Beclin1、p53蛋白在宫颈组织中的表达意义

•论著与研堯•
Beclin 1、P53蛋白在宫颈组织中的表达意义
张欣宁\吴海燕\姚书忠2
(1.清远市人民医院妇科，广东清远511500;2.中山大学附属第一医院妇科，广东广州510080)
[摘要]目的:检测自噬基因Beclin 1以及凋亡抑制基因P53在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈鱗癌中的表达，探讨两者之间及其与宫颈癌临床病理参数的关系。

方法：采用免疫组化法检测正常子宫颈标本20例，各级CIN病变各30 例，子宫颈鱗癌90例。

结果：（1)从正常宫颈，CIN I级、n级、n级到宫颈癌组织，Beclin 1蛋白的阳性表达率分别呈递减趋势，与疾病的进展呈负相关;p53蛋白的阳性表达率呈递增趋势，与疾病的进展呈正相关。

（2)在宫颈癌组织各组别的比较中，Beclin 1、P53表达程度均与年龄、F IG0分期、肿瘤大小无关（P >0.05)，与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关(P <0.05)。

（3)在宫颈癌组织中，Beclin 1与P53的表达呈负相关（P <0.01)。

结论：Beclin 1和P53的表达水平与宫颈
癌发展密切相关，二者联合检测可以为宫颈癌的早期诊断、评估恶性程度和预后提供参考；宫颈癌中细胞自噬受到抑制，这一现象有望为宫颈癌的诊治提供新途径。

[关键词]宫颈正常组织；CIN I ;CINn ;C IN n;Beclin 1;P53
[中图分类号]R737. 33 [文献标识码]A DOI: 10. 11851/j. issn. 1673-1557. 2016. 06. 004
优先数字出版地址：http://www. cnki. net/kcms/detail/51. 1688. R. 20161111.1011.002. html
Expression and Clinical Significance of Beclin 1 and p53 Proteins
in Squamous Cervical Cancer
ZHANG Xinning1 , WU Haiyan1 , YAO Shuzhong2
(1. Department of Gynaecology,Qingyuan Peoples Hospital,Qingyuan, Guangdong 511500, China；
2. Department of Gynaecology, First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou, Guangdong 510080,C/tma)
[Abstract] Objective ：To detect the protein expression of Beclin 1 and p53 gene in normal cervical tissue(NCT) , cervical intraepithelial neoplasia( CIN) and squamous cervical cancer(SCC) tissues, and explore the correlation between the two proteins and their correlations with clinical pathological parameters of cervical cancer. Methods：20 cases of NCT, 30 cases of CIN at various degrees and 30 cases of SCC were detected by immunohistochemistry method. Results ：( 1) The positive expression rate of Beclin 1 protein showed a gradually downward trend from NCT, CIN I ,CIN II ,CINIH to SCC, which was negatively correlated with the progression of cervical cancer；on the contrary, the positive expression rate of p53 protein showed an upward trend, which was positively correlated with the progression of this cancer. ( 2) Beclin 1 and p53 expression levels had significant correlations with differentiation grade and lymph node metastasis(P <0. 05) while no correlations were found with the age, FIGO stage, tumor size ( P > 0. 05 ). ( 3 ) The chi-square test revealed an inverse correlation between Beclin 1 and p53 expression in SCC tissue (P <0. 01). Conclusion：The expression levels of Beclin 1 and p53 are closely related to the progression of cervical cancer；combined detection can provide a reference for early diagnosis, the evaluation of malignant degree and prognosis；the cell autophagy activity in cervical cancer is down-regulated, which may contributes to the development of novel options for its diagnosis and therapy.
[Keywords] normal cervical tissue；CIN I ; CIN II ;CINIH ;Beclin 1 ；p53
子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，虽然近年来 宫颈癌的治疗取得巨大进展，但晚期患者5年存活率 仍仅为50%左右[1]。

目前，除了已明确高危型H P V 感染是宫颈癌发生的主要危险因素之外[2]，对宫颈癌的发生过程仍不完全清楚。

所以，我们需要进一步探 究宫颈癌的发生、发展过程，研发宫颈癌特异性的肿瘤 标志物，为防治宫颈癌提供新的途径。

Beclin 1是近年新克隆的哺乳动物的自噬调控基
基金项目：清远市科技局项目（2〇l5B〇44)通信作者:姚书忠，yszlfy@ 163. com
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因，作为候选的肿瘤抑制基因而成为近年来的研究热 点[1]。

