浅论PSMA、PSA在前列腺腺癌组织中的表达及其与腺癌临床分期的相关性分析

浅论PSMA、PSA在前列腺腺癌组织中的表达及其与腺癌临床分期的相关
性分析
【摘要】目的：研究前列腺腺癌(Pca)组织中前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达差异，评价两者在Pca预后评估中的价值。

方法：选取Pca患者70例，平均年龄(±)岁;前列腺增生(BPH)患者62例，平均年龄(±)岁。

采用免疫组化法检测PSMA、PSA表达。

结果：Pca患者PSMA、PSA表达阳性率分别
为%(43/70)、%(64/70);BPH患者分别
为%(6/62)、%(56/62)。

PSMA在Pca与BPH 中的表达差异有显着性()，PSA在Pca与BPH 中的表达差异无显着性()。

PSMA、PSA表达对Pca的检出率差异有显着性()。

采用Spearman等级相关分析显示，PSMA和PSA 在Pca中的表达无相关性(P=);Pca临床分期与PSMA表达呈正相关(r=,),而与PSA表达无相关性(P=)。

结论:PSMA和PSA均有较好
的前列腺组织特异性，组织PSA在鉴别男性肿瘤来源时较PSMA存在一定的优势;在鉴别前列腺组织病变的良、恶性时，PSMA优于PSA。

PSMA表达与Pca的临床分期存在相关性，是Pca预后评价的重要指标之一，而组织PSA表达未显示这一优势。

【关键词】前列腺腺癌; 前列腺特异性膜抗原; 前列腺特异性抗原; 免疫组织化学; 临床分期前列腺腺癌; 前列腺特异性膜抗原; 前列腺特异性抗原; 免疫组织化学;
临床分期
[Abstract] Objective: To study the difference of expression of prostate specific membrane antigen(PSMA) and prostate specific antigen(PSA) in prostatic adenocarcinoma tissue and to evaluate their clinical value in the prognosis of prostate cancer. Methods: 70 patients of prostatic adenocarcinoma(Pca) with an average age of(±) years old and 62 patients of benign prostate hyperplasia(BPH) with
an average age of(±) years old were enrolled in this study. The expression of PSMA and PSA were determined by immunohistochemical staining. Results: Positive expression rates of PSMA and PSA in patients with Pca
were %(43/70), %(64/70) respectively; and positive rates of PSMA and PSA in patients with BPH were %(6/62), %(56/62) respectively. The expression of PSMA between Pca and BPH() was significantly different, but the expression of PSA between Pca and BPH()was not significantly different. The detection rates of Pca between PSMA and PSA() were significantly different. By spearman rank correlation analysis, expression of PSMA and PSA in Pca showed no correlation(P=). Clinical stages of Pca was positively correlated with the expression of PSMA(r=, ), but not correlated with the expression of PSA(P=)
did not show any correlation. Conclusion: PSMA and PSA have better prostatic tissue specificity. Expression of PSA in identifying sources of tumors in males and has some advantages over that of PSMA, but in the differential diagnosis of prostatic tissue of benign and malignant, PSMA is better than PSA. Expression of PSMA, one of the important indicators in prognosis of Pca, has a positive correlation(r=, ) with clinical stages of Pca while the expression of PSA has not.
[Key words] prostatic adenocarcinoma; prostate specific membrane antigen; prostate specific antigen; immunohischemistry; clinical stages
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种新
近发现的前列腺腺癌(Pca)相关抗原，具有
较高的特异性和位于前列腺上皮细胞膜的
特性，越来越受到临床的重视[1];但其较少
脱落入血，血清中PSMA检测较PSA相对困难。

为探讨Pca组织中两者表达的差异及其与Pca临床分期的相关性，作者分析了2007年5月至2009年5月70例Pca患者和62例前列腺增生(BPH)患者的临床资料，报道如下。

1 材料与方法
研究对象
原发Pca患者70例，平均年龄(±)岁;BPH患者62例，平均年龄(±)岁。

前列腺标本来自于南京医科大学附属江宁医院、东南大学附属中大医院和南京医科大学第
二附属医院。

所有研究对象排除其他泌尿系统疾病，其他系统肿瘤、感染(包括消化系统、内分泌系统、血液系统疾患)。

所有Pca 标本均为外科手术切除标本或前列腺穿刺
标本，前列腺增生标本为开放性前列腺摘除或经尿道前列腺电切术后的标本。

主要试剂和来源
鼠抗人单克隆抗PSMA抗体(克隆号：
1D6)、鼠抗人单克隆抗PSA抗体(克隆号：、即用型试验盒和DAB酶底
物显色试剂盒、柠檬酸组织抗原修复液均购于福州迈新生物技术公司。

