细胞培养技术详细学习资料
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• 生长特点：排列成放射状， 漩涡状生长。
学习资料
50
上皮型细胞
• 来源：起源于内、外胚层 的细胞，如：皮肤及其衍 生物、消化道、乳腺、肺 泡、上皮性肿瘤等。
• 形态：类似体内的上皮细 胞，呈扁平、不规则、多 角形，中有圆形核。
• 生长特点：细胞紧密相连 成单层膜
相靠—紧密相连—成薄层—铺石状
学习资料
学习资料
23
对细胞培养技术的评价
优点：
1、活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动；
2、可控制： 选择对象：均一性、重复性（类型、性质、阶段） ； 调节条件：各种因素（物理、化学、生物等因素）； 利用方法：研究技术、记录方法；
3、应用广： 领域多：医学研究、生物技术、基因工程等 对象广：各种动物（低等动物--高等动物--人类） 一种动物（不同年龄、不同组织） 正常或异常（肿瘤）
缺点： 观察不方便
很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)
学习资料
56
学习资料
57
培养细胞的生长特点
粘附并伸展 是大多数体外培养细胞的基本生长特点。细胞
在接种后很快便可见到细胞伸出伪足附着，与支 持物形成一些接触点，接着细胞逐渐呈扁平或放 射状伸展，逐渐形成上皮型或成纤维型或其他类 型生长。 密度依赖性
学习资料
52
学习资料
53
学习资料
54
悬浮型细胞
概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长。
来源：取自血液、脾或骨髓，尤以血中白细胞 肿瘤细胞为主。
特点：在悬浮中生长良好，细胞圆形，呈单个 或小细胞团。
学习资料
55
优点： 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态
32
器官移植→组织工程
种子细胞（干细胞） 支架材料
学习资料
33
组织工程
学习资料
34
学习资料
35
学习资料
36
学习资料
37
学习资料
38
学习资料
39
学习资料
40
学习资料
41
学习资料
42
学习资料
43
二、培养细胞的基本特征
培养细胞的生长方式和类型 培养细胞的生长特点和生长增殖过程 细胞培养的条件及影响因素
学习资料
47
成纤维型细胞
上皮型细胞
学习资料
48
游走型细胞
多形型细胞
学习资料
49
成纤维型细胞
• 来源：中胚层间充质组织 起源的细胞，如：成纤维 细胞、心肌、平滑肌、成 骨细胞、血管内皮细胞。
• 形态：类似体内成纤维细 胞的形态，胞体呈梭形或 不规则三角形，胞质向外 伸出2～3个长短不等的突 起，中央有卵圆形核。
学习资料
2
一、绪论
学习资料
3
细胞培养（cell culture)
细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件 对活细胞进行培养和研究的技术。
即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在 一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、 增殖的一种方法。
涉及有细胞生物学、生物化学与分子生物学、 动物学与植物学、病原学、肿瘤学、遗传学、 生物工程学甚至光学、物理学等等学科。因其 涉及面很广所以已经渗透到生命科学的各个领 域。
后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的 细胞世系所组成。
细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成
法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或 标志，并能稳定保持这些特性的培养物。
克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产 生的遗传性状相同的细胞群体。
学习资料
22
有分化特性的细胞系和细胞株
学习资料
4
组织培养的概念
组织培养（tissue culture）： 其本意是指从体内取出组织和细胞，模
拟体内生理环境，在无菌、适当温度和 一定营养条件下，使之生存和生长并维 持其结构和功能的方法。
学习资料
5
器官培养（Organ culture）：
指的是应用和组织培养相似的条件， 培养的是器官的原基、器官的一部分或 整个器官，使之在体外生存、生长和保 持一定功能的方法，以上三个层次的培 养，又可统称之为体外培养（in vitro）。
——哈里森悬滴培养法
学习资料
14
哈里森悬滴培养法
盖玻片 培养物 凝固的淋巴
凹玻片槽
•将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋巴囊吸取的新鲜淋巴 的盖玻片上，
•淋巴很快凝固，使组织小块固定在一定的位置上。
•然后将盖玻片倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周缘用蜡 封固。
•蛙胚神经组织存活了数周——体外培养组织和细胞的基本模式系统。
细胞内的流动：如信号传导、钙离子的流动、RNA的移动、激素 受体复合物的易位等。
遗传学：如遗传分析、转染、转化等。
学习资料
26
细胞培养的应用领域
（一）、在病毒学研究中的应用 （二）、在免疫学研究中的应用 （三）、在分子生物学研究中的应用 （四）、在遗传学研究中的应用 （五）、在药理学研究中的应用 （六）、在毒理学研究中的应用 （七）、在肿瘤学研究中的应用 （八）、在器官移植中的应用