Beclm 1基因的缺失性突变可导致自发性肿瘤 的发生率提高，研究其在宫颈癌中的表达，将有助于探 索通过调控自噬的表达来干预宫颈癌的发生。

P53基 因是第一个被证实的凋亡抑制基因，在细胞凋亡过程 中起着至关重要的作用[3]。

目前关于Beclin 1和P53 在宫颈癌中的研究已经分别有报道，但两个指标同时 进行检测并研究其相关性的报道未见。

因此，本研究 采用免疫组织化学方法同时检测正常宫颈组织、宫颈 上皮内瘤样病变组织以及子宫颈鳞癌（squamous cervical cancer,S C C)中的 Beclin 1 和 p53 蛋白的表达 情况，探讨两者之间及其与宫颈癌临床病理参数的关 系，以期进一步揭示宫颈癌变的发展过程，为宫颈癌的 诊治提供新的途径。

1资料与方法
1.1 一般资料收集清远市人民医院病理科于2010 年1月至2014年7月的宫颈石蜡包埋组织200例，包 括因子宫肌瘤行子宫切除的正常子宫颈标本（N C T)20 例，宫颈上皮内瘤变（c i n)I级、n级、m级各3〇例，子宫颈鳞癌90例（高分化41例，中低分化49例），其 中I级40例，n a级50例，37例有盆腔淋巴结转移，患者年龄30 ~70岁，所有患者取标本前均未接受放、化疗及免疫治疗。

所有的组织标本均由2名高年资病 理医师诊断。

1.2免疫组化结果判定Beclin 1阳性染色主要表达 在细胞膜或质内，出现棕黄色颗粒为表达阳性。

P53蛋 白以细胞核出现棕黄色显色为表达阳性。

每张病理切 片通过光学显微镜放大400倍，随机选取5个视野进行 阳性细胞结果判定。

分别对阳性细胞数所占比例以及 染色强度进行评分，分别按照着色强度计分(〇分:不着 色;1分:淡黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色)和阳性细胞 占细胞总数百分比(〇分：<5%;1分:5% ~25%;2分: 26% ~50%;3 分:51% ~75% :4 分：>75%)的标准得 分，两部分的得分之和为最后的得分:〇~1分为阴性，2 ~3分为阳性，4分以上为强阳性。

1.3统计学分析全部数据资料用SPSS17.0统计软 件进行统计学分析。

Beclin 1与p53在不同分组中表 达的差异计算使用^检验，表达水平的相关性采用 Spearman相关性分析。

2 结果
2.1 Beclin 1和P53在宫颈不同组织中的表达情况
结果详见表1。

表1Beclin1和P53在宫颈不同组织中的表达
组另||
Beclin 1P53
柄例数/例
-/例+ /例+ +/例阳性率/%-/例+ /例+ +/例阳性率/%
NCT组20361185. 01}1910 5.0”CIN I 组30691580. 01}188440. 01} e m n组309101170. 01}1013766.7”ciNm组301110963. 32)851773. 31) s e e组9049311045. 512552386.7”注:1)与SCC比较P<0.01;2)与SCC组比较P<0.05。

5组间同时比较P<0.01
在正常宫颈组织、CIN I、CIN n、CINEI及宫颈鳞 癌中，Beclin1的阳性表达分别为85. 0%、80. 0%、70. 0%、63. 3%、45. 5%，阳性表达率逐渐下降，与宫颈 病变程度呈负相关（&= -〇.392，P<0.01)。

宫颈正 常组织、c i n I、c i n n、c i n m与宫颈鳞癌相比有显著 性差异（P< 〇.05或P< 0.01)，宫颈正常组织与CIN 各级别组织之间两两比较无显著性差异（P> 〇.05)。

P53在正常宫颈组织、CIN I、CINII、CINEI及宫颈鳞癌 中的阳性表达率分别为5.0%、40. 0%、66. 7%、73. 3%、86. 7%，阳性表达率逐渐下降，与宫颈病变程 度呈正相关（fo =0.405，P <0.01)。

