莫能菌素的诱变育种与高通量筛选
莫能菌素的作用机理及在畜牧生产中的应用
莫能菌素的作用机理及在畜牧生产中的应用作者：李延杰来源：《现代畜牧科技》 2016年第12期李延杰（黑龙江畜牧兽医杂志社，黑龙江哈尔滨150000）摘要：近几年，随着经济多元化的的快速发展，我国的畜牧养殖业也在持续不断的发展，越来越多的畜牧养殖场建立起来。
从而对于畜牧业的关注也越来越高，对于应用于畜牧业养殖中的研究也越来越受到重视。
莫能菌素属于属聚醚类离子栽体抗生素，在畜牧生产中被广泛应用。
现就莫能菌素的发展历史、作用机制以及在畜牧生产中的应用进行阐述，并且对于影响莫能菌素的作用效果进行分析。
关键词：莫能菌素；畜牧生产；生产应用中图分类号：S816.7文献标识码：B文章编号：2095 -9737(2016)12-0015 -01莫能菌素又被成为“瘤胃素”，是一种饲料添加剂，大多被应用于反刍动物中。
预混剂为黄褐色颗粒或粉末。
它是在1971年的美国第一次由Lilly公司推出的，随后迅速在欧美、日韩等国传播，得到广泛的使用，是20世纪后期使用的主导的抗球虫药物。
然而对于莫能菌素我国的研究结果并不是很多，并且因实验材料、试验方法以及实验步骤的差异，每位研究者对于莫能菌素的研究都不尽相同。
目前，已经有40多个国家在进行莫能菌素的商品化生产，并且广泛的用作牛、羊等的增重剂，以及猪的生产促进剂。
1 莫能菌素的作用机理目前在学术方面，比较一致的观点是，莫能菌素具有离子载体功能，能够与Na+和K+形成脂溶性络合物，从而使它们通过生物膜的转移，促进动物体内营养的消化和吸收。
同时，莫能菌素还能影响反刍动物瘤胃内的能量代谢，改善瘤胃发酵，提高丙酸与乙酸的产出比例，减少甲烷生成，提高蛋白质利用效率。
因此具有提高反刍动物饲料利用率和促进生长的作用。
毒理学主要是应用生物学、药理学和生物学等理论和技术，经过试验来进行研究的一种学术，莫能菌素的毒理学也一直被人们研究。
在莫能菌素针对使用时，动物体细胞比微生物和冲细胞对其更为敏感。
紫外诱变筛选高效木质素降解菌株的研究
紫外诱变筛选高效木质素降解菌株的研究随着人们对环境保护的要求越来越高，环境污染也成为了一个严重的问题。
木质素是造纸工业废水、生活污水、城市垃圾、农业废物和林业废弃物等生物质残渣中的主要成分，对水资源和环境造成很大的污染。
因此，研究木质素的高效降解机制和菌株，是解决木质素污染的重要途径之一。
本文旨在通过紫外诱变筛选高效木质素降解菌株，探究其降解机制，为解决木质素污染提供一定的理论指导和实践指导。
一、实验原理1.菌种：本实验选用的木质素降解菌株为白腐菌Trametes sp.，在常规培养基下培养并筛选。
2.诱变：通过紫外线照射，诱发白腐菌Trametes sp.的基因突变和突变体的产生。
3.筛选：将紫外线诱变后的白腐菌Trametes sp.转移到含木质素的固体培养基中，筛选木质素降解能力强的菌株。
4.鉴定：通过形态学、生理生化和分子生物学等多种方法对获得的菌株进行鉴定。
二、实验步骤1.白腐菌Trametes sp.的预处理：将白腐菌Trametes sp.预处理于常规培养基上，培养2-3天，并用生理生化方法鉴定其特性。
2.紫外诱变：将预处理的白腐菌Trametes sp.接种在固体VEG培养基中，分别用白炽灯、荧光灯和紫外线照射4h，10h和24h。
用各种灯光下的非照射组作为对照组。
3.筛选：将诱变后的白腐菌Trametes sp.转移到含木质素的固体培养基中，在37℃下静置，观察其生长情况和木质素的降解情况。
4.分离：在含木质素的固体培养基中，挑选降解效果较好的白腐菌Trametes sp.菌株进行单菌落分离。
5.鉴定：通过形态学、生理生化和分子生物学等方法鉴定单菌落的特性，并筛选出木质素降解能力强、生物学特性优良的菌株进行进一步研究。
三、实验结果1.诱变后的白腐菌Trametes sp.生长情况在不同光照下有明显差异。
其中以荧光灯照射24h的白腐菌生长情况较好，而荧光灯照射4h的白腐菌生长情况较差，且繁殖速度缓慢。
莫能菌素的研究进展
莫能菌素的研究进展张军民张连洁（中国农业科学院畜牧所，北京 100094）一、概况莫能菌素（Monensin）亦称莫能霉素、肉桂霉素和瘤胃素，是肉地桂链霉菌（Streptomyces cinnamonensis）的发酵产物（具有五环多醚结构的酸性抗生素），为聚醚类离子载体抗生素中应用最为广泛的药物之一。
目前用作饲料添加剂的聚醚类离子载体抗生素有莫能菌素、盐霉素、拉沙里菌素、那拉霉素和马杜拉霉素。
莫能菌素于1967年发现有抗球虫作用，1971年美国批准其作为抗球虫剂，1984年批准为牛生长促进剂。
制剂为其钠盐，莫能菌素钠为微白褐色至微橙黄色粉末，略有特异臭味。
易溶于低级醇、低级酯、氯仿、丙酮、苯等有机溶剂，不溶于水。
酸性含水环境中易失活，碱性条件下很稳定，其干燥结晶长期保存稳定，在饲料中的稳定性也好。
莫能菌素具有广谱的抗球虫活性，对鸡的6种致病艾美耳球虫均有良好的灭杀作用，而且对控制和预防火鸡、家兔、羔羊、牛犊以及猪球虫病均有显著的效果，且球虫对其不易产生耐药性。
除抗球虫外，莫能菌素对金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌等革兰氏阳性菌，猪痢疾密螺旋体等有较强的抗菌活性，对革兰氏阴性菌无效。
对反刍动物，莫能菌素能提高瘤胃中丙酸的含量，提高饲料利用率和家畜增重速度及增加泌乳产量。
莫能菌素在动物消化道中几乎不吸收。
因此，一般不存在组织残留和向可食性畜禽产品转移的问题。
由于莫能菌素使用无残留、无副作用，成为欧盟至今唯一允许使用的抗生素饲料添加剂。
二、莫能菌素作用机理莫能菌素抗球虫的方式是以干扰球虫细胞内钾离子及钠离子的正常渗透，使大量的钠离子进入细胞，随后为平衡渗透压，大量的水分进入球虫细胞，引起肿胀，为了排除细胞乃多余的钠离子，球虫细胞耗尽了能量，仍无法排除，最后是球虫耗尽能量且过度肿胀而死亡，因其独特的杀球虫作用，与一般化学合成类抗球虫药物不同，所以很难产生抗药性。
