运动人体科学基础实验

➢ 根据拟定的实验内容与指标，讨论拟定运动实验 对象的训练方案：运动方式、运动强度与时间等 （包括学会训练实验动物）。
➢ 详细制定实验步骤与方法，严格按照实验步骤与 要求进行实验。
⑴设计本次实验方案 ①实验对象的选择（不同项目运动员）运动训练方式、强度、
持续时间及取样时间的选择。 ②血乳酸的实验测定方法选择
用酶联免疫检测仪记录A190 nm读数。
⑷ 实验报告（实验结果与分析）内容 ① 实验结果：实验结果为实验对象运动后，血乳酸含量显著
升高，运动前血乳酸浓度为0.45-1.3 mmol/L，运动后即刻 为10-15 mmol/L，两者差异具有统计学意义（P<0.05）。
② 实验结果分析：乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有 氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生 成，可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占 有重要地位，可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢 的能力。如400 m跑后，血乳酸低于10 mmol/L表明无氧代 谢能力差；达到14-15 mmol/L表明无氧酵解能力强。
➢ 因此，运动时乳酸的生成、运动后乳酸的消除，以及运 动训练和体育锻炼中血乳酸指标的应用成为运动生物化 学研究的重要内容之一。
➢ 安静时，人体静脉血里的乳酸物质的量浓度为0.451.3mmol/L。剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，
➢ 血乳酸浓度显著升高，而且在某些项目中两者的相关系 数很大，其增长情况与运动强度、氧债、训练程度等因 素密切相关，因而可直接用运动后血乳酸的浓度来评定 无氧代谢的能力，如400m跑后，血乳酸低于10 mmol/L 表明无氧代谢能力差；达到14-15 mmol/L表明无氧酵解 能力强。
③稀释液（PBS-Tween）：NaCl8g，KCl0.2g，KH2PO4 0.2g， Na2HPO4·12H2O 2.9g，Tween-20，0.5ml，蒸馏水加至 1000ml；
④洗涤液：同稀释液； ⑤封闭液：0.5%（质量分数）BSA（用PBS配制）； ⑥邻苯二胺溶液（底物）：
配制：0.1 mol/L柠檬酸（2.1g/100 ml），取6.1 ml；0.2
实验十三 血乳酸的测定与应用
1 实验目的
⑴通过实验使学生掌握体内血乳酸的测定方法及该指标在运 动实践中的应用和意义，为体育教学和运动训练提供指导。
⑵进一步巩固离心机、可调微量移液器、振荡器等仪器的基 本操作。掌握实验对象取材、标本处理的方法与半自动生 化分析仪的操作方法。
⑶通过综合设计型实验的实验设计与研究过程，提高学生的 学习兴趣，培养学生查阅文献资料、独立思考、创新思维、 动手操作、分析问题和解决问题的能力，使学生基本掌握 从事一般科学研究的方法。
表3-17 全血乳酸检测试剂盒的操
作
空白管 标准管 测定管
蒸馏水（ml）
0.02
3mmol/L标准液（ml）
0.02
上清液（ml）
0.02
酶工作液（ml）
1
1
1
显色剂（ml）
0.2
0.2
0.2
混匀，37℃水浴准确反应10分钟
终止液（ml）
2
2
2
混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度
⑤采集受试者运动前与运动后血液制成血清
⑥加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μl。
同时作稀释液对照。37℃温育12h，或室温放置2 h。
⑦洗涤同②。
⑧加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG，每孔200μl，37℃温育1h，
或室温放置2h。
⑨洗涤同②。
⑩加底物：邻苯二胺溶液加200μl，室温暗处5min。观察结果：
⑶ 实验方法与步骤： ① 包被抗原：用包被液将抗原做适当稀释，一般为1-
10 μg/孔，每孔加200 μl，37 ℃温育1 h，或4℃冰
箱放置16-18 h。
②洗涤：倒尽板孔中液体，加200μl洗涤液，反复3次，最后
将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
③加封闭液200μl，37℃温育1h。
④洗涤同②。
标准浓度为3mmol/L，稀释倍数为7倍
5 实验参考方案
⑴ 实验对象：实验对象为运动人体科学专业学生10名， 采用功率自行车进行大强度运动训练建立运动实验模型： 采用半自动生化分析仪检测血液标本。
⑵ 运动训练方案：运动模型的建模，采用功率自行车进 行有氧运动训练（运动方案可自行设计）。持续运动5 分钟，运动强度由心率控制，为实验对象最大心率达 85-95％。
➢ 当今血乳酸不仅用来评定速度耐力水平，还用来评定有 氧代谢能力，控制运动强度，预测成绩等等。
3 实验器材与试剂
⑴实验仪器 采血针、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量 细胞培养板、酶联免疫检测仪
⑵ 试剂
①辣根过氧化物酶羊抗兔IgG；
②包被液：0.05 mol/L碳酸缓冲液（pH值为9.63）： Na2CO30.15g，NaHCO20.293g，蒸馏水稀释至100ml；
可采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），或放射免疫法（Radioimmuniassay,RLA） 测定。
③确定实验数据的统计学处理方法。
⑵全血乳酸检测试剂盒法 ① 原理：以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸， 使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物， 呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。 ② 材料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、 超声清洗机、试管架、移液枪、TP头、水浴箱、可见光分 光光度计、比色杯。
6 注意事项
⑴ 设计运动方案时，应注意检索文献资料，注意运动验方法与步骤进行操作。 ⑶ 做好实验数据的统计分析。 ⑷ 若对实验动物进行运动训练时，要注意观察和判断
运动的情况与疲劳的程度：动物停止跑动时应设法驱 赶动物。 ⑸ 做好实验数据的统计分析
2 实验原理
➢ 乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有氧代谢系统的 重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后 透过细胞膜进入血液，并随血液循环到达身体的其他组 织被代谢消除。可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖， 在供能体系中占有重要地位。与此同时，乳酸过多对酸 碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。
mmog（l/溶L 解Na）2H；PO临4·用1前2H加2O3（0%7（.1体63积g分/1数00）mHl2O）24，0 邓μ邻l；苯二胺8
⑦ 终止液：2mol/L H2SO4。
4 实验方法与步骤
➢ 4-5人一组，自由组合编组，选定一人担任小组长。 查找国内外近十年有关运动训练中血乳酸变化的 文献资料并总结，以小组为单位进行讨论，拟定 实验的内容与指标。