学习资料
15
卡氏瓶的发明
Carrel用反复传代的方法使细胞系存活34 年。他采用的无菌技术，以及后来设计 的培养瓶（卡氏瓶，Carrel flask）等都 是对组织培养的重要贡献。特别是他的 连续培养，为后来的传代培养奠定了基 础。
学习资料
16
1923年，Carrel设计 了卡式瓶培养法，扩 大了组织的生存空间。 1924年Maximow的双盖 片培养法，使之更易 于传代和减少污染。
学习资料
27
病毒检验方法
病毒培养：
1.细胞培养 2.接种至细胞
病毒培养全程5-30天
细胞病变判定
荧光染色： 1. 病毒涂片 2. 血清型专一 抗体荧光染色
中和试验： 培养出的病毒与 血清型专一性抗 血清作用，再接 种至细胞
学习资料
28
检测病毒
CPE
正常细胞
学习资料
病变细胞
29
免疫学
杂交瘤技术Hybridomas
学习资料 组织培养发展示意图 17
1957年Dulbecco 等采用胰蛋白酶消化处理和应用 液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单 层培养成了组织培养普遍应用的技术。促进了细 胞系(cell line)的建立。
近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术， 各国建立细胞库
学习资料
18
我国组织培养的发展
单克隆杂交瘤细胞培养上清中X抗体的检测
细胞融合 混合细胞的HAT筛选)
单
克
杂交瘤细胞可持续分泌单克隆抗体
隆
抗
体
只有杂交瘤细胞可长期存活下来
制
分泌
备
X抗体
规模化培养 获得大量单克隆抗体
学习资料
免31 疫学
在分子生物学研究中的应用
1、 体外培养细胞的转化 2、 DNA转导技术 3、基因诊断和基因治疗
学习资料
细胞接种密度过高或过低都会影响细胞的生长、 增殖。当细胞粘附生长、融合成单层时，细胞变 得较为拥挤，而扁平形状的程度减少，与培养基 的接触面减少，同时，培养基中的营养物逐渐消 耗，细胞分裂减弱，增殖减慢。
学习资料
58
二、培养细胞的生长增殖过程
单个细胞的细胞周期（cell cycle） 细胞系的生长过程 培养细胞传代的生存期
粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育 的基本存在方式
细胞在体内、外的粘附方式存在差异
体内：粘附是全方位，外形具有复杂的立体特征。 体外：细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时
明显不同。
学习资料
46
体外培养下，形态异常可反映其胚层起源， 按照培养细胞的形态，可分为几大类型：
成纤维型细胞 上皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞
提示
要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。
学习资料
25
细胞培养技术的研究、观察内容
细胞内活动：例如能量的代谢、DNA转录、凋亡及蛋白合成等。
细胞内部与细胞外界之间的作用：如细胞对外界刺激的反应、药 物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等。
细胞间的相互作用：如形态发生、细胞间的粘着作用、接触抑制、 密度抑制等。
20世纪30年代传入我国。
20世纪50年代起步。
20世纪70年代，成为医学和生物学研究 中应用的手段。
学习资料
19
组织培养常用术语
原代培养（primary culture）：从直接 取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。
传代培养（passage culture）：将细胞 以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶 即称为传代培养。
学习资料
9
群体培养（左）和克隆培养（右）
学习资料
10
原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，
个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列
﹙×100﹚
学习资料
11
原代培养第7天，多个集落形成并融合
﹙×100﹚
学习资料
12
培养法的发展
组织培养法的发展经历近百年。
德国人Roux（1885）用温生理盐水体外培养鸡 胚组织并存活数月被认为是组织培养的萌芽试 验。
分泌抗体 短命
脾细胞 (B淋巴细胞)
长命 不分泌抗体
骨髓瘤细胞
分泌抗体 长命
杂交瘤细胞
Köhler和Milstein, 1975
1984年Nobel医学奖
学习资料
30
动物免疫 BALB/c
X抗原
B淋巴细胞 瘤的突变株
培养上清中X抗体的检测 克隆化培养
分泌X抗体 B淋巴细胞
培养数天后细胞死亡
骨髓瘤细胞 无限生长细胞
4、较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象；
学习资料
24
对细胞培养技术的评价
缺点：
1、培养细胞会发生改变； 2、对人员、设备等要求较高。
与体内主要不同
相对孤立、相对单一、缺乏体内的系统作用、失去神经体液的 调节和细胞相互间的影响。
主要表现
失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱、细胞趋向单一化。
1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞 生活一个月，提示组织或细胞离体后，在人工 培养条件下，仍能生存。
