告

柱色谱分离实验报告
柱色谱法分离实验报告
一、背景知识
吸附柱色谱作舟：分离各种类型的非离子组分・
与离子交换色谱法相比，柱色谱分析是住中性条件卜操作.样品不会变到破坏,同时，它能有效分离多种組分.
柱色谱分奠乂吸附色谱…以硅胶、氧化铝为吸附剂；
分配色谱一以纤维素为载体「
吸附剂选用；肘场供应的硅胶、氧化铝粒度为100-200 B,便用前需活化° -般吸附剂用章是被分离试样的30-50 ,实验时棍拥被分离试样中组分分离的难易程度而定.
二、实验原理
柱色谱（柱上层析）常用的有吸附色谱和分配色谱两类口吸附色谱常用氧化铝和硅胶作同建相；而分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作为固定相・而支持剂本身不起分离作用.
吸附柱色谱通常在玻璃骨中填入表而枳很大经过活化的名孔性或粉状同体吸附剂□当持分离的混合物溶液流经吸附柱时，务种成分同时被吸附在柱的上遥“当洗脱剂流卜时，由于不同化合物的吸附能力不同'往下洗脱的速度也不同.于是形成了不同的层次十即溶质在柱上自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若F色帯，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸十沪挤出后按色帯分割开，再用溶剂将外色站中的溶质萃取出來口
3・溶剂的选择
溶剂的选择通常根据被分离物中冬化合物的圾性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑。

先将要分离的样品溶于一世体积的溶剂中，选用的溶剂的极性要低，体枳更小。

如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小，则可加入少童极性较大的溶剂，便溶液体积不致太大。

色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离，然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱洗脱卜•来。

(2) 柱高与直径的比例为10:1〜50:1。

(3) 装柱有湿法和十法装柱，本实验用湿法装柱。

(4) 装柱时，硅胶柱里一定不要有裂缝或气泡；
(5) 在加样时，柱子上端溶剂越少越好。

(6) 加洗脱剂洗脱时，流速不能太快，维持2s 3滴的速度，且实验过程中不能让柱子里溶剂流干(即出现短路现象)：
三、实验仪器和药品
氯仿，乙醛，丙咽，甲醇，右油醴，硅胶(100〜200目)，100ml 酸式滴定行，小烧杯35个，铁架台，脱脂棉。

四、实验步骤
1. 将烧杯洗F净，烘十后进行编号，并称重做好记录。

2. 湿法装柱。

(1)先将酸式滴泄管洗净，将几毫升酒精加入酸式滴泄行进行
4.本实验下列顺序洗脱试样：
氯仿70 ml
乙醴■氯仿(1:1)70ml
丙酮■氯仿(1:1)70ml
甲醇■氯仿(1:9)40ml
流速控制为lml/min,每10-12ml收集一次。

5.将上述收集到流出液的烧杯放在通风橱内蒸去溶剂，称重。

并以此作出柱色谱流出Illi线。

五、实验数据及处理
1.每10ml流出液所对应的液体重星如表1所示
2•由流出液数据得到的柱色谱流出曲线如图示。

六、思考题 1.为片么极性大的组分要舟极性校大的溶剂洗脫? 2•柱子中若有气泡或装填不匀，将会给分离造成什么样的后果？如何 避免？
色谱柱流出曲线
1.20% 1.00% 0 80% 0 60% 040% 0.20% 0 00%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 V 19 20 21 22 23 24 饶杯号（流岀液体恕V/lOml ）。