在球虫的生活周期中，有三个杀死球虫的阶段，而其主要杀死球虫的时间是在生活周期中的早期——子孢子阶段是发生，在其未侵入肠壁上皮细胞前即将其杀死，然而有些少数漏掉的未被杀死的子孢子，继续发育，莫能菌素仍能在第一世代裂殖子及第二世代裂殖子时发挥作用，将其杀死，使其排出体外的球虫卵囊数降到最少，有利于鸡对球虫形成一定程度的免疫力[1]。
莫能菌素高产菌株的选育
莫能菌素高产菌株的选育李子勇1，李云飞1，曾晓宁1，梁景乐1,2*（1.山东胜利生物工程有限公司山东济宁272000；2.中牧实业股份有限公司北京100070）高莫能菌素发酵产量，本项目以M17042号菌株为出发菌株，经过紫外线照射、化学试剂诱变双重复合作用，再用琼脂块法和摇瓶筛选对诱变后的菌株进行选育，得到生产能力较强的突变菌株3株，平均生产能力提高了37.6%，经过冷藏、传代验证，生产能力保持稳定传递，运用到发酵车间生产后，大大提高了发酵生产效率。
能菌素；紫外诱变；化学诱变莫能菌素（Monensin ）亦称莫能霉素、肉桂霉素和瘤胃素莫能菌素，属五环多醚结构的酸性抗生素，它是由美国礼来公司（Eli Lil-ly ）首先研制成功，在1967年首先由Haney 等人从肉桂地链霉菌（Streptomyces cinnamonensis ）的发酵液中分离得到，为聚醚类离子载体抗生素中应用最为广泛的药物之一[1]。
莫能菌素具有广谱的抗球虫活性，用于鸡球虫病防治和肉牛促生长。
对革兰氏阴性菌无作用；但对葡萄球菌、杆菌、梭菌、链球菌、霉菌（青霉菌、念珠菌）有一定的抑制作用。
莫能菌素主要作为饲料添加剂直接饲喂动物，根据近年学者研究报道，对反刍动物作用主要是抑制瘤胃内革兰氏阳性菌生长，提高瘤胃发酵产生的丙酸比例，抑制甲烷的产生，提高饲料能量的利用率，减少机体对蛋白质的浪费，从而促进动物生长，改善饲料转化率。
莫能菌素还能抑制乳酸产生菌的活性，减少乳酸的数量，预防动物乳酸中毒[2]。
肉桂地链霉菌作为莫能菌素的生产菌种，其生产能力直接影响着发酵水平，而且生产企业使用的菌种一般为人工选育的非自然高产菌株，其次遗传性能具有不稳定性，必须经常对其进行菌种选育，以保障生产性能。
目前工业化生产的抗生素菌株主要通过诱变育种获得，李依韦等[3]利用紫外诱变与化学诱变得到产量提高16.65%的高产菌株。
秦艳飞等[4]通过紫外-氯化锂诱变并结合氨基酸抗性筛选得到高产菌株产量提高72.5%。
莫能菌素对柔嫩艾美耳球虫的虫种鉴定的研究
均不显著（ ＞ ． ） Ｐ ０ ５。当垫料中锯木屑和稻壳 比为 ６ ０ ４时 ， 猪的日
增重最大 ， 但与试验 ２和试验 ３ 组均无显著性差异（＞ ０ ） Ｐ ｎ ５。说 明 ３种不同比例的锯木屑和稻壳不会对猪 的育肥性能产生影 响。 但试验 ３组 日增重最低 ， 可能是 由于锯木屑的吸湿 ｌ强于 生 稻壳 ， 当垫料 中锯木屑 比例减少时 ， 的生长环境差 ， 猪 影响猪 的采食量 ， 从而 日增重减少 。 虽然 ３组不同 比例的锯木 屑和稻壳不会影 响发酵效果 ， 也 不会影 响猪 的育肥性 能 ，但 当锯 木屑和 稻壳 比例为 ４６ ：
１１ 卵囊来源 ．． ３
１２ 方 ． 法
通过饱和食盐水漂浮法获取卵囊 。 １ ． 针对柔嫩艾美 耳球虫 的卵囊 收集 ．１ ２ 通过饱 和食盐水
保存备用 。 第二 步 ， 潜隐期和最短孢子化时间的测定将 每株球虫后
代孢 子化 后各感染 一组雏鸡 （ 每组 １ ０只且体重大致 相同 ） ， 分笼饲养 。在感染后 １０ ｈ换新粪盘开始 收集粪便 ，每隔 ２ １ ｈ 取少量粪便 ， 用涂片法在显微镜下观察是否存在卵囊 。并记 下每组出现卵囊 的时间 ， 即潜隐期 。取保存 在冰箱中的各 株
将制作 １ 个含有单卵囊的胶囊分别接种给 ｌ 只雏鸡 ， ０ ０
分成 １ １ 。 ０ ～ ０组 ８ｈ后开始换无球虫卵囊的粪盘收集粪便 。 取
各组粪便 ，用涂片法检查每组是否有卵囊 ，每隔 ２ ｈ检查一 次， 直至发现有卵囊排出。
１ ． 针对 柔 嫩 艾 美 耳 球 虫 的虫 种 鉴 定 ．３ ２
试 验 研 究
莫 能菌素 对柔嫩艾 美耳 球 虫 的虫种 鉴定 的研 究
胡敬华 ， 晴晴 郝
（ 山东省济 宁市 畜牧 兽 医局 。济 宁 ２ ２ ３ ７ ０ ７）
莫能菌素的作用机理及在畜牧生产中的应用
莫能菌素的作用机理及在畜牧生产中的应用善菊与饲料添加剂2007~m,2巷着,朋莫雒茵素的作用柳理及在畜牧生产巾的啦用王坚,魏瑞成,王冉2,刘铁铮(1.江苏省农业科学院畜牧研究所,江苏南京210014;2.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏南京210014)摘要莫能菌素属聚醚类离子载体抗生素,在畜牧生产中应用广泛.从莫能菌素在体内的作用机理和代谢规律出发.系统综述了近30年来国内外有关莫能菌素在畜牧生产中的应用以及对动物机体的影响,分析研究中存在的若干问题,提出了今后的研究设想,如加强莫能菌素毒性的研究及其特效解毒药的开发,深入研究不同药物之间的拮抗与协同作用.以及不同条件下畜禽对其适宜用量的研究等.关键词莫能菌素作用机理生产应用毒性研究进展中图分类号:$859.79+6文献标识码:A文章编号:1007-9157(2007)01_0o1o-o4莫能菌素亦称莫能霉素,肉桂霉素和瘤胃素,是畜禽专用聚醚类离子载体抗生素类药物.1967年首先由Haney等人从肉桂地链霉菌(Streptomycescinnamonensis)的发酵液中分离得到.1971年美国礼来(Lilly)公司推出第一个商品化的聚醚类离子载体抗生素——莫能菌素.已在美国,日本等40多个国家广泛使用.莫能菌素抗球虫谱广,对各种艾美耳球虫均有强的抑杀作用,是2O世纪后期使用的主导抗球虫药物.另外莫能菌素还可用作牛和猪的促生长剂,能提高饲料利用率与增重速度.国外学者一直十分重视莫能菌素作用机制及其在生产应用中的研究工作.我国相关领域的系统性研究不多,而且由于受到试验材料,方法等人为因素的差异,不同研究者得出的结论不尽一致.因此,本文就莫能菌素的研究历史,作用机制及其在畜牧生产中的应用以及毒性研究作一综述.