学习资料
13
培养法的发展
关于神经轴突的结构和形成有争议。
哈里森（生理学家）首先解剖了蛙胚的 原始脊髓节段在淋巴液中进行培养。
在显微镜下观察到从神经芽细胞延伸出 神经轴突的状况。 建立起一套合理的无菌培养技术
51
培养细胞的形态不稳定，可因各种因素而发生 改变，如pH、细胞密度、污染等因素。
HeLa细胞：
血清 高血清——成纤维样细胞
低血清——上皮样细胞 pH 标准pH——上皮样细胞
太酸或太碱——成纤维样细胞 细胞密度 低密度——成纤维样细胞
高密度——上皮样细胞
转化与否 未转化——成纤维样细胞
转化后——上皮样细胞
注：传代（passage，subculture）
学习资料
20
原代培养
胎儿细胞培养比成人容易；成体组织中 成纤维细胞、肾上皮细胞比较容易，上 皮细胞培养难。 细胞间的分离酶：胰蛋白酶、胶原酶、 单一种类细胞的分离培养：根据培养条 件——培养基、细胞接着面的条件、接 着速度、离心法等。
学习资料
21
细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功
学习资料
6
培养法的种类
体外培养 细胞培养
组织培养 器官培养
贴壁培养 悬浮培养
学习资料
7
体 外 培 养 种 类
学习资料
8
细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。
群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培 养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细 胞或单细胞悬液。
克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培 养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一 个细胞形成一个集落，称为克隆。
参考书目
《细胞培养》，世界图书出版公司， 1996年
《培养细胞学与细胞培养技术》 ，上海 科学技术出版社，2004年
学习资料
1
本次课内容
细胞培养的基本知识
一、绪论
培养法的种类、培养法的发展、细胞培养的常 用术语、培养细胞的作用及意义、培养法的应 用
二、培养细胞的特征 培养细胞的生长方式和类型、 培养细胞的生长特点和生长增殖过程、 细胞培养的条件及影响因素
学习资料
59
单个细胞的细胞周期（cell cycle）
G1→S→G2 →M
学习资料
44
（一）培养细胞的生长方式和类型
粘附型细胞：附着在某一固相支持物表面才 能生长的细胞。
如：成纤维细胞、心肌与平滑肌细胞、表皮细胞、骨与软骨 细胞、肿瘤细胞
悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。
如：血、脾及骨髓培养的细胞及某些癌细胞
学习资料
45
粘附型（贴壁型）细胞
组织来源
细胞系
脾
Friend
Morris肝癌 HTC
髓性白血病 K562
垂体瘤
GH2,GH3
黑色素瘤
B16
髓性白血病 HL60
胶质瘤
CCM
成神经细胞瘤 C1300
增殖性 物种 永生 小鼠 永生 大鼠 永生 人 永生 大鼠 永生 小鼠 永生 人 永生 人 永生 大鼠
分化特性 合成血红蛋白 酪氨酸转移酶诱导 合成血红蛋白 产生生长激素 产生色素 合成球蛋白 胶质纤维酸性蛋白 生长轴突
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50
上皮型细胞
• 来源：起源于内、外胚层 的细胞，如：皮肤及其衍 生物、消化道、乳腺、肺 泡、上皮性肿瘤等。
• 形态：类似体内的上皮细 胞，呈扁平、不规则、多 角形，中有圆形核。
• 生长特点：细胞紧密相连 成单层膜
相靠—紧密相连—成薄层—铺石状
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23
对细胞培养技术的评价
优点：
1、活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动；
2、可控制： 选择对象：均一性、重复性（类型、性质、阶段） ； 调节条件：各种因素（物理、化学、生物等因素）； 利用方法：研究技术、记录方法；
3、应用广： 领域多：医学研究、生物技术、基因工程等 对象广：各种动物（低等动物--高等动物--人类） 一种动物（不同年龄、不同组织） 正常或异常（肿瘤）
缺点： 观察不方便
很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)
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56
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57
培养细胞的生长特点
粘附并伸展 是大多数体外培养细胞的基本生长特点。细胞
在接种后很快便可见到细胞伸出伪足附着，与支 持物形成一些接触点，接着细胞逐渐呈扁平或放 射状伸展，逐渐形成上皮型或成纤维型或其他类 型生长。 密度依赖性
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53
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54
悬浮型细胞
概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长。
来源：取自血液、脾或骨髓，尤以血中白细胞 肿瘤细胞为主。