宫颈正常组织、CIN I、CIN n与宫颈癌相比有显著性差异（P< 0.01)，宫颈正常组织与C I N各级别组织两两比较均有显著性 差异（P C0.01)。

2.2 Beclin 1、P53的表达与宫颈鳞癌临床病理因素的关系结果详见表2。

统计分析显示:Beclin 1蛋白的表达与年龄、宫颈 癌临床分期（F I G O)、肌层浸润深度、肿瘤大小均无显 著性相关(P>〇.05)，与肿瘤分化程度、是否合并淋巴 结转移相关（P< 〇.〇1)。

Beclin 1蛋白在高分化的宫 颈癌组织中的表达高于中低分化者（P< 〇.01 )，Beclin 1在无淋巴结转移的宫颈癌组织中的表达高于有淋巴 结转移者（P <〇.〇1)，而p53蛋白的表达与此相反(P<0.01)〇
2.3 Beclin 1与P53在早期宫颈鳞状细胞癌组织中表 达的相关性运用Spearman相关性分析，对上述Beclin 1与P53在90例早期宫颈鳞癌的免疫组化评分 进行相关性分析显示：S C C组织中Beclin 1蛋白的表 达与P53蛋白的表达呈负相关（「= - 0.429, P < 0.0!)〇
415
表2 P53、Becl i n l的表达与宫颈鳞癌临床病理因素的关系
临床病理特征病例数/例
p53阳性Beclin 1 阳性数/例率/%数/例率/%
年龄/岁
容50444090.02151.2
>50463882.62048.7
临床分级
I级403690.02253.6
n a级504280.01946.3
组织分化程度
高分化
413073. 12766.6中低分化494897.91428.5
淋巴结转移
有393794. 81028.6
无
514180.33156.3
肌层浸润深度
<1/2403587.51947.5
為1/2504386.02142.0
肿瘤大小/cm
<4534584.92343.3
為4373389. 11848.6
注:1)与对照组比较P <0.05
3讨 论
3. 1Beclinl蛋白在宫颈不同病变组织中的表达及意 义Bedin 1蛋白具有调节细胞分化、存活和生长的作 用。

以往的研究提示，Beclin 1蛋白与肺癌、胃癌和肝癌 等恶性肿瘤的发生密切相关[4]。

在本研究中可以发现，在宫颈正常组织、各级C I N组织及宫颈癌组织中，Beclin 1表达的阳性率逐渐下降，在宫颈浸润癌中的表达以阴 性和弱阳性为主，提示宫颈癌中存在Bedin 1蛋白的表 达缺失和下调（阴性和弱阳性表达）。

另外，在宫颈各级 C I N组中，虽然Beclin 1的表达出现下调趋势(平均阳性 率71.1%)，但与正常宫颈组(85. 0%)比较无显著性差 异(P >0. 05)。

而各级C I N组与宫颈癌组相比较，均有 显著性差异(P <〇.05或P<〇.01)。

据此，我们可以推 测，Beclin 1表达下调多发生在C I N向浸润癌发展的过 程中，在宫颈癌的发生中起着一定的作用。

在以往的临床研究中发现，临床分级不同、病理学 分级高低以及是否存在淋巴结转移等因素均可预示宫 颈癌恶性侵袭程度以及预后。

分级越晚，分化越差，其 侵袭与转移能力越强，预后越差。

本研究发现Beclin 1蛋白的表达阳性率与宫颈癌的临床分级、病理类型以 及宫颈肌层浸润深度、肿瘤大小等无相关性（P > 〇.05)，而与是否存在淋巴结转移及组织分化程度相 关。

在宫颈高中分化组Beclin 1的表达较低分化组高 (P<0. 01)，表明肿瘤细胞分化越差，恶性程度越高，自噬能力也逐渐减弱，提示Bedin 1表达下调可能与 宫颈癌的发生、发展相关。

4163.2 P53在宫颈不同病变组织中的表达及意义P53 是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的肿瘤抑制 蛋白，在多种恶性肿瘤中有异常表达。

正常状态下，P53可调节凋亡通路中多个关键因子调控凋亡，而缺 失P53的肿瘤细胞D N A损伤后不再发生凋亡，导致恶 性肿瘤的发生[57]。

本试验的研究结果可看出，宫颈正 常组织、宫颈各级别C I N组织及宫颈癌组织中，P53表 达的总阳性率分别为5.0%、40. 0%、66. 7%、73. 3%、86.7%。