试图为其继续深入研究提供一些思路.l在体内的作用机理和代谢规律1.1体内作用机理目前比较一致的观点认为,莫能菌素具有离子载体性质,能够携带阳离子沿生物膜扩散,影响膜两侧的离子浓度梯度和细胞的生理机能.正常细胞内液中K水平高于Na,细胞外液则Na+水平高于基金项目:江苏省科技厅公关项目(BE2003306).■l(+:细胞内,外液中Ca2水平相近,但细胞外液中游离Ca2+TJ~.平较细胞内液高4个数量级.莫能菌素可导致细胞内Na+水平升高,K水平降低,并通过"Na+Ca2+~换"机制使细胞内液中游离Ca2榷度急剧升高.从而产生一系列细胞毒性效应[1].这包括球虫必须动用能量将多余的钠外泵排出,最终造成细胞能量耗尽,以及由于细胞内离子增多,大量水渗入细胞,使细胞膨胀,变形,最后导致破裂,崩解,从而达到杀死球虫或抑制其发育的目的[2].另外,莫能菌素影响反刍动物瘤胃内能量代谢,改善瘤胃发酵,提高丙酸与乙酸的产出比例,减少甲烷生成,提高蛋白质利用效率.因此具有提高反刍动物饲料利用率和促进生长的作用.1.2毒理学微生物和球虫细胞对莫能菌素较动物体细胞敏感.一般在较低浓度下只对微生物和球虫细胞有作用,而高浓度时才会造成人畜中毒.高浓度莫能菌素的毒性首先是由于它能增加细胞内钠离子的聚集.钠离子浓度的增高能继发导致胞浆中钙离子的增加,这可能与Naa的交换引起钙从内质网,线粒体外流增加以及向细胞外外流减少有关;而中毒水平的钙激活了磷脂酶和蛋白水解酶,最终导致骨骼肌和心肌细胞的损害和坏死[3].之后肌红蛋白进入血液,可导致肌红蛋白尿,严重者可堵塞善芮与饲料添加剂20o7~m,2巷第,朋肾小管引起急性肾功能衰竭甚至死亡.此外,莫能菌素能通过增加糖酵解使肌肉中产生的乳酸剧增. 从而出现不同程度的酸中毒血症….1.3消除规律研究人员对动物组织中莫能菌素的排泄途径及其代谢进行了广泛,深入的研究,结果表明,莫能菌素在体内主要分布于肝,肾和脂肪中,通过肝脏代谢.然后随胆汁排出,最后经粪便排出体外,并不在组织中蓄积[5].对-4C标记的莫能菌素代谢试验结果表明.饲喂推荐剂量的莫能菌素.在牛和鸡的可食组织中没有检测出莫能菌素(<0.05mg/kg).对环境因素的研究也证实.排泄到土壤中的莫能菌素能很快进行生物降解[6].2奠能菌素在畜牧生产中的应用莫能菌素广泛用于抗球虫.对鸡的6种致病艾美耳球虫以及防治羔羊,绵羊,犊牛,兔等家畜的球虫病均具有很好效果.另外莫能菌素还可用作牛和猪的促生长剂,提高饲料利用率与增重速度.2.1在家禽生产中的应用球虫一直是困扰集约化鸡场的一大难题.球虫病会导致鸡肠上皮细胞坏死.临床上常出现血便. 是一种急性,高死亡率的疾病,轻微感染时死亡率20%～30%.严重时高达80%.因此球虫病给养鸡业造成了巨大的经济损失.球虫病的防治主要依赖于饲料中添加抗球虫药.自1940年以来.已有多种不同化学类型的抗球虫药物商品化生产.磺胺,甲苄喹啉,地克珠利,氨丙啉等药物在抗球虫史上发挥过重要作用.但到目前为止.应用最广泛的却是聚醚类离子载体抗生素.包括莫能菌素,甲基盐霉素,盐霉素,拉沙洛菌素和马杜拉霉素等,其中又以莫能菌素应用最为广泛.莫能菌素于1967年发现有抗球虫作用.1970年美国批准其作为抗球虫剂,1971年美国礼莱(Lilly) 公司就开始商品化生产,我国1985年首次通过专家技术鉴定,并于1987年批准进口.莫能菌素主要作用于球虫生活史早期.通过干扰球虫孢子或裂殖子细胞的离子浓度平衡.影响一些酶的活性[7],或导致表膜或细胞器破裂,阻止其侵入宿主肠上皮细胞.该药物适用于肉鸡和育成鸡. 常用作预防性药物添加于饲料中,用量为肉鸡90～110mg/kg,火鸡54-90mg/kg.由于它影响蛋鸡的产蛋率,所以在鸡的产蛋期禁用.肉用鸡宰前3d也要停止给药.尽管聚醚离子载体类药物产生耐药性最慢.但是,随着药物应用时间的延长,球虫也在缓慢地,不显着地对其产生耐药性.上世纪80年代至今,国内外已陆续报道了柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素产生耐药性.并从野外分离出多株耐药虫株[8].因此,当前有效控制球虫病的重要手段就是穿梭用药和轮换用药.研究证明,采用新产品与老产品交替使用的方式.也能延长抗球虫药物的市场寿命.使用莫能菌素还要考虑和其他抗生素或药物之间的配伍禁忌问题.它与盐霉素合用有协同作用.而与泰妙菌素,竹桃霉素有拮抗作用.2.2在牛生产中的应用莫能菌素对牛的影响,在上世纪50年代后期引起许多国外学者的注意,并做了大量研究,逐渐发现了其对瘤胃细菌,氨基酸的降解,牛的繁殖性能以及奶牛泌乳有着重要的作用.1975年美国正式批准莫能菌素可作为饲料添加剂应用于肉牛生产. 之后在美国,日本等4o多个国家被广泛使用.2.2.1对瘤胃细菌和氨基酸降解的影响许多研究都表明,饲喂添加莫能菌素的饲料.能改善牛瘤胃发酵.提高瘤胃中丙酸的含量,饲料利用率和营养的供给.Rogers等(1982)报道在奶牛饲料中添加莫能菌素.增加了丙酸的产量.最多达到76%.Bateman等[9]研究了莫能菌素钠盐对荷尔斯坦奶牛瘤胃中氨基酸降解的影响.实验组莫能菌素的添加量为4omg/kg.结果表明.莫能菌素能减少乙酸和促进丙酸的生成.提高丙酸/乙酸的产出比例.但是也有一些研究人员认为.莫能菌素不能增加瘤胃中丙酸的产量.此外,瘤胃中乳酸堆积过多容易引起pH下降和酸毒症,莫能菌素可以有效抑制这类细菌.起到稳定瘤胃pH和减少病症的发生.许多研究还证实.莫能菌素在抑制瘤胃中革兰阳性菌活性的同时.减少了蛋白质水解和氨基酸的降解,这使氨气量和微生物蛋白质合成减少,增加了饲料中的蛋白质和氨基酸被动物利用的机会,提高了饲料利用率.2.2.2对牛泌乳性能的影响经过研究人员多年不懈的努力.现已证实离子载体抗生素用于泌乳奶牛可提高产奶量,增强免疫应答,但同时也导致奶牛采食量,乳脂率和乳蛋白含量的下降,降低程度部分受剂量的影响.V anDer■VETERINARYPItARMACEUTlcALS&FEEDADDITIVES善焉与饲料添加剂2007.