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实训二大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验
大豆磷脂的提取及含量测定
一、试剂与仪器
1、试剂
⑴氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。

⑵大豆市售
⑶无水乙醇------10瓶
⑷磁力搅拌器
⑸对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。

⑹钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。

本液配制后两周即不适用。

⑺亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。

本液应临用新制。

⑻磷酸二氢钾
⑼浓硫酸
⑽过氧化氢
⑾石油醚、
⑿氯仿、甲醇、冰乙酸
⒀20％硫酸铵
⒁羧甲基纤维素钠
⒂硅胶GF
254
⒃载玻片
2、仪器
凯氏烧瓶，恒温水浴锅，滤纸；电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板，抽滤装置
二、实验操作
㈠、大豆磷脂的提取及含量测定
1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉
2、卵磷脂的提取
⑴称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。

见下表
料液比
1:20
1:20
1:15
1:15
1:15
1:10
1:10
1:20
1:10提取时间
2.5
1.5
2.5
2
1.5
2.5
1.5
2
2提取温度
35
40
40
35
45
45
35
45
40氯化锌
1015
5151015
5510(2)试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl
2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。

㈡磷含量测定
标准溶液的制备：取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。

样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml 与硝酸50ml，缓缓加热至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

测定方法：精密量取对照品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各依次加入钼酸铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀,暗处放置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波长处分别测定吸光度，计算含磷量。

硅胶薄层板的制备
【实验材料】
1．器材
玻板（5cm×20cm或10cm×20cm，厚度5mm）、直径10cm乳钵、烘箱、干燥器。

2．试剂与试药
硅胶G，羧甲基纤维素钠。

3．0.4%羧甲基纤维素钠的配制：取4g羧甲基纤维素钠加纯净水使成1000ml，室温浸泡过夜，煮沸使其溶解，补足溶剂减少量，即得。

4、药棉
5、漏斗
6、烧杯
7、拉板器（药匙）
【实验方法】
1、临用前将，0．4%羧甲基纤维素钠先用棉花过滤，以除去其中的沉淀不溶物(否则铺板有麻点)。

2、按硅胶G-0.4%羧甲基纤维素钠溶液（1：2.5）的比例配好研磨均匀，注意不要有气泡，研磨时向一个方向研磨，然后用机械搅拌一段时间除去里面的气泡，再静置半小时就可以铺板了。

3、铺板：将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板。

铺板时，拉铺板器的速度不要过快，也不要太慢。

（或者将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。

铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。

如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。

）
4、涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在120℃烘30分钟（105℃烘120分钟），取出，置干燥器中贮存，临用时取出。

卵磷脂薄层色谱实验
【实验材料】
1．器材
10ml量筒、层析缸（大小与所所铺的薄层板相配）、点样毛细管、硅胶G 薄层板、显色喷雾瓶、台称、水浴锅、烘箱。

2．试剂与试药
氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。

3．10%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，缓慢加至100ml 95%乙醇中，摇匀，放冷，即得。

【实验方法】
1．硅胶薄层板划线；
2、取磷脂样品50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解，
3、照薄层色谱法，用毛细管吸取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3，V/V)为展开剂，展开，取出，记录展开剂的前沿位置，晾干，记下展开剂的位置。

4、显色
向干燥的薄板喷洒20％硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明，在220℃下烘烤20min。

5、测算R
f值
溶质在纸上的移动速度率可用迁移率R
f值表示，R
f值主要决定于被分离物质在两相间的分配系数。

在同一条件下，R
f值是个常数，不同物质的R
f值不同，这一性质可作为混合物分离鉴定的依据。

薄板显色成功后，对不同斑点进行R
f值测算。

6、层析结果
显色之后每块板上出现的点，其R
f值与文献值相比较，便可知每个点对应的磷脂。

文献中溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰胆碱以及磷脂酰乙醇胺的R
f值分别约为0.1、0.2、0.4和0.9.
【注意事项】
1、点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5-2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。

点样时必须注意勿损伤薄层表面；
2、展开室需预先用展开剂饱和；
3、将点好样品的薄膜放入层析缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄膜底边0.5-1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为8-15cm）。

卵磷脂咀嚼片的的制备与检验
一、仪器及试剂
1、试剂
⑴乳糖------------1000g
⑵淀粉---------------1500g
⑶微粉硅胶[二氧化硅（药用）]
⑷硬脂酸镁----500g
⑸卵磷脂粉----1000g（自制）
⑹维生素E-----1g
2、实验仪器
药筛（16目），单冲压片机，脆碎度测定仪，电子天平，智能崩解时限测试仪;药物溶出度仪
二、片剂的制备
卵磷脂维E咀嚼片配方如下（2g／片）
卵磷脂粉+稀释剂共90g稀释剂选用甘露醇和淀粉；
香精5g
助流剂+润滑剂5g
采用正交设计，选用稀释剂比例、稀释剂含量、助流剂与稀释剂比例为三因素，进行正交设计，正交试验表如下：
卵磷脂维E咀嚼片配方
乳糖：淀粉
5:1
1:2
5:1
1:2
1:5
5:1稀释剂含量
70%
50%
30%
70%
70%
50%微粉硅胶：硬脂酸镁
1:25:15:11:55:11:51:5
1:5
1:250%
30%
30%1:21:51:2制法：
将卵磷脂粉、甘露醇、淀粉、微晶纤维素混合后，以无水乙醇制成颗粒（16目），44℃干燥，16目整粒，颗粒加入维生素E、香精、微粉硅胶、硬脂酸镁混合后，压片。

4、片剂的检查
⑴、外观检查随机抽取100片，平铺在白瓷板，置于白炽灯下，用肉眼观察30s，色泽一致，80-100目大小的杂色点不得超过5%，麻点小于5%，并不得有严重花斑或异物。

⑵硬度检查按《中国药典》2010版规定，用硬度计测定。

将药片垂直固定在微调夹头与定头之间，待药片破碎读取指示读数，共测6片，取其平均值。

⑶脆碎度检查按《中国药典》2010版规定，取药片20片，精密称定后置脆碎度测定仪中，振动4min，除去细粉和碎粒，称重后与原药片比较，其减重率不得超过0.8%。

⑷片重差异检查按《中国药典》2010版规定
片剂的平均重量
0.3g以下
0.3g或0.3g以上重量差异限度
+7.5%
+5.0%
检查方法：取药片20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定各片的重量。

每片重量与平均片重相比较，超出重量差异限度的药片不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。

⑸崩解时限检查按《中国药典》2005版规定，取药片6片分别置于吊蓝的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，一般在15min内全部崩解，如有1片不能完全崩解，应另取6片进行复试，均应符合规定。

卵磷脂维生素E片物理质量检测结果及分析
配方麻面（%）外观杂色
点（%）畸形（%）重量差异硬度（kg/m3）崩解时限限度（%）。