特点：在悬浮中生长良好，细胞圆形，呈单个 或小细胞团。
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55
优点： 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态
32
器官移植→组织工程
种子细胞（干细胞） 支架材料
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33
组织工程
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34
学习资料
35
学习资料
36
学习资料
37
学习资料
38
学习资料
39
学习资料
40
学习资料
41
学习资料
42
学习资料
43
二、培养细胞的基本特征
培养细胞的生长方式和类型 培养细胞的生长特点和生长增殖过程 细胞培养的条件及影响因素
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47
成纤维型细胞
上皮型细胞
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48
游走型细胞
多形型细胞
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49
成纤维型细胞
• 来源：中胚层间充质组织 起源的细胞，如：成纤维 细胞、心肌、平滑肌、成 骨细胞、血管内皮细胞。
• 形态：类似体内成纤维细 胞的形态，胞体呈梭形或 不规则三角形，胞质向外 伸出2～3个长短不等的突 起，中央有卵圆形核。
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2
一、绪论
学习资料
3
细胞培养（cell culture)
细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件 对活细胞进行培养和研究的技术。
即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在 一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、 增殖的一种方法。
涉及有细胞生物学、生物化学与分子生物学、 动物学与植物学、病原学、肿瘤学、遗传学、 生物工程学甚至光学、物理学等等学科。因其 涉及面很广所以已经渗透到生命科学的各个领 域。
后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的 细胞世系所组成。
细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成
法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或 标志，并能稳定保持这些特性的培养物。
克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产 生的遗传性状相同的细胞群体。
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22
有分化特性的细胞系和细胞株
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4
组织培养的概念
组织培养（tissue culture）： 其本意是指从体内取出组织和细胞，模
拟体内生理环境，在无菌、适当温度和 一定营养条件下，使之生存和生长并维 持其结构和功能的方法。
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5
器官培养（Organ culture）：
指的是应用和组织培养相似的条件， 培养的是器官的原基、器官的一部分或 整个器官，使之在体外生存、生长和保 持一定功能的方法，以上三个层次的培 养，又可统称之为体外培养（in vitro）。
——哈里森悬滴培养法
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14
哈里森悬滴培养法
盖玻片 培养物 凝固的淋巴
凹玻片槽
•将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋巴囊吸取的新鲜淋巴 的盖玻片上，
•淋巴很快凝固，使组织小块固定在一定的位置上。
•然后将盖玻片倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周缘用蜡 封固。
•蛙胚神经组织存活了数周——体外培养组织和细胞的基本模式系统。
细胞内的流动：如信号传导、钙离子的流动、RNA的移动、激素 受体复合物的易位等。
遗传学：如遗传分析、转染、转化等。
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26
细胞培养的应用领域
（一）、在病毒学研究中的应用 （二）、在免疫学研究中的应用 （三）、在分子生物学研究中的应用 （四）、在遗传学研究中的应用 （五）、在药理学研究中的应用 （六）、在毒理学研究中的应用 （七）、在肿瘤学研究中的应用 （八）、在器官移植中的应用
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15
卡氏瓶的发明
Carrel用反复传代的方法使细胞系存活34 年。他采用的无菌技术，以及后来设计 的培养瓶（卡氏瓶，Carrel flask）等都 是对组织培养的重要贡献。特别是他的 连续培养，为后来的传代培养奠定了基 础。