免疫组化染色
采用链霉素抗生物素蛋白过氧化物
酶免疫组化法(即法)。

染色方法：(1) 脱蜡和水化;(2) 柠檬酸高温抗原修复;(3) 内源性过氧化物酶阻断溶液室温下孵育10 min;(4) 非免疫性动物血清室温下孵育10 min;(5) 加入第一抗体，37 ℃温箱孵育60 min;(6) 加入生物素标记的第二抗体，室温下孵育10 min;(7) 链霉菌抗生物素过氧化物酶溶液室温下孵育10 min;(8) 新鲜配制的DAB溶液显色;(9) 苏木素复染，中性树胶封片。

以上几个步骤间均用PBS冲洗5 min×3次。

同时用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

结果判定
PSMA、PSA均为胞浆染色，每张切片随机选5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞的百分比，称为染色密度(staining density, SD)。

以前列腺细胞胞浆出现淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒为阳性
表达。

按着色细胞百分比记分，小于5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，大于50%为3分;按染色强度(staining intensity, SI)记分，无着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分，棕褐色为3分。

将SI记分和SD记分相乘所得的总记分为免疫反应积分(immunoreactive score, IRS)，将IRS的0分设为表达(-);1、2分为(+);3、4分为(++ );6～9分为(+++ )。

Pca临床分期方法
应用2002年AJCC的TNM分期系统，通过DRE、PSA、穿刺活检阳性针数和部位、骨扫描、CT、MRI以及淋巴结切除来明确分期，临床分期分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。

统计学处理
采用SPSS for Windows 12统计分析软件进行分析，对PSMA、PSA的表达与临床资料的关系采用非参数检检
法、卡方检验、Spearman等级相关分析法。

为差异有统计学意义。

2 结果
PSMA、PSA在Pca和BPH中表达情况
在132例前列腺组织中，27例Pca、54例BPH前列腺组织PSMA呈阴性表达;而6例Pca、6例BPH前列腺组织PSA呈阴性表达。

PSMA和PSA阳性染色都位于细胞胞浆，以胞浆近腔缘侧染色较深，腺腔中分泌物亦明显着色。

前列腺组织毛细血管内皮细胞、前列腺基质细胞、射精管上皮细胞均无PSMA或PSA阳性表达。

见图1。

1. Pca组织中的PSMA染色(+++);
2. Pca组织中的PSA染色(+++);
3. BPH组织中的PSMA染色(+);
4. BPH组织中的PSA染色(+)
图1 Pca和BPH组织中PSMA和PSA阳性表达(DAB,×200) PSMA、PSA在Pca和BPH 中的表达差异 70例Pca患者PSMA表达阳性者为43例，表达阳性率为%;62例BPH患者PSMA表达阳性者为6例，表达阳性率为%。

PSMA在Pca和BPH组织中的表达差异有统计学意义(分别为和)。

70例Pca患者PSA表达阳性者为64例，62例BPH患者PSA表达阳性者为54例，PSA在Pca和BPH组织中的表达表达差异均无统计学意义(均)。

PSMA和PSA在Pca中表达的差异以及相关性分析假定PSMA、PSA表达呈“+”或以上作为癌检出阳性，PSMA对70例Pca的阳性检出率为%，PSA为%;PSMA、PSA表达差异采用配对四格表的McNemar Test方法进行统计分析，表明组织PSMA和PSA表达对Pca 的检出率有明显差异(P<)。

PSMA、PSA在Pca 中的表达相关性分析采用Spearman等级相关分析，显示两者表达无相关性(P=)。

PSMA、PSA在Pca中的表达差异及其与临床分期相关性分析 70例Pca患者临床分期为Ⅰ期者10例，Ⅱ期者26例，Ⅲ期者11例，Ⅳ期者23例，PSMA、PSA表达情况见表1。

表1 不同临床分期Pca患者PSMA、PSA 表达情况例
Pca临床分期与PSMA、PSA表达的相关性分析 PSMA表达级别、与临床分期进行相关性分析均采用Spearman等级相关分析法，相关系数分别为、，均P<，表明本研究中Pca组织PSMA表达与临床分期呈正相关。

PSA表达级别、与临床分期进行相关性分析均采用Spearman等级
相关分析法，P分别为、，表明本研究中Pca 组织PSA表达与临床分期无相关性。

不同肿瘤分期Pca组织PSMA、PSA表达的差异将Pca临床分期为Ⅰ、Ⅱ期者定为
局限性Pca，共36例;Ⅲ、Ⅳ期者定为肿瘤
超过包膜的Pca，共34例。

按以上肿瘤分期分为两组，比较两组间PSMA、PSA平均IRS 的差异。

PSMA、PSA表达在两组间的差异，
均采用非参数方法检验，统计结果显示，两者的Z值分别为-、-，P
分别为<和;表明本研究中PSMA在不同肿瘤
分期组中表达差异有显着性，而PSA表达差异无显着性。

