微孔板-CCD数码成像胶束增敏荧光法检测氟喹诺酮类药物
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时， ４种 Ｆ 类 药 物 的荧 光 强 度 均 达 到 最 强 ， 续增 Ｑｓ 继 加Ｓ ＤＳ浓 度 ， 光强 度 基 本不 变． 验 选择 Ｓ Ｓ浓度 荧 实 Ｄ
为 ０ ０ ｌＬ ． １ｍｏ／ ．
２ ２ 数 据 处 理 ．
配置 ｐ ４ ５ Ｓ Ｈ ． 、 ＤＳ浓度 为 ０ ０ ｌＬ Ｆ ｓ 药 ． １ｍｏ／ 、 Ｑ 类
・３ ８ ・ ８
厦 门大 学 学 报 （ 自然 科学 版 ）
；
一 ｄ８． 茸萋 ． ．【 ｊ 一 ＼
ｌ
一 ８ｇ∞Ｊｌ ｐｔ ０
１ ）
∞ ∞ 加 ∞ ∞ ∞
ｂ
ｐ Ｈ
图 ５ ａＥ ． ＮＲ（０ ５ ０ｎ ／ Ｌ 单 列 微 孔 荧 光 成 像 图 ５ ￣ ０ ｇ ｍ ） ｂ 微 孔 荧 光 成 像 亮 度 所 对 应 的信 号 峰 强 度 ．
５０ １
５ ４０
Ｘｎ ／ ｍ
）ｎ ． ｍ ／
图３ ｐ 对Ｅ Ｈ ＮＲ荧 光 激 发 （ ） 发 射 光 谱 （） 影 响 ａ和 ｂ的
ｌ ５ｐ 分 别 为 ２ ０ ４ ０ ６ ０ ８ ０和 １ ． ～ Ｈ ． ，． ，． ，． ００
Ｆｉ． Ｔｈ ｅ ｔｏ Ｈ ｎ ｔ ｅｅ ｃｔｔｏ （ ） ａ ｄ ｅ ｓ ｉｎ（ ） ｓ ｅ ｔｕ ｏ ｇ３ ｅｄ｛ｃ ｆｐ ｏ ｈ ｘ ｉａｉｎ ａ ｎ ｍｉｓｏ ｂ ｐ ｃｒ ｍ ｆＥＮＲ
样 品发 出荧光 ， Ｃ Ｄ数码 相机 采 集微孔 板 样 品荧 光 用 Ｃ
并 成像 ， Ｃ ｅ Ｐ软 件处 理荧 光数 据 ， 用 ｈ ｍｌ 得荧 光 亮度 与
其 浓度 的关 系． 进行批 量 样 品的快 速检 测 ． 可
光 ， Ｈ 大 于 ５ ０后 ， 光 强 度 逐渐 降低 ， 在 ｐ ． ｐ ． 荧 但 Ｈ ７０
品荧光 成像 数 据 ， Ｃ ｅ Ｐ软 件 处 理 得 荧 光 成像 亮 用 ｈ ｍｌ 度 与信 号峰 强度 的关 系如 图 ５ 图 ５ 为不 同浓 度 Ｅ ． ａ ＮＲ 溶 液 的荧光成 像 ， ５ 图 ｂ为 各浓 度对应 的信 号峰 ． ６ 图 ａ
３０
４０ ２
４０ ５
４８ ０
物 在更 宽 的 ｐ 范 围 内稳 定 发光． 验选 择 ｐ ４ ５的 Ｈ 实 Ｈ ．
Ｂ Ｒ缓 冲 溶 液 控 制 测 定 体 系 的 ｐ 值 ． 一 步 考 察 － Ｈ 进 Ｓ Ｓ浓度对 Ｆ 类 药 物 荧 光 强 度 的影 响 ， 果 表 明 ： Ｄ Ｑｓ 结 Ｓ Ｓ浓 度增 加至 ８ ０ ｍｏ／ （ Ｄ Ｄ ×１ ｌＬ Ｓ Ｓ胶束 临界 浓度 ）
图 ４所 示．比较 ｐ 值 变 化 对 游 离 状 态 和 胶 束 状 态 Ｈ
ＮＯ Ｒ和 ＯＦ Ｌ溶液 ， ３ ０ ｎ 为激 发 波 长 ， 察 各 自 以 ３ ｍ 考 荧 光强度 随 ｐ 的变化 情况 （ ２ ． Ｈ 图 ）
Ｆ 类药 物发 光行 为 的响应 ， Ｑｓ 发现 胶束 状 态 Ｆ 类药 Ｑｓ