~m72巷蒡7用Werf等(1998)给泌乳早期的奶牛每天饲喂0,150,300,450mg莫能菌素,一定时间后,4组奶牛的乳脂率分别为45.6,45.5,43.7和41.5g/ks.Juchem等[10]研究莫能菌素缓释胶囊对荷尔斯坦奶牛产奶性能的影响,母牛随机分为对照组和试验组,预产期前35天给药,产后9周停止给药,与对照组相比,试验组奶牛产奶量显着提高.莫能菌素影响乳脂率有几个方面的原因.一是因为它减少了瘤胃中乙酸和丁酸的产量,造成乳腺中合成脂肪酸的前提物质减少;其次,它抑制长链脂肪酸在瘤胃中的生化还原作用,增加乳腺合成t一10,c一12共轭亚油酸,而该生成物抑制牛乳脂的合成及乳脂合成相关基因的表达;最后,产奶量的增加也在一定程度上稀释了脂肪酸含量,降低了乳肪率.2.2-3对牛繁殖性能的影响1994～2003年,澳大利亚,新西兰,加拿大和美国等国的研究人员都参与到这方面的研究.早期的研究认为莫能菌素不能治疗奶牛难产,孪生,胎盘不下,子宫内膜炎以及不能提高奶牛的繁殖性能. Heuer等[11]通过试验得到了相似的结论,但同时也发现.用莫能菌素的试验组从产犊到再交配的时间间隔明显缩短,由于考虑到多方面因素以及缺乏相关资料的支持,他们认为这是管理和环境的原因.后来.TaⅡam等[12]研究了莫能菌素对泌乳荷尔斯坦奶牛卵巢卵泡发育和产后生殖性能的影响.结果表明:莫能菌素在对排卵次数,卵泡发育,卵泡数量和人工授精后的怀孕率不产生影响的情况下,可明显缩短母牛产后排卵间隔,试验组为(27.2~2.1)d,对照组为(32.4~1.5)d.2-3莫能菌素在猪生产中的应用莫能菌素可用作猪的生长促进剂,并能防治与减少断奶仔猪腹泻综合症以及防制自然感染的猪痢疾.Kyriakis(1989)选取96头体重相近(8kg)的4周龄断奶仔猪,分成3个试验组(预防组T.,治疗组T2,对照组T3)研究莫能菌素的抗猪痢疾效应,试验进行112d,与治疗组及对照组比较,莫能菌素在全试验期预防性用药能降低死亡率,减轻腹泻程度,提高日均增重和饲料报酬.预防组在试验期间,特别是前28d的关键时期,所有仔猪生长正常.在发生SD后立即用莫能菌素饲科的治疗组仔猪的生长性能也较对照组好,T2组猪的最终性能表明莫能菌素可有效地治疗SD.Kyriakis等n]也报道,在妊娠和泌乳母猪日粮以及在补食和断奶仔猪日粮中添加100mg&s的莫能菌素直至两月龄,可减少病毒性传染性胃肠炎的死亡率.添加莫能菌素的产仔母猪与不添加的对照组相比,一周内仔猪的死亡率明显降低,分别为20%和57.2%.试验结束时,用药组仔猪死亡率为24.8%,对照组为73.4%.3莫能菌素对机体的影响莫能菌素安全范围小,超过建议剂量20%～50%可对动物体细胞有毒性作用,出现中毒表现.莫能菌素中毒的主要靶器官是骨骼肌和心脏],临床主要表现包括横纹肌溶解,急性肾功能衰竭,代谢性酸中毒以及肺水肿等.严重患者常出现心,肺,肝,肾等多脏器的损害,多脏器功能衰竭是死亡的主要原因[H].莫能菌素饲喂剂量与其作用效果有关.鸡只能用作抗球虫剂,不能长期用作生长促进剂[15;莫能菌素猪的添加量为50~100mg/kg日粮;牛为100～300mg/d?头;羊为20～30mg/kg日粮[.马,驴,骡对莫能菌素十分敏感,马的半致死量为2～3me/ks 日粮,一般禁止使用[1.莫能菌素作为畜禽专用的抗生素,人类主要通过生产接触,误服及食用高蓄积的动物组织导致中毒.Kouyoumdjian等[14]报道了首例人食用莫能菌素中毒死亡事件,Caldeira等认为青少年摄人500mg 的莫能菌素后能导致多脏器功能衰竭而死亡,吕中法等[18]曾报道过生产车间工人中毒事件.4研究方向动物疾病的预防和促生长是畜牧生产中的重要环节,对提高经济效益和改善畜产品品质均有积极的影响,药物在畜牧生产中有着不可替代的地位.但是如果使用不当,不仅会损害动物机体,还会危害人类健康.虽然在这方面已有了相当的研究,但因涉及的因素较多.在一些问题的看法上还存在着争议.因此,学习借鉴他人的研究成果,探讨今后的研究方向,以期能为莫能菌素的产业开发',加强其在畜牧生产中的应用提供有益的参考.(1)深人探究莫能菌素毒性,开发治疗特效解毒药.莫能菌素具有较强的细胞毒性,安全范围小,使用不当常造成家禽中毒,目前对其中毒方面的研究较少,尚无特效解毒药,治疗仅以清除毒物,对症与支持疗法为主.叠VEIEIUNARYPHARMACE删CALS&FEEDADDmVES善芮与饲料添加剂2oo7~m12@,m7朋(2)莫能菌素在畜牧生产中的用量受外界条件和自身因素的影响很大.找出不同日粮组成,饲养方式,生长阶段畜禽的适宜用量,对指导畜牧生产有重要的理论和实践意义.(3)深人研究莫能菌素对动物生长发育影响的内在机理和各药物添加剂之间的拮抗与协同作用,对莫能菌素合理使用提供理论依据.(4)随着社会发展与人们生活水平提高,食用动物产品的质量与安全越来越受到人们的关注,研究莫能菌素对胴体品质的影响,为莫能菌素的利用提供重要的参考价值.参考文献[1]李俊锁,邱月明,王超.兽药残留分析[M].上海:上海科技出版社.2OO2:538—550.[2]TakahashiS,ShibataM,GotohJ,eta1.Astroglialcelldeathin—ducedbyexcessiveinfluxofsodiumions[J].EurJPharmacol,2000,408(2):127—35..[3]BezerraPS,DriemeierD,LorettiAP,eta1.Monensinpoisoning inBrazilianhorses[J].V etHumToxicol,1999,41(6):383—385. 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219401846_物理诱变和高通量筛选在益生菌选育中的应用
