维生素B片含量测定的方法验证ppt课件
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6
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。
• 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分
别测定吸光度，计算即得。
7
实验内容与要求
•鉴别试验
•吸收波长选择
•精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
18
加样回收试验
98~102%
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
19
撰写方法学验证论文
• 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 • 精密度试验 • 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 • 重复性试验 • 加样回收试验: • 设计称样量、对照品加入量 • 含量测定：根据实验测定数值进行计算
• RSD < 2.0%
……仪器分析
13
稳定性试验
• 同批、同法
14
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度
•要求
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
15
重现性试验(示例)
16
精密度试验（示例 ）
17
加样回收率试验
3
重现性试验
4
加样回收试验
5
稳定性试验
9
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解， 并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、 5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液 （9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中 在246nm处测量→并用8mg(相当于维生素B125mg，标
示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml 量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15 分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥 滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中， 盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供 示品溶液。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
12
精密度试验
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
1
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2
H2 C
N+
CH2CH2OH
Cl- HCl
CH3
2
性质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应：
特征性鉴别
• 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 含量测定 • 氯化物特性：
氯化物检查
3
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
RSD%
如何引用？
•重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光
度）计算标示量%，计算RSD%
•稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算
RSD%
•加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加
样回收率试验
•含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
8
分析方法的验证
1
线性关系和范围
2
精密度试验
• 含量测定
维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，E11c%m 421
4
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
20
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21
10
线性关系
11
稳定性试验
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量， 使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其 置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、 30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、 1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.
•含量测定 • 2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml
量瓶中，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度 ，摇匀→ 得到对照品溶液。
• 3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分
别测定吸光度，计算即得。
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实验内容与要求
•鉴别试验
•吸收波长选择
•精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
•目的
•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值
或参考值接近的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
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加样回收试验
98~102%
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
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撰写方法学验证论文
• 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 • 精密度试验 • 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 • 重复性试验 • 加样回收试验: • 设计称样量、对照品加入量 • 含量测定：根据实验测定数值进行计算
• RSD < 2.0%
……仪器分析
13
稳定性试验
• 同批、同法
14
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度
•要求
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
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重现性试验(示例)
16
精密度试验（示例 ）
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加样回收率试验
3
重现性试验
4
加样回收试验
5
稳定性试验
9
线性与范围
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置100ml量
瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量，使维生素B1溶解， 并定容至刻度，摇匀 →分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、 5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液 （9→1000）至刻度，摇匀→将其置于紫外分光光度计中 在246nm处测量→并用8mg(相当于维生素B125mg，标
示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml 量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15 分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥 滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中， 盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 得到供 示品溶液。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
12
精密度试验
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
1
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2
H2 C
N+
CH2CH2OH
Cl- HCl
CH3
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性质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应：
特征性鉴别
• 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 含量测定 • 氯化物特性：
氯化物检查
3
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
RSD%
如何引用？
•重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光
度）计算标示量%，计算RSD%
•稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算
RSD%
•加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加
样回收率试验
•含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
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分析方法的验证
1
线性关系和范围
2
精密度试验
• 含量测定
维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，E11c%m 421
4
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
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此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
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线性关系
11
稳定性试验
•精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）少量， 使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →将其 置于紫外分光光度计中在246nm处测量→在0、15、 30、45、60min时间点分别测定样品的A246→在0、 1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.