随着宫颈病变程度的加重，P53表达阳性率 上升。

P53蛋白在宫颈癌组织中的表达比宫颈正常组 织及C I N各级组织中的表达高，说明野生型P53蛋白 的突变对宫颈癌细胞的凋亡作用减弱或消失，从而导 致癌细胞无限制生长，肿瘤细胞的过度增殖，导致肿瘤 的发生，继而发生浸润及转移。

在许多恶性肿瘤的研究中发现，突变型P53的表 达与肿瘤细胞的侵袭及淋巴转移高度相关[8]。

在宫颈 癌的研究中，对此类的报道不一致。

在本研究中，p53 蛋白表达的阳性率与年龄、分级无关，与肿瘤的分化程 度及是否淋巴转移相关，分化越差，P53表达阳性率越 高，合并淋巴转移比无淋巴转移者表达阳性率高(P<0.01)。

这跟宫颈癌预后不良的高危因素相符。

3. 3 Beclin 1和P53在宫颈癌组织中的关系肿瘤分化差，早期即有淋巴转移是恶性肿瘤预后不良的征兆。

本研究结果显示，宫颈癌分化差及合并淋巴结转移者 的P53蛋白表达率显著高于分化好及无淋巴结转移者 (P<0. 01)。

而Beclinl蛋白的表达与之相反。

该结 果提示，伴随侵袭力的增加，宫颈癌组织细胞中P53 蛋白表达率进一步升高，Beclin 1表达率进一步降低。

说明宫颈癌患者肿瘤组织Beclin 1蛋白和P53蛋白，不仅和肿瘤的发生关系密切，而且和肿瘤转移也十分 密切，两者可能共同参与了宫颈鳞癌的发生、发展过 程。

对相关性分析结果显示，宫颈癌组织中Beclin 1蛋白的表达与p53蛋白的表达呈负相关（r = -0. 429，P<0. 01)。

Beclin 1 和 P53 的相关性进一步 说明了宫颈癌的发生、发展是一个多因素共同作用的 过程，自噬减弱和抗凋亡增强在此过程中共同存在，宫 颈癌的转移与癌组织中P53的过表达及Beclin 1表达 缺失是分不开的。

二者联合检测可作为早期评估肿瘤 转移和侵袭力及判断预后的指标。

总之，在宫颈癌组织中Beclin 1和p53表达异常，二者联合检测可以为肿瘤的早期诊断、评估恶性程度 和预后提供参考。

目前，调控凋亡的基因治疗已引入 宫颈癌的治疗中并取得一定疗效，将来随着研究的不 断深入，将自噬性细胞死亡引入宫颈癌治疗，在加强凋 亡诱导的同时诱导自噬或许会成为治疗的新靶点。

(下转第419页）
同，有部分囊肿与周围组织粘连、包裹，加大手术难度，延长手术时间，分离过程中失血相对较多。

本研究腹 腔镜手术未出现肾盂、淋巴管、肾血管损伤，考虑与经 腹腔途径、暴露囊肿较为彻底、解剖结构较为清楚、操 作空间较大有关，视野良好和熟练的腹腔镜技术是避 免操作副损伤的必要条件。

随着输尿管软镜的开展，给予泌尿外科新的解决 方案，是处理<20 m m的肾结石最为安全的选择[6]。

因为肾盂旁囊肿与肾盂的关系紧密，输尿管软镜下肾 盂旁囊肿切开内引流术成为手术解剖上的基础。

本组 23例中多数病例顺利找到囊肿壁，少数病例在经皮肾 穿刺注射亚甲蓝后找到囊壁。

手术操作时间及手术中 出血量均较腹腔镜手术显著性减少，并且经尿道输尿 管软镜手术经人体自然通道进行操作，腰腹部无创伤，术后不需要留置引流管，术后无切口疼痛、切口感染、切口延迟愈合、切口区麻木及疼痛、皮下气肿等优点。