潘丽娜，唐溶雪，康文丽，等. 物理诱变和高通量筛选在益生菌选育中的应用[J]. 食品工业科技，2023，44（13）：458−465. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022090175PAN Lina, TANG Rongxue, KANG Wenli, et al. Application of Physical Mutagenesis and High Throughput Screening Technology in the Selection of Probiotics[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(13): 458−465. (in Chinese with English abstract).doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022090175· 专题综述 ·物理诱变和高通量筛选在益生菌选育中的应用潘丽娜1,2,3,4，唐溶雪2,3，康文丽2,3,4，李意思2,3，胡鹏钰2,3，汪家琦2,3,4，周洪波1,4,*（1.中南大学资源加工与生物工程学院，湖南长沙 410083；2.澳优乳业（中国）有限公司，湖南长沙 410127；3.湖南澳优食品与营养研究院，湖南长沙 410299；4.人体微生态制品湖南省工程研究中心，湖南长沙 410017）摘 要：野生型菌株活性较低，难以满足工业化需求，通过使用物理诱变方法可改善菌种性能，进而获得高产、优质菌株。
同时需寻找快速、合适的筛选方法从突变文库中获得理想目标菌株。
传统人工筛选及摇瓶培养成本高、耗时耗力，高通量筛选技术解决了这一难题。
本文探讨了传统及新型物理诱变技术原理，对比了两类诱变技术的区别及阐述了其在益生菌选育中的应用。
同时总结了各高通量筛选技术（微量滴定板筛选、荧光激活细胞分选、生物传感器的筛选、液滴微流控平台筛选及模式动物平台的筛选）的特点及其在益生菌筛选的相关应用。
高产Monacolin K红曲菌的诱变选育及其固态发酵条件的优化的开题报告
高产Monacolin K红曲菌的诱变选育及其固态发酵条件的优化的开题报告一、选题背景及研究意义红曲菌是一种被广泛用于制作红曲米的微生物，其所产生的Monacolin K（也称洛伐他汀）具有较好的降血脂作用，是一种重要的天然药物。
近年来，由于人们对健康的关注度不断提高，降血脂药物的需求量也在不断增长。
因此，红曲菌的开发利用具有非常广阔的市场前景。
诱变选育是一种利用物理或化学方法对微生物进行人工诱变，从中筛选出具有所需特性的菌株的技术。
通过诱变选育，可以提高红曲菌的产量和Monacolin K含量等，为红曲米及相关产品的生产提供更多、更好的原料，促进降血脂市场的健康发展。
本研究将针对红曲菌进行诱变选育及其固态发酵条件的优化，旨在开发生产高产Monacolin K红曲菌的方法，为红曲米及相关制品的生产提供基础研究支持，为产业升级提供技术支撑。
二、研究方法1.选择合适的诱变剂，利用电子束辐照等方法进行红曲菌的诱变，并筛选出产量高、含量高的优良菌株。
2.通过固态发酵实验，考察不同时间、不同温度、不同pH值等条件对红曲菌的生长繁殖和Monacolin K产量的影响。
3.利用单因素实验和响应面分析，优化红曲菌在固态发酵条件下的产量及Monacolin K含量。
三、预期成果1.获得高产Monacolin K的红曲菌菌株，并进一步揭示产生Monacolin K的调控机制。
2.通过对固态发酵条件的研究，实现对红曲菌产量及Monacolin K含量的优化。
3.为红曲米及相关产品的生产提供技术支撑和原料保障。
四、研究难点及解决方法1.红曲菌的诱变效率较低，需要选用合适的诱变剂和优化诱变条件。
解决方法：综合运用电子束辐照、化学诱变等方法，筛选出具有较高诱变效率的菌株。
2.影响红曲菌固态发酵的因素较多，相互作用复杂。
解决方法：通过单因素实验和响应面分析等方法，分别考察影响因素，进而确定最优发酵条件。
五、可行性分析本研究选题具有较好的可行性。
利用制霉菌素抗性筛选赤霉素高产菌株
利用制霉菌素抗性筛选赤霉素高产菌株作者：廖海兵等来源：《农业与技术》2015年第02期摘要：如何筛选赤霉素高产菌株一直是热门的研究课题。
本文概述了制霉菌素抗性筛选的原理，以藤仓赤霉菌978#为出发菌株，对其单细胞悬液进行紫外和亚硝基胍（UV-NTG）复合诱变处理，将制霉菌素抗性作为筛选标记，经过初筛、复筛，就可筛选得到菌株遗传稳定性、具有更高产量的突变菌株。
可以得出：利用制霉菌素抗性筛选是一种有效获得赤霉素高产菌株的方式。
关键词：制霉菌素；赤霉素；高产菌株中图分类号：TQ920 文献标识码：A引言赤霉素是5大植物激素之一，能有效刺激植物的生长发育。
目前，具有商业价值的赤霉素，其工业化生产大都是经过藤仓赤霉菌的深层液化发酵而获得的。
1 制霉菌素抗性筛选的原理定向筛选赤霉素高产菌株的关键是能否寻找出合适的筛选标记。
Giordano Walter等的研究发现赤霉素的合成与固醇的合成不在同一细胞器上。
制霉菌素是一种抗真菌抗生素，作用位点是真菌细胞膜上的麦角固醇，能选择性地与之结合形成通孔，提高细胞膜的通透性，进而有效抑制真菌的活动，致使细胞质发生外漏死亡。
赵凯等通过采用制霉菌素培养皿成功筛选出了紫杉醇的高产突变菌株。
因此，将制霉菌素抗性作为筛选标记，诱变处理后能够筛选出耐受一定制霉菌素浓度的赤霉菌突变菌株。
同时，突变菌株比原始菌株的产赤霉素能力有了很大的提高，还具备稳定的高产遗传性状，各方面基本符合作为工厂生产菌株的要求。
2 试验方法介绍以藤仓赤霉菌978#为出发菌株，进行种子培养、摇瓶发酵培养、赤霉菌细胞悬液的制备，然后对其进行诱变处理，突变株初筛及复筛，测定菌株遗传稳定性。
2.1 诱变处理在试验中，对赤霉菌株单细胞悬液进行紫外和亚硝基胍（UV-NTG）复合诱变处理。
多次研究发现，复合诱变处理比单一诱变效果更优越。
UV-NTG诱变处理的原理。
紫外线诱变处理的应用最为广泛，处理效果直接。
DNA分子强烈吸收紫外线后，双链断裂并发生嘧啶水合作用，形成胸腺嘧啶二聚体；亚硝基肌（NTG）也是应用广泛的诱变剂之一，直接与核酸酶碱基作用，使DNA分子发生烷化作用，改变了DNA分子结构。
香菇多糖——精选推荐
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中国酿造, China Brewing,编辑部邮箱, 2009年02期作者】窦会娟；李超敏；李林珂；原⽣质体诱变筛选⾹菇多糖⾼产菌株对⾹菇原⽣质体进⾏诱变,以期望得到⾹菇多糖⾼产菌株。