Ｅ ＮＲ， Ｉ ， Ｒ 和 Ｏ Ｌ的 质 量 浓 度 均 为 ３ ０ ｎ ／ Ｃ Ｐ ＮＯ Ｆ ０ ｇ ｍＬ
Ｆ ｇ ２ Ｔｈ ｆｅ ｔｏ Ｈ ｎ ｔ ｅ ｆ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｉ ｔ ｎ ｉｉｓ ｏ ｉ． ｅ ｅ ｆ ｃ ｆ ｐ ｏ ｈ ｌ ｒ ｓ ｅ ｃ ｎ ｅ ｓｔ ｆ ｕ ｅ ＥＮＲ， Ｐ， ＣＩ Ｎ０Ｒ ｎ Ｌ ａ ｄ ＯＦ
处呈现 一个小 的 台阶 ； Ｉ Ｃ Ｐ和 ＮＯ Ｒ均 在 ｐ ２ ０ ６０ Ｈ ． ～ ． 和 ｐ ． ～８ ０时 出现 ２个 平 台． 一 步 考察 ｐ 对 Ｈ ６Ｏ ． 进 Ｈ
２ 结 果 和 讨 论
２ １ 酸 度 与 表 面 活 性 剂 的影 响 ．
Ｆ 类 药 物 为 天 然 荧 光 物 质 ［ （ 一 ２ ０ ３ ０ Ｑｓ ８． ］； 【 ８ ～ ３ ａ ＝４ ０ ３ ｍ）其 分 子 结 构 中 含有 氨基 和羧 ｍ， １ ￣４ ０ｎ ， 基， 因此 ， 介质 的酸碱 性 显 著 影 响其 荧 光 光 谱 特 性． 配
置 ３ ０ｎ ／ ０ ｇ ｍＬ、 同 ｐ （ ． ～ １ ． ） Ｅ 不 Ｈ ２０ Ｏ Ｏ 的 ＮＲ， Ｉ Ｃ Ｐ，
Ｅ ＮＲ荧光 激发 和发 射光 谱 的 影 响 ， 现 ｐ 变 化并 不 发 Ｈ
影 响其激发 光谱 的峰形 （ ３ ） 但 ｐ ． 图 ａ ， Ｈ ８ ０时的发射 光
谱 相对 于 ｐ ２ ０ ６ ０时 的 发 射 光 谱 明显 蓝 移 （ Ｈ ． ～ ． 图
物质 量 浓 度 为 ５ ～ ５ ０ｎ ／ Ｏ ０ ｇ ｍＬ 的系 列 溶 液 ， 别 取 分
ｐ Ｈ
３ ０ Ｌ于 ９ 孔 微孔 板 中 ， 于 暗箱 样 品 台上 ， ２ ４ ０ ６ 置 以 ５ 和 ３ ２ｎ 光源 激发 ， Ｃ Ｄ数码 相 机采 集微 孔 板样 １ ｍ 用 Ｃ
图２ ｐ 对 Ｅ Ｈ ＮＲ， Ｉ ＮＯＲ和 ＯＦ Ｃ Ｐ， Ｌ荧 光 强 度 的影 响
第 ３期
杨 敬 燕 等 ： 孔 板 － Ｃ 数 码 成 像 胶 束 增 敏 荧 光 法 检 测 氟 喹 诺 酮 类 药 物 微 ＣＤ
ｌ ２ 样 品 测 试 －
将 样 品微 孔 板置 于 暗箱 样 品台 上 ， 光 源 激 发 下 在
实验 结果表 明 ， ｐ 值在 ２ ０ ０ ０范围 内变化 当 Ｈ ． ～１ ． 时 ， 种 Ｆ 类药物 均可 观察 到 两种 型体 发光 的现 象． ４ Ｑｓ Ｅ ＮＲ和 Ｏ Ｌ 在 ｐ ２ ０ ５ ０范 围 内具 有 较 强 的 荧 Ｆ Ｈ ． ～ ．
３） ｂ．
阴离子 表 面 活 性 剂对 Ｆ 类 药 物 的荧 光 具有 敏 Ｑｓ 化作 用． ． １ｍｏ／ Ｄ ０ ０ ｌＬ Ｓ Ｓ约 ３倍 增 强 Ｅ ＮＲ 的荧 光 强 度． 实验 还考 察 了 ０ Ｏ ｌＬＳ Ｓ共存 时 ｐ 对 Ｆ ． ｌｍｏ／ Ｄ Ｈ Ｑｓ