患者心理及身体接受度和恢复情况较腹腔镜手术略有 优势。

特别对出血性疾病、肾脏有手术史可能存在粘 连、严重腰椎侧弯、重度肥胖的肾盂旁囊肿患者，输尿 管软镜手术是其首选术式。

输尿管软镜因其设备昂贵，费用较腹腔镜手术及 传统开放手术贵，结合患者在经济费用上考量是手术 方式选择的重要因素。

输尿管软镜手术成功的关键在 于开窗引流的面积尽量大，双J管留置囊肿内，能有效 避免开窗处愈合粘连。

本研究输尿管软镜术后留置双 J管3周，1年后复查C T均未发现囊肿复发。

有文献 报道双J管应尽可能置入囊肿，留置时间2个月，可以 减少引流口缩窄[7]。

目前对于术后双J管留置时间尚道感染是不可忽视的问题，在降低肾盂旁囊肿复发率 的前提下，应尽量减少带管时间。

对于治疗肾盂旁囊肿的微创手术方法，输尿管软 镜手术和腹腔镜手术均安全有效，术中、术后并发症较 少，是泌尿外科医师手里两把重要的利器。

输尿管软 镜的优势更加明显，值得推广应用，以期给患者带来更 多的福音。

参考文献：
[1] TARZAMNI M K,S0BHANI N,NEZAMI N,et al. Bilateral
parapelvic cysts that mimic hydronephrosis in two imaging modalities：a case report[ J]. Cases Journal,2008, 1 ： 161. [2] AMIS E S,CR0NAN J J. The renal sinus：an imaging review
and proposed nomenclature for sinus [ J ] . J Urol, 1988,139 ：1151-1159.
[3] 郭蕾.螺旋C T增强多期扫描对肾盂旁囊肿的诊断价值
[J].医学影像学杂志,2009, 19(4) :451453.
[4]白杰，王华玖.B超引导下穿刺置管引流后注射无水乙醇治
疗肾盂旁囊肿—附20例报告[J].新医学,2007，38 (7): 454455.
[5 ] MIYAKE M, MAKIYAMA K, NAKAIGAWA N, et
al. Laparoscopicpyeloplasty for ureteropelvic junction obstruction with crossing vessel and parapelvic cyst [ J ].
Hinyokika Kiyo, 2009,55(4) ：229-231.
[6 ]郭峰，李宗武，高兴华，等.输尿管软镜钬激光碎石术治疗
肾结石98例临床观察[J].国际泌尿系统杂志，2013,33
(3) ：323,
[7]俞蔚文，张大宏，何翔，等.输尿管软镜下钬激光切开内引
流术治疗肾盂旁囊肿的临床研究[J].中华泌尿外科杂志，2013,34(7) ：489^92,
无统一定论。

双J管并发症如膀胱刺激征、血尿、泌尿
(收稿日期:2016-03-23)
(上接第416页）
参考文献：
[1] 王赞宏.自噬基因Beclm 1与宫颈癌相关性的实验研究
[D].成都：四川大学,2007:1-113.
[2] 王颖.宫颈癌发病相关因素的研究分析[J].实用预防医
学，2014,21(3) :345-347.
[3 ] LEE J J, KIM S, YEOM Y I, et al. Enhanced specificity of
the p53 family proteins-based adenoviral gene therapy in uterine cervical cancer cells with E2F1 -responsive promoters [ J ].
Cancer Biol Ther, 2006, 5(11) ：1502-1510.
[4]QIU D M, WANG G L, CHEN L, et al. The expression of
Beclin 1，an autophagic gene, in hepatocellular carcinoma associated with clinical pathological and prognostic significance [J]. BMC Cancer, 2014, 14(1)：1-13.[5] LIVESEY K M, KANG R, VERNON P, et al. P53/HMGB1
complexes regulate autophagy and apoptosis[ J]. Cancer Res, 2012, 72(8) ：1996-2005.
[6] DONG X X, WANG Y R, QIN S, et al. p53 mediates
autophagy activation and mitochondria dysfunction in kainic acid-induced excitotoxicity in primary striatal neurons [ J ].
Neuroscience, 2012, 207(207) ：52-64.
[7] LEE C C,YAMAMOTO S, WANIBUCHI H, et al. Cyclin D1
overexpression in rat two-stage bladder carcinogenesis and its relationship with oncogenes, tumor suppressor genes, and cell proliferation[ J]. Cancer Res, 1997, 57(21) ：4765^1776. [8] 刘福虹.缺氧诱导因子-lct、VEGF、P53在宫颈癌组织中的
表达及其与微血管密度的关系[D].石家庄：河北医科大学，2007.
(收稿日期:2016-04-07)
419。