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⾹菇多糖的免疫调节作⽤及研究进展⼤中⼩来源:转载资料编辑:guest⼈⽓:29作者：林秋莺;姚⾦梅;陈丽华;林清强⾹菇(Lentinus edodes (Berk)Sing)是侧⽿科(pleurotaceae)的担⼦菌，是我国⼈民餐桌上传统的美味佳肴，也是世界名贵⾷⽤兼药⽤菌之⼀，它含有多种有效药⽤组分，尤其是含有调节免疫功能和刺激⼲扰素形成以及抗肿瘤、抗病毒等功能的⾹菇多糖(1entinan简称LTN)。
莫能菌素的研究概况及其应用_隋世慧
现，提高工作效率。
4检测工作开展情况县级兽医实验室主要工作是为预警、临床诊断以及治疗提供实验数据，其最终成果主要是体现在检测报告上。
调研发现，各县区对监测任务均制订了相应的实施方案和检验检测工作流程，对试验过程中每个环节也制定了相应的工作制度和操作规程，实验室工作人员均能按照标准、规范等开展相应的实验室检验检测工作，对检测结果能及时出具检测报告。
但仍有部分县区检测工作不够规范，主要表现在：①检测报告中结果描述不清楚，检测项目不具体，检测依据错误；②试验原始记录信息不全，涂改现象常见；③未能及时记录相应仪器设备使用记录，主要表现在试验原始记录日期与相应仪器设备使用记录日期不能够完全吻合；④试验操作技术不熟练，特别是ELISA 试验，经过省、市两级的培训，目前大部分县级兽医实验室均能开展ELISA 试验，仍有个别县区由于仪器设备等原因不能开展ELISA 试验。
5建议５．１加大县区兽医实验室常用仪器设备维护和更新所用资金的投入。
５．２为县区兽医实验室建立适用的管理体系模板；联合市级强化对县区实验室管理体系文件的宣贯和培训。
５．３联合市级对县区实验室工作人员理论知识和操作技能的进行强化培训。
莫能菌素的研究概况及其应用隋世慧，胡兰*（沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110161）中图分类号S852.23文献标识码A文章编号1672-9692(2013)02-0052-04［收稿日期］２０１３－０１－０８［作者简介］隋世慧（１９８７－），硕士研究生，主要从事动物生化与分子生物学方面研究。
胡兰（１９６９－），教授，博士生导师，主要从事动物生化与分子生物学方面研究。
莫能菌素（monensin ）别名瘤胃素、莫能菌酸、欲可胖，在1967年首先由Haney 等人从肉桂链霉菌（Str eptomyces cinnamonensis ）的发酵液中分离得到，是聚醚类离子载体抗生素中应用最为广泛的药物之一。
1967年美国Eli Lilly 公司Michael.E.Haney 等人报道称在肉桂地链霉菌（Str.cinnamonensis ATCC15413）的培养物中分离到一个新的多醚化合物莫能菌素，发现其在鸡体内有显著的抗球虫（Ei-meria tenella ）活性，因而能降低鸡的死亡率并能促进饲料利用率。
莫能菌素的诱变育种与高通量筛选_
莫能菌素(Monensin)亦称莫能霉素、肉桂霉素和瘤胃素，是肉地桂链霉菌(Streptomyces cinnamonen-sis)的发酵产物(具有五环多醚结构的酸性抗生素)，为聚醚类离子载体抗生素中应用最广泛的药物之一。
制剂为其钠盐，莫能菌素钠为微白色至微黄橙色粉末，并略有特殊臭味，易溶于低级醇、低级酯、氯仿、丙酮、苯等有机溶剂，不溶于水。
酸性含水环境中易失活，碱性条件下很稳定，其干燥结晶长期保存稳定，在饲料中的稳定性也好。
莫能菌素具有广谱的抗球虫活性，对鸡的6种致病艾美耳球虫均有良好的灭杀作用，而且对控制和预防火鸡、家兔、羔羊、牛犊以及猪球虫病均有显著的效果，且球虫对其不易产生耐药性。
除抗球虫外，对反刍动物，莫能菌素能提高瘤胃中丙酸的含量，提高饲料利用率和家畜增重速度及增加泌乳产量。
莫能菌素在动物消化道中几乎不吸收。
因此，一般不存在组织残留和向可食性畜禽产品转移的问题。
由于莫能菌素使用无残留、无副作用，成为欧盟至今唯一允许使用的抗生素饲料[1-3]。
为提高筛选效率，我们通过试验摸索，在含有合适浓度的莫能菌素的检定菌———枯草芽孢杆菌的平皿上点种莫能单菌，抑菌圈大的菌落相对应的生产能力也相应的强，所以通过抑菌圈进行初筛能显著提高筛选效率。
紫外诱变是一种传统的诱变育种方式，结合氯化锂，能提高诱变率，并能稳定变异菌株的生产能力。
本课题将诱变育种与高通量筛选结合，显著提高筛选效率并选育出发酵单位提高15%以上的菌株。
1材料与方法1.1菌株：莫能菌株MON-Ⅲ-114为原始出发菌株。
1.2培养基高氏培养基各成分质量分数：可溶性淀粉2%；硝酸钾0.1%；氯化钠0.05%；磷酸氢二钾0.05%；硫酸镁0.05%；硫酸亚铁0.1%；琼脂2.0%。
用稀盐酸doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2013.10.006莫能菌素的诱变育种与高通量筛选郭慧君，张翠芬，刘秋红，李玉清，夏隆春，张宗鹏（山东胜利生物工程有限公司山东济宁272073）摘要：莫能菌素采用紫外线-氯化锂复合诱变育种，增加突变率，再用生测法进行初步筛选，以提高筛选效率。
原生质体诱变筛选香菇多糖高产菌株
原生质体诱变筛选香菇多糖高产菌株
窦会娟;李超敏;李林珂
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2009(000)002
【摘要】对香菇原生质体进行诱变,以期望得到香菇多糖高产菌株.选择合适剂量的60Coγ射线,根据香菇多糖的产量,筛选出高产香菇多糖的菌株.选择剂晕为600Gy 的,0coy射线对香菇原生质体进行诱变,得到香菇多糖产量比出发菌株提高了20.6%的突变菌株,传代8代后,其产香菇多糖遗传稳定性保持良好.通过对香菇原生质体进行60Coγ射线诱变,可以得到能提高香菇多糖产量的菌株,为香菇的良种选育和香
菇多糖的开发提供参考.