类 药 物荧光 强 度 的影 响 ， 荧 光 强 度 随 ｐ 的变 化 如 其 Ｈ
为 ０ ０ ｌＬ ． １ｍｏ／ ．
２ ２ 数 据 处 理 ．
配置 ｐ ４ ５ Ｓ Ｈ ． 、 ＤＳ浓度 为 ０ ０ ｌＬ Ｆ ｓ 药 ． １ｍｏ／ 、 Ｑ 类
・３ ８ ・ ８
厦 门大 学 学 报 （ 自然 科学 版 ）
；
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一 ８ｇ∞Ｊｌ ｐｔ ０
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∞ ∞ 加 ∞ ∞ ∞
ｂ
ｐ Ｈ
图 ５ ａＥ ． ＮＲ（０ ５ ０ｎ ／ Ｌ 单 列 微 孔 荧 光 成 像 图 ５ ￣ ０ ｇ ｍ ） ｂ 微 孔 荧 光 成 像 亮 度 所 对 应 的信 号 峰 强 度 ．
５０ １
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图３ ｐ 对Ｅ Ｈ ＮＲ荧 光 激 发 （ ） 发 射 光 谱 （） 影 响 ａ和 ｂ的
ｌ ５ｐ 分 别 为 ２ ０ ４ ０ ６ ０ ８ ０和 １ ． ～ Ｈ ． ，． ，． ，． ００
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样 品发 出荧光 ， Ｃ Ｄ数码 相机 采 集微孔 板 样 品荧 光 用 Ｃ
并 成像 ， Ｃ ｅ Ｐ软 件处 理荧 光数 据 ， 用 ｈ ｍｌ 得荧 光 亮度 与
其 浓度 的关 系． 进行批 量 样 品的快 速检 测 ． 可
光 ， Ｈ 大 于 ５ ０后 ， 光 强 度 逐渐 降低 ， 在 ｐ ． ｐ ． 荧 但 Ｈ ７０
品荧光 成像 数 据 ， Ｃ ｅ Ｐ软 件 处 理 得 荧 光 成像 亮 用 ｈ ｍｌ 度 与信 号峰 强度 的关 系如 图 ５ 图 ５ 为不 同浓 度 Ｅ ． ａ ＮＲ 溶 液 的荧光成 像 ， ５ 图 ｂ为 各浓 度对应 的信 号峰 ． ６ 图 ａ
３０
４０ ２
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物 在更 宽 的 ｐ 范 围 内稳 定 发光． 验选 择 ｐ ４ ５的 Ｈ 实 Ｈ ．
Ｂ Ｒ缓 冲 溶 液 控 制 测 定 体 系 的 ｐ 值 ． 一 步 考 察 － Ｈ 进 Ｓ Ｓ浓度对 Ｆ 类 药 物 荧 光 强 度 的影 响 ， 果 表 明 ： Ｄ Ｑｓ 结 Ｓ Ｓ浓 度增 加至 ８ ０ ｍｏ／ （ Ｄ Ｄ ×１ ｌＬ Ｓ Ｓ胶束 临界 浓度 ）
图 ４所 示．比较 ｐ 值 变 化 对 游 离 状 态 和 胶 束 状 态 Ｈ
ＮＯ Ｒ和 ＯＦ Ｌ溶液 ， ３ ０ ｎ 为激 发 波 长 ， 察 各 自 以 ３ ｍ 考 荧 光强度 随 ｐ 的变化 情况 （ ２ ． Ｈ 图 ）
Ｆ 类药 物发 光行 为 的响应 ， Ｑｓ 发现 胶束 状 态 Ｆ 类药 Ｑｓ