不同肿瘤分期Pca组织中PSMA与PSA
表达差异的比较对36例局限性、34例肿瘤超过包膜的Pca组织中PSMA、PSA表达的差异均进行非参数方法检验，统计结果显示：在局限性Pca组织中，PSMA 与PSA表达差异有显着性(Z值为-，P<);在肿瘤超过包膜Pca中，PSMA与PSMA表达差
异无显着性(Z值为-，P值为)。

3 讨论
PSMA是一种前列腺细胞膜上的Ⅱ型跨
膜糖蛋白，其胞内段和胞外段有多个抗原表位，与多种蛋白有着密切联系。

其在正常前列腺、BPH、前列腺上皮内肿瘤(PIN)及Pca 组织中都有PSMA的表达，但仅在分泌性上
皮染色阳性，基质上皮和基质细胞均为阴性，在其他组织的实质细胞亦没有表达。

PSA是一种具有237个氨基酸残基的单链糖蛋白，是由位于前列腺腺泡、导管上皮细胞及癌变的前列腺上皮细胞所分泌，具有液化精浆和增强精子活力的功能。

PSA在正常前列腺、BPH、PIN、Pca中均有表达。

血清和精液中PSA的水平差别很大。

本研究结果显示，PSMA、PSA在Pca、BPH组织中表达均有表达，且表达具有差异性。

PSMA在Pca、BPH组织中阳性表达率分别为%、%，PSA在两组中的表达率分别为%、%，两者均有不同程度的表达。

曾浩等的研究结果显示，两种组织PSMA平均染色密度分别为%、%，这一结果与本研究结果有一定的差异，可能与观察指标、试剂来源等因素有关。

等应用组织芯片
技术检测了正常组织和3 161例良性和恶性肿瘤组织中PSMA的表达，结果显
示%(93/141)Pca表达PSMA，而在2 174例各种类型肿瘤中，仅有154例表达PSMA，认为尽管PSMA在一些肿瘤中表达，但其仍可作为Pca诊断和鉴别诊断中非常敏感和特异性的标记;以上研究中PSMA在Pca中的表达阳性率(%)与本研究中的结果(%)相当。

本研究亦显示PSMA、PSA均有较好的前列腺组织特异性，这对于鉴别男性盆腔肿瘤以及转移癌的来源具有重要意义。

我们还发现，PSA 在两组前列腺组织中的整体表达阳性率要高于PSMA，统计分析显示差异有显着性。

Chuang等对高级别(Gleason 8～10)前列腺腺癌与高级别尿路上皮癌应用免疫组化进行鉴别诊断时发现，PSA的敏感度为%，而PSMA为%;并且认为PSA可以作为鉴别高级的前列腺腺癌与高级的尿路上皮癌的首选免疫组化检测标记物。

提示在前列腺组织特异性方面，PSA较PSMA存在一定的优势。

本组研究显示，PSMA在Pca和BPH组织中表达差异显着，而PSA在Pca与BPH中表
达无差异，说明PSMA的肿瘤特异性优于PSA，也就是说，PSMA在对前列腺组织进行良、恶性的鉴别诊断时较PSA存在一定的优势。

Bostwick等的研究亦认为，PSMA作为一种
确定高分级的PIN和Pca的指标，优于PSA，同样说明了PSMA较PSA有较强的肿瘤特异性。

Pca分期的目的是指导选择治疗方法和
评价预后。

通过DRE、PSA、穿刺活检阳性针数和部位、骨扫描、CT、MRI以及淋巴结切
除来明确分期。

目前国内推荐应用2002年AJCC的TNM分期系统。

有研究显示，Pca患者术前血清PSA水平与临床分期成正相关性，并且认为术前PSA水平结合临床分期可以对Pca的疾病进展风险和预后进行评估[10];
而前列腺癌组织中PSA表达与临床分期间无相关性。

PSMA与Pca临床分期的研究报道甚少[11]。

国内崔卫国等[12]用巢式方法检测PSMA、PSA、hK2的表达。

结果发现，PSMA在各期Pca中阳性检出率均较PSA和
hK2高,且随临床分期进展,其阳性检出率亦
增加，认为PSMA对Pca诊断、治疗方案的
选择及预后评估较PSA和hK2有更大的价值。

本组研究显示，临床分期越晚，PSMA表达越强。

而PSA表达与临床分期间无相关关系。

在局限性Pca中的PSA表达强于PSMA;当肿瘤超过包膜后，两者的表达未显示差异。

我们认为，PSMA表达在Pca的诊疗过程中具有较为重要的临床价值，是Pca预后评估的重要指标之一。

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