【总页数】3页(P74-76)
【作者】窦会娟;李超敏;李林珂
【作者单位】漯河医学高等专科学校,基础医学部,河南,漯河,462002;漯河医学高等专科学校,食品工程系,河南,漯河,462002;漯河医学高等专科学校,基础医学部,河南,漯河,462002
【正文语种】中文
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莫能菌素的应用现状
莫能菌素的应用现状
宁豫昌;陈忠杰;郭宏伟;李宇伟
【期刊名称】《郑州牧业工程高等专科学校学报》
【年(卷),期】2007(027)003
【摘要】莫能菌素（monensin）别名瘤胃素、莫能菌酸、欲可胖，在1967年首先由Haney等人从肉桂链霉菌（Streptomyces cinnamonensis）的发酵液中分离得到，是聚醚类离子载体抗生素中应用最为广泛的药物之一。
莫能菌素纯品为白色或类白色结晶粉末，并稍有特殊臭味、易溶于甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂，在水中几乎不溶。
酸性含水环境中易失活，碱性条件下很稳定，其干燥结晶长期保存稳定，在饲料中的稳定性也好。
【总页数】4页(P21-24)
【作者】宁豫昌;陈忠杰;郭宏伟;李宇伟
【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校,生物工程系,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,生物工程系,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,生物工程系,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,生物工程系,河南,郑
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【正文语种】中文
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毛霉紫外线诱变育种
文章编号:1000-9973(2006)02-0020-04毛霉紫外线诱变育种刘云秀,吕开斌(四川理工学院生物工程系,四川自贡643000)摘要:从腐乳和千张(豆类发酵食品)宜宾名特产)中分离得到的毛霉菌株,经紫外线诱变处理及控温培养、筛选各得到一株生产能力较出发株高的突变株mr6(1,2)。
该菌株在温度28e条件时生长旺盛,产酶能力高,具有较好的遗传稳定性。
关键词:毛霉;腐乳;千张;紫外线诱变;蛋白酶中图分类号:TS261115文献标识码:BBre eding of M ucor racemosus by ultraviolet radiationLIU Yun2xiu,LV Kai2bin(Dept.of Bioengineering,Sichuan University of Science and Engineering,Zigong643000,China) Abstract:A Mucor r acemosus picked out from preserved beancur d and Qianzhang is mutated by U ltraviolet Radiation and fostered by temperatur e and filtr ated,then a mutant named mr6(1,2), whose production is higher than its parent strain,was gained.T he mutant with a high production of enzyme has a higher inheritable stability and yields well at28e.Ke y words:Mucor ra cemosus;preserved beancurd;Qianzhang;mutation;proteinase毛霉(Mucor racemosus)在豆腐乳的酿造过程中对腐乳的独特风味的形成起极其重要的作用,在腐乳的酿造过程中毛霉所产生的蛋白酶、淀粉酶、酯酶等多种酶系,分解原料中的多种成分,从而形成腐乳独特的色、香、味、体。
莫能菌素的研究进展
莫能菌素的研究进展张军民张连洁（中国农业科学院畜牧所，北京100094）一、概况莫能菌素（Monensin）亦称莫能霉素、肉桂霉素和瘤胃素，是肉地桂链霉菌（Streptomyces cinnamonensis）的发酵产物（具有五环多醚结构的酸性抗生素），为聚醚类离子载体抗生素中应用最为普遍的药物之一。
目前用作饲料添加剂的聚醚类离子载体抗生素有莫能菌素、盐霉素、拉沙里菌素、那拉霉素和马杜拉霉素。
莫能菌素于1967年发觉有抗球虫作用，1971年美国批准其作为抗球虫剂，1984年批准为牛生长增进剂。
制剂为其钠盐，莫能菌素钠为微白褐色至微橙黄色粉末，略有特异臭味。
易溶于低级醇、低级酯、氯仿、丙酮、苯等有机溶剂，不溶于水。
酸性含水环境中易失活，碱性条件下很稳固，其干燥结晶长期保留稳固，在饲料中的稳固性也好。
莫能菌素具有广谱的抗球虫活性，对鸡的6种致病艾美耳球虫均有良好的灭杀作用，而且对操纵和预防火鸡、家兔、羔羊、牛犊和猪球虫病均有显著的成效，且球虫对其不易产生耐药性。
除抗球虫外，莫能菌素对金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌等革兰氏阳性菌，猪痢疾密螺旋体等有较强的抗菌活性，对革兰氏阴性菌无效。
对反刍动物，莫能菌素能提高瘤胃中丙酸的含量，提高饲料利用率和家畜增重速度及增加泌乳产量。
莫能菌素在动物消化道中几乎不吸收。
因此，一样不存在组织残留和向可食性畜禽产品转移的问题。
由于莫能菌素利用无残留、无副作用，成为欧盟至今唯一许诺利用的抗生素饲料添加剂。
二、莫能菌素作用机理莫能菌素抗球虫的方式是以干扰球虫细胞内钾离子及钠离子的正常渗透，使大量的钠离子进入细胞，随后为平稳渗透压，大量的水分进入球虫细胞，引发肿胀，为了排除细胞乃多余的钠离子，球虫细胞耗尽了能量，仍无法排除，最后是球虫耗尽能量且过度肿胀而死亡，因其独特的杀球虫作用，与一样化学合成类抗球虫药物不同，因此很难产生抗药性。
在球虫的生活周期中，有三个杀死球虫的时期，而其要紧杀死球虫的时刻是在生活周期中的初期——子孢子时期是发生，在其未侵入肠壁上皮细胞前即将其杀死，但是有些少数漏掉的未被杀死的子孢子，继续发育，莫能菌素仍能在第一世代裂殖子及第二世代裂殖子时发挥作用，将其杀死，使其排出体外的球虫卵囊数降到最少，有利于鸡对球虫形成必然程度的免疫力[1]。
细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定实验报告范文
工业微生物育种实验细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为脯氨酸缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、实验目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、实验原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、实验器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、实验材料(一)菌种E.coli(二)培养基、1LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml，pH7.2 121℃灭菌15min22×LB培养液：其它不变，水，50ml。
3基本培养基：葡萄糖0.5 g，(NH4)2SO4 0.1 g，柠檬酸钠0.1 g，MgSO4·7H2O0.02 g，K2HPO4 0.4 g，KH2PO4 0.6 g，重蒸水100 mL，pH 7.2，110℃灭菌20 min。
原生质体诱变筛选香菇多糖高产菌株
2009No．2Serial No．203China BrewingResearch Report香菇（Lentinula edodes ）又名香覃、冬菇，是世界上著名的实用真菌之一。
它不仅素以色、香、味俱佳而著称，而且营养丰富，有“素中之荤”、“菇中之王”、“蔬菜之魁”等多种美称，是食用菌家族中的宠儿[1]。
香菇由于含有香菇多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫力和刺激干扰素形成等多种功能，已成为当前研究的热点[2]。