Ｅ ＮＲ， Ｉ ， Ｒ 和 Ｏ Ｌ的 质 量 浓 度 均 为 ３ ０ ｎ ／ Ｃ Ｐ ＮＯ Ｆ ０ ｇ ｍＬ
Ｆ ｇ ２ Ｔｈ ｆｅ ｔｏ Ｈ ｎ ｔ ｅ ｆ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｉ ｔ ｎ ｉｉｓ ｏ ｉ． ｅ ｅ ｆ ｃ ｆ ｐ ｏ ｈ ｌ ｒ ｓ ｅ ｃ ｎ ｅ ｓｔ ｆ ｕ ｅ ＥＮＲ， Ｐ， ＣＩ Ｎ０Ｒ ｎ Ｌ ａ ｄ ＯＦ
处呈现 一个小 的 台阶 ； Ｉ Ｃ Ｐ和 ＮＯ Ｒ均 在 ｐ ２ ０ ６０ Ｈ ． ～ ． 和 ｐ ． ～８ ０时 出现 ２个 平 台． 一 步 考察 ｐ 对 Ｈ ６Ｏ ． 进 Ｈ
２ 结 果 和 讨 论
２ １ 酸 度 与 表 面 活 性 剂 的影 响 ．
Ｆ 类 药 物 为 天 然 荧 光 物 质 ［ （ 一 ２ ０ ３ ０ Ｑｓ ８． ］； 【 ８ ～ ３ ａ ＝４ ０ ３ ｍ）其 分 子 结 构 中 含有 氨基 和羧 ｍ， １ ￣４ ０ｎ ， 基， 因此 ， 介质 的酸碱 性 显 著 影 响其 荧 光 光 谱 特 性． 配
置 ３ ０ｎ ／ ０ ｇ ｍＬ、 同 ｐ （ ． ～ １ ． ） Ｅ 不 Ｈ ２０ Ｏ Ｏ 的 ＮＲ， Ｉ Ｃ Ｐ，
Ｅ ＮＲ荧光 激发 和发 射光 谱 的 影 响 ， 现 ｐ 变 化并 不 发 Ｈ
影 响其激发 光谱 的峰形 （ ３ ） 但 ｐ ． 图 ａ ， Ｈ ８ ０时的发射 光
谱 相对 于 ｐ ２ ０ ６ ０时 的 发 射 光 谱 明显 蓝 移 （ Ｈ ． ～ ． 图
物质 量 浓 度 为 ５ ～ ５ ０ｎ ／ Ｏ ０ ｇ ｍＬ 的系 列 溶 液 ， 别 取 分
ｐ Ｈ
３ ０ Ｌ于 ９ 孔 微孔 板 中 ， 于 暗箱 样 品 台上 ， ２ ４ ０ ６ 置 以 ５ 和 ３ ２ｎ 光源 激发 ， Ｃ Ｄ数码 相 机采 集微 孔 板样 １ ｍ 用 Ｃ
图２ ｐ 对 Ｅ Ｈ ＮＲ， Ｉ ＮＯＲ和 ＯＦ Ｃ Ｐ， Ｌ荧 光 强 度 的影 响
第 ３期
杨 敬 燕 等 ： 孔 板 － Ｃ 数 码 成 像 胶 束 增 敏 荧 光 法 检 测 氟 喹 诺 酮 类 药 物 微 ＣＤ
ｌ ２ 样 品 测 试 －
将 样 品微 孔 板置 于 暗箱 样 品台 上 ， 光 源 激 发 下 在
实验 结果表 明 ， ｐ 值在 ２ ０ ０ ０范围 内变化 当 Ｈ ． ～１ ． 时 ， 种 Ｆ 类药物 均可 观察 到 两种 型体 发光 的现 象． ４ Ｑｓ Ｅ ＮＲ和 Ｏ Ｌ 在 ｐ ２ ０ ５ ０范 围 内具 有 较 强 的 荧 Ｆ Ｈ ． ～ ．
３） ｂ．
阴离子 表 面 活 性 剂对 Ｆ 类 药 物 的荧 光 具有 敏 Ｑｓ 化作 用． ． １ｍｏ／ Ｄ ０ ０ ｌＬ Ｓ Ｓ约 ３倍 增 强 Ｅ ＮＲ 的荧 光 强 度． 实验 还考 察 了 ０ Ｏ ｌＬＳ Ｓ共存 时 ｐ 对 Ｆ ． ｌｍｏ／ Ｄ Ｈ Ｑｓ
类 药 物荧光 强 度 的影 响 ， 荧 光 强 度 随 ｐ 的变 化 如 其 Ｈ