石蜡切片免疫组化染色步骤

石蜡切片免疫组化染色步骤
石蜡切片免疫组化染色是一种常用的组织学染色技术，它能够通过染
色反应检测组织中的蛋白质分子、细胞因子、细胞膜受体和细胞核因子等，为研究细胞和组织的功能以及疾病的发生机制提供了重要的工具。

下面将
详细介绍石蜡切片免疫组化染色的步骤。

1.组织固定
组织固定是石蜡切片免疫组化染色的第一步，它的目的是保持组织形
态和结构，使得后续的染色步骤能够成功进行。

常用的固定方法有甲醛固定、醋酸盐固定和乙醇固定等。

其中，甲醛固定是最常用的方法，它可以
固定组织细胞的形态和结构，同时减少细胞中的酶活性。

2.组织处理
组织处理是将固定后的组织进行处理以便得到合适的切片和染色结果。

处理过程主要包括去水化、脱脂、透明化和浸渍等。

其中，去水化是将固
定的组织从水中逐渐转移到无水乙醇中，以防止组织中的水分对后续蜡包
埋产生干扰；脱脂是将组织中的脂肪酸等去除，以减少重组过程中的背景
染色；透明化是将组织从乙醇中转移到透明剂中，以便光线穿过组织时不
受阻碍；浸渍是将透明剂中的组织浸渍入蜡中，使其成为切片的固定基质。

3.蜡包埋
蜡包埋是将处理后的组织浸入熔化的石蜡中，使其固定在蜡块中，并
利用蜡的硬度和韧性将组织完整地包裹起来。

蜡包埋过程主要包括浸渍、
浸透和固化等步骤。

其中，浸渍是将固定在透明剂中的组织浸渍入熔化的
蜡中，以提高组织与蜡的亲和性；浸透是将融化的蜡逐渐浸透入组织内部
的过程，以保持组织的完整性；固化是将蜡冷却固化，使其成为切片的固定基质。

4.制备切片
制备切片是将包埋在蜡中的组织切成适当的厚度，以便后续的染色和观察。

制备切片的步骤主要包括切片机调节、切片和玻片浮法三个步骤。

其中，切片机调节是将切片机调整到适合的刀片和切片速度，以保证切片的质量和均匀性；切片是将包埋的组织从蜡块中切下，并将其转移到切片水槽中；玻片浮法是将切片从切片水槽中捞起，并将其平铺在预处理的玻片上。

5.脱蜡和重组
脱蜡和重组是将切片上的蜡去除，并将组织重组成适合的形式，以便后续的染色步骤。

脱蜡主要是将切片浸泡在去蜡溶剂中，以去除切片上的蜡，并保持切片的完整性；重组是将脱蜡后的切片通过加热再次固定到玻片上，以防切片脱落。

6.抗原修复
抗原修复是为了使组织中的抗原能够更好地与抗体结合，以提高染色的灵敏度和特异性。

常用的抗原修复方法有热处理和酶处理两种。

其中，热处理是将切片在高温下加热，以解除组织中抗原的交联，使其能够更好地与抗体结合；酶处理是将切片浸泡在酶液中，以降解组织中的蛋白质，使其抗原能够更好地暴露在切片表面。

7.阻断和孵育
阻断和孵育是为了防止非特异性结合和提高特异性结合的步骤。

阻断是在切片上涂覆非特异性结合抗体或应用非特异性结合物质，以防止非特
异性结合的发生；孵育是将特异性结合的抗体或结合物质加到切片上，以
使其与抗原特异结合，并形成可见的染色反应。

8.染色
染色是将孵育后的切片与染色物质结合，形成可见的染色反应。

常用
的染色方法有免疫荧光染色和酶标记染色两种。

其中，免疫荧光染色是利
用标记有荧光物质的抗体与抗原特异结合，形成可见的荧光信号；酶标记
染色是利用酶标记的抗体与抗原特异结合，再加入合适的底物，形成可见
的颜色反应。

9.覆盖玻片
覆盖玻片是为了固定染色结果并保护切片，以便观察和保存。

常用的
覆盖物质有乳胶和苯胺溶液等。

可以选择透明的覆盖玻片，以保持染色结
果的清晰度和透明度。

总结起来，石蜡切片免疫组化染色的步骤包括：组织固定、组织处理、蜡包埋、制备切片、脱蜡和重组、抗原修复、阻断和孵育、染色和覆盖玻片。

每一步都非常重要，操作时需要特别注意各个步骤的时间和温度控制，以保证结果的准确性和可重复性。