但目前香菇多糖的产率普遍不高，因此，提高香菇多糖的产率已成为进行多糖产品开发需要解决的关键问题。
这不仅可以考虑将多种提取手段结合起来优化提取工艺，还可以通过遗传育种手段选育出高产多糖的香菇菌株，以增加多糖的提取率。
本试验以香菇851菌株为出发菌株，采用原生质体60Co γ射线诱变技术，筛选到了香菇多糖产量提高了20.6%，且遗传性稳定的诱变菌株，为香菇的良种选育和香菇多糖的开发提供技术参考。
1材料与方法1.1菌种香菇851菌株：由河南农业大学馈赠。
1.2培养基斜面及平板用固体培养基：马铃薯200g 、葡萄糖20g 、琼脂15g~20g 、水1000mL 。
种子培养基及发酵培养基：马铃薯200g 、葡萄糖20g 、酵母粉2g 、水1000mL 。
制备原生质体用菌丝生长培养基：马铃薯20g ，葡萄糖2g ，酵母粉0.2g ，K 2HPO 40.05g ，KH 2PO 40.10g ，MgSO 4·7H 2O 0.5g ，V B 1微量，水1000mL 。
原生质体再生培养基：蛋白胨1g ，牛肉膏0.5g ，葡萄糖20g ，MgSO 4·7H 2O 0.5g ，KH 2PO 40.46g ，K 2HPO 41g ，琼脂15g~20g ，水1000mL 。
1.3原生质体制备与再生渗透压稳定剂：0.6mol/L MgSO 4。
酶液配制：用上述稳定剂配制1.5%的溶壁酶溶液，经0.22μm 微孔滤膜过滤除菌后使用。
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Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： Ｍｏ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ ； ＵＶ ｍｕ ｔ ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ； ｈ ｉ ｇ ｈ － ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ｐ ｕ ｔ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ； ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｐ ａ ｃ ｉ ｔ ｙ
羔羊 、 牛犊 以及 猪 球 虫 病 均有 显 著 的 效果 ， 且 球 虫 对 其不 易产 生 耐药性 。除抗 球虫 外 ， 对反 刍动 物 ， 莫
能菌素能提高瘤 胃中丙酸的含量 ， 提高饲料利用率
１材 料 与方 法
和家畜增重速度及增加泌乳产量 。莫能菌素在动物
消化道 中几乎不吸收 。因此 ， 一般不存 在组织残 留 １ ． １ 菌株 ： 莫能菌株 Ｍ Ｏ Ｎ — Ｉ Ｉ Ｉ — ｌ ｌ ４ 为原始出发菌株。
ａ ｎ ｄ ｂ ｉ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｙ ｒ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ， ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｎ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｕ ｓ ｅ ， ｎ ａ ｍｅ ｌ ｙ ｔ ｏ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｅ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｙ ａ ｎ ｄ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｐ ａ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｓ ｔ 莫能单菌 ， 抑菌 圈大 的菌落相对应 的
生产 能力 也 相 应 的强 ， 所 以通过 抑 菌 圈 进 行初 筛 能
色粉末 ， 并略 有 特 殊 臭 味 ， 易 溶 于 低级 醇 、 低 级酯 、 氯仿 、 丙酮 、 苯 等有 机溶 剂 ， 不 溶 于水 。酸性 含 水 环
显著提高筛选效率。 紫外诱变是一种传统 的诱变育种方式 ， 结合氯
化锂 ， 能提高诱变率 ， 并 能 稳 定 变 异 菌 株 的生 产 能 力 。本课 题 将 诱变 育 种 与 高通 量 筛选 结 合 ， 显 著提 高 筛选 效 率 并 选 育 出 发 酵 单 位 提 高 １ ５ ％以上 的
菌株 。
境 中易失活 ， 碱性 条件下很稳 定 ， 其干燥结 晶长期 保存稳定 ， 在饲料中的稳定性也好。莫能菌素具有 广谱的抗球虫活性 ， 对鸡的 ６ 种致病艾美耳球 虫均 有 良好的灭杀作用 ， 而且对控制和预防火鸡 、 家兔 、
莫能菌素（ Ｍ ｏ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ ） 亦称莫能霉素 、 肉桂霉素和
瘤 胃素 ， 是 肉地 桂 链 霉 菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｓ ｃ ｉ ｎ ｎ ａ ｍ ｏ ｎ ｅ ｎ — ｓ ｉ ｓ ） 的发 酵 产 物 ｆ 具 有 五 环 多 醚结 构 的酸 性抗 生 素 ） ， 为 聚 醚 类 离 子 载 体 抗 生 素 中 应 用 最 广 泛 的 药 物 之
一
用无残 留、 无 副作用 ， 成 为欧盟 至今 唯一允许使用
的抗 生 素饲料 ｌ 】 。 １ 。 为提 高 筛选 效 率 ， 我们通过试验摸索 ， 在 含有 合 适 浓 度 的 莫 能 菌 素 的检 定 菌— — 枯 草 芽 孢 杆 菌
。
制 剂 为其 钠 盐 ， 莫 能菌 素钠 为微 白色 至微 黄 橙
Ｇｕ ｏ Ｈ ｕ ｉ ｊ ｕ ｎ Ｉ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｃ ｕ ｉ ｆ ｅ ｎ Ｉ Ｌ ｉ ｕ Ｑｉ ｕ ｈ ｏ ｎ ｇ Ｉ Ｌ ｉ Ｙｕ ｑ ｉ ｎ ｇ Ｉ Ｘｉ ａ Ｌ ｏ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ Ｉ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｚ ｏ ｎ ｇ ｐ ｅ ｎ ｇ
（ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｖ ｉ ｃ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ． ， Ｌ ｔ ｄ ． Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ， Ｊ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ ， ２ ７ ２ ０ ７ ３ ）
摘
要： 莫能菌素采用紫外线 一氯化锂复合诱 变育种 ， 增加 突变率， 再用生测法进行初步 筛选 ， 以提 高
筛选 效率 。然后 把 两者 结合运 用 ， 既提 高 筛选效 率 又提 高 了菌种 的生产 能 力。
关键词 ： 莫能菌素； 紫外诱 变； 高通量筛选； 提高生产能力
Ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｂｒ ｅ ｅ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｈｉ ｇ ｈ Ｔｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ｐ ｕ ｔ Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎｉ ｎ ｇ ｓ ｆ ｏ ｒ Ｍｏ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ
学术研究
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ － ４ ７ ５ ４ ． ２ ０ １ ３ ． １ ０ ． ０ ０ ６
莫髓菌素的诱变育种与高通量筛选
郭 慧君 ， 张翠 芬 ， 刘秋红， 李 玉清 。 夏 隆春 ， 张宗鹏 （ 山东 胜利 生 物工程 有 限公 司 山东 济 宁 ２ ７ ２ ０ ７ ３ ）