学习资料
16
1923年，Carrel设计 了卡式瓶培养法，扩 大了组织的生存空间。 1924年Maximow的双盖 片培养法，使之更易 于传代和减少污染。
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27
病毒检验方法
病毒培养：
1.细胞培养 2.接种至细胞
病毒培养全程5-30天
细胞病变判定
荧光染色： 1. 病毒涂片 2. 血清型专一 抗体荧光染色
中和试验： 培养出的病毒与 血清型专一性抗 血清作用，再接 种至细胞
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28
检测病毒
CPE
正常细胞
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病变细胞
29
免疫学
杂交瘤技术Hybridomas
学习资料 组织培养发展示意图 17
1957年Dulbecco 等采用胰蛋白酶消化处理和应用 液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单 层培养成了组织培养普遍应用的技术。促进了细 胞系(cell line)的建立。
近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术， 各国建立细胞库
学习资料
18
我国组织培养的发展
单克隆杂交瘤细胞培养上清中X抗体的检测
细胞融合 混合细胞的HAT筛选)
单
克
杂交瘤细胞可持续分泌单克隆抗体
隆
抗
体
只有杂交瘤细胞可长期存活下来
制
分泌
备
X抗体
规模化培养 获得大量单克隆抗体
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免31 疫学
在分子生物学研究中的应用
1、 体外培养细胞的转化 2、 DNA转导技术 3、基因诊断和基因治疗
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细胞接种密度过高或过低都会影响细胞的生长、 增殖。当细胞粘附生长、融合成单层时，细胞变 得较为拥挤，而扁平形状的程度减少，与培养基 的接触面减少，同时，培养基中的营养物逐渐消 耗，细胞分裂减弱，增殖减慢。
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58
二、培养细胞的生长增殖过程
单个细胞的细胞周期（cell cycle） 细胞系的生长过程 培养细胞传代的生存期
粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育 的基本存在方式
细胞在体内、外的粘附方式存在差异
体内：粘附是全方位，外形具有复杂的立体特征。 体外：细胞只有一个附着平面，外形一般与体内时
明显不同。
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46
体外培养下，形态异常可反映其胚层起源， 按照培养细胞的形态，可分为几大类型：
成纤维型细胞 上皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞
提示
要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。
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25
细胞培养技术的研究、观察内容
细胞内活动：例如能量的代谢、DNA转录、凋亡及蛋白合成等。
细胞内部与细胞外界之间的作用：如细胞对外界刺激的反应、药 物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等。
细胞间的相互作用：如形态发生、细胞间的粘着作用、接触抑制、 密度抑制等。
20世纪30年代传入我国。
20世纪50年代起步。
20世纪70年代，成为医学和生物学研究 中应用的手段。
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19
组织培养常用术语
原代培养（primary culture）：从直接 取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。
传代培养（passage culture）：将细胞 以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶 即称为传代培养。
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9
群体培养（左）和克隆培养（右）
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10
原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，
个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列
﹙×100﹚
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11
原代培养第7天，多个集落形成并融合
﹙×100﹚
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12
培养法的发展
组织培养法的发展经历近百年。
德国人Roux（1885）用温生理盐水体外培养鸡 胚组织并存活数月被认为是组织培养的萌芽试 验。
分泌抗体 短命
脾细胞 (B淋巴细胞)
长命 不分泌抗体
骨髓瘤细胞
分泌抗体 长命
杂交瘤细胞
Köhler和Milstein, 1975
1984年Nobel医学奖
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30
动物免疫 BALB/c
X抗原
B淋巴细胞 瘤的突变株
培养上清中X抗体的检测 克隆化培养
分泌X抗体 B淋巴细胞
培养数天后细胞死亡
骨髓瘤细胞 无限生长细胞
4、较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象；
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24
对细胞培养技术的评价
缺点：
1、培养细胞会发生改变； 2、对人员、设备等要求较高。
与体内主要不同
相对孤立、相对单一、缺乏体内的系统作用、失去神经体液的 调节和细胞相互间的影响。
主要表现
失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱、细胞趋向单一化。
1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞 生活一个月，提示组织或细胞离体后，在人工 培养条件下，仍能生存。
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13
培养法的发展
关于神经轴突的结构和形成有争议。
哈里森（生理学家）首先解剖了蛙胚的 原始脊髓节段在淋巴液中进行培养。
在显微镜下观察到从神经芽细胞延伸出 神经轴突的状况。 建立起一套合理的无菌培养技术
51
培养细胞的形态不稳定，可因各种因素而发生 改变，如pH、细胞密度、污染等因素。
HeLa细胞：
血清 高血清——成纤维样细胞
低血清——上皮样细胞 pH 标准pH——上皮样细胞
太酸或太碱——成纤维样细胞 细胞密度 低密度——成纤维样细胞
高密度——上皮样细胞
转化与否 未转化——成纤维样细胞
转化后——上皮样细胞
注：传代（passage，subculture）
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20
原代培养
胎儿细胞培养比成人容易；成体组织中 成纤维细胞、肾上皮细胞比较容易，上 皮细胞培养难。 细胞间的分离酶：胰蛋白酶、胶原酶、 单一种类细胞的分离培养：根据培养条 件——培养基、细胞接着面的条件、接 着速度、离心法等。
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21
细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功
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6
培养法的种类
体外培养 细胞培养
组织培养 器官培养
贴壁培养 悬浮培养
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7
体 外 培 养 种 类
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8
细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。
群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培 养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细 胞或单细胞悬液。
克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培 养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一 个细胞形成一个集落，称为克隆。
参考书目
《细胞培养》，世界图书出版公司， 1996年
《培养细胞学与细胞培养技术》 ，上海 科学技术出版社，2004年
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1
本次课内容
细胞培养的基本知识
一、绪论
培养法的种类、培养法的发展、细胞培养的常 用术语、培养细胞的作用及意义、培养法的应 用
二、培养细胞的特征 培养细胞的生长方式和类型、 培养细胞的生长特点和生长增殖过程、 细胞培养的条件及影响因素
学习资料
59
单个细胞的细胞周期（cell cycle）
G1→S→G2 →M
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44
（一）培养细胞的生长方式和类型
粘附型细胞：附着在某一固相支持物表面才 能生长的细胞。
如：成纤维细胞、心肌与平滑肌细胞、表皮细胞、骨与软骨 细胞、肿瘤细胞
悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。
如：血、脾及骨髓培养的细胞及某些癌细胞
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粘附型（贴壁型）细胞
组织来源
细胞系
脾
Friend
Morris肝癌 HTC
髓性白血病 K562
垂体瘤
GH2,GH3
黑色素瘤
B16
髓性白血病 HL60
胶质瘤
CCM
成神经细胞瘤 C1300
增殖性 物种 永生 小鼠 永生 大鼠 永生 人 永生 大鼠 永生 小鼠 永生 人 永生 人 永生 大鼠
分化特性 合成血红蛋白 酪氨酸转移酶诱导 合成血红蛋白 产生生长激素 产生色素 合成球蛋白 胶质纤维酸性蛋白 生长轴突