作为空白对照组使用型酶联免疫仪测...

ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ．１１１ｅ ｃｅｌｌ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｆｔｅｒ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｌｅａｃｈｉｎｇ
Ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｆｅｍｕｒ ｏｆ ｓｉｘ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｍａｃｒｏ－ｅａｒｓ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ｉｎｔｏ ｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ ｔｏ
ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ，ａｎｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｎｕｍｂｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ｏｂｓｅｖｅｄ ｂｙ ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｏｆ
ｎｅｗｌｙ ｆｏｒｍｅｄ ｂｏｎｅ ｏｆｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ＣＰＣ ｗｉｔｈ ｌ ｔ０ ｌ，ｌ ｔｏ ２，ｌ ｔｏ ３，１ ｔ０ ４ ａｎｄ ｌ ｔ０ ５；ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ＣＰＣ Ｗａｓ ｕｓｅｄ
ｍａｘｉｍｕｍ ａｆｔｅｒ ｉｔ ｗａｓ ｓｅｔ．１１１ｅ
ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｓｅｔｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｂｏｎｅｄｅｆｅｅｔ
英文缩略词表
ＣＰＣ
磷酸钙骨水泥
ＢＭＰ
骨形态生成蛋白
ＴＧＦ—Ｂ
转移生长因子一Ｂ
ＦＧＦ
成纤维细胞生长因子
ＴＣＰ
磷酸三钙
Ｂｉｏｃｅｒａｍｉｃ
生物陶瓷
ＨＡ
羟基磷灰石
ＢＧＣ
生物活性玻璃陶瓷
ＨＡ／ＴＣＰ
双相钙磷陶瓷
ｃｅｍｅｎｔ Ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ
ｃａｌｃｉｕｍ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｉｘｉｎｇ ｒａｔｉｏ ｏｆ
ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ｃｅｍｅｎｔ（ＣＰＣ）谢ｔ１１ ｍｉｃｒｏｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ ｆｏｒ ｒｅｐａｒｉｎｇ ｒａｂｂｉｔ’Ｓ ｒａｄｉｕｓ ｄｅｆｅｃｔ ｂｙ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｖｉｖｏ．
ＡＤＳＣｓ
脂肪间充质干细胞
ＰＤＧＦ
血小板衍生生长因子
ＶＥＧＦ
血管内皮生长因子
Ｌ——ＤＭＥＭ
低糖一达尔伯克（氏）改良伊格尔（氏）培养基
ＭＴＴ
３一（４，５一二甲基噻唑一２）一２，５一二苯基四氮唑溴盐
ＭＳＣｓ
骨髓间充质干细胞
ＢＭＤ
单位面积的骨矿物盐沉积量
原创性声明
本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独 立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发 表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引 用的内容外，不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的科研成 果。对本文的研究成果作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以 明确方式标明。
保密论文在文献回顾
骨缺损治疗现状
骨缺损、特别是大段骨缺损常因创伤、感染、肿瘤、骨不连多次手术植 骨内固定失败及先天性畸形所致，而且随着现代社会交通工具的普遍使用， 创伤导致的骨缺损发生率越来越高。如何治疗骨缺损的成为世界骨科领域的 难题。传统的方法治疗极为困难，最终很多病例不得不采用截肢术或配戴支 具。现有的治疗有：自体骨移植、异体骨移植、异种骨移植、人工骨和组织 工程技术、基因治疗等，但是都各有利弊，仍没有找到最理想的治疗手段。 骨缺损修复机制及国内外骨缺损治疗方法现状如下所述：
ｍａｘｉｍｕｍ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｔｗｏ ｍａｔｅｒｉａｌｓ．１１１ｅ
ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｎｄ
ｓｅｔｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｒａｔｉｏ ｏｆ １ ｔｏ ３ Ｗａｓ ｍｏｄｅｒａｔｅ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ
结论 １：３在可操作性、生物力学、细胞相容性方面是最合适的混合
比例。
体内实验
方法手术造成日本大耳白兔双侧桡骨中段１５ｒａｍ缺损，一侧植入磷酸 钙骨水泥与自体颗粒骨以３：１复合的材料，做为实验组，另一侧植入单纯的
磷酸钙骨水泥，做为对照组。在不同的时间点行Ｘ线、骨密度、最大扭矩及 组织学检测，分析实验组及对照组的成骨性能和材料降解程度。
ｎｕｍｂｅｒｓ ｗｅｅｋ．Ｔｈｅ
ｏｆ ｂｏｎｅ ｍｉｎｅｒａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ
ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ｍｏｍｅｎｔ Ｗａｓ
（０．８４３４－０．０１６）ｎａＮ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ（０．５４０４－０．０２９）ｍＮ ｉｎ ｔｈｅ
结论磷酸钙骨水泥与自体颗粒骨以３：１复合后明显促进了缺损修复和
材料降解。 关键词：磷酸钙骨水泥 微小颗粒骨 间充质干细胞组织工程骨缺
损
英文摘要（Ａｂｓｔｒａｃｔ）
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ Ｏｉｌ ｒｅｐａｒｉｎｇ ｒａｂｂｉｔ ｒａｄｉｕｓ
ｄｅｆｅｃｔ ｕｓｉｎｇ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ａｎｄ ｌ ｔ０ ３ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｌＩ ｏｔｈｅｒ ｒａｔｉｏｓ ｂｙ ＭＴＴ，Ｉｔ
ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｇｒｅｗ ｗｅｌｌ ｏｎ
骨缺损修复机制
１．１传导性骨再生
传导性骨再生是指在缺损区填充大小及形状合适的基质材料，做为骨修 复支架。同时也做为生物活性物质和生长因子的载体。对于基质材料有以下 要求：①良好的生物相容性和快速降解能力，对人体无害；②有骨传导性， 利于细胞黏附和增殖；③有～定的强度，能抵抗一定的外力；④可根据需要 塑形成各种形状和大小。
结果ＭＴＴ检测：比例为ｌ：２和１：３组明显促进骨髓间充质干细胞
的增殖，优于其他组，有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。电镜扫描：细胞在ｌ：２、 ｌ：３组材料的表面生长良好，其他组材料表面的细胞量明显少于这两组，与 ＭＴＴ检测结果相符。ｌ：３组材料的固化时间及最大抗压强度适中，与ＣＰＣ 组比较，有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ Ｗａｓ ｆａｓｔｅｒ
ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｔｈｅ ｓａｌＴｌｅ ｔｉｍｅ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ
ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｅｎｃｌｏｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｂｙ ｂｏｎｙ ｃａｌｌｕｓ ａｔ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ；
ｔｈｅ ｄｅｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐａｉｒｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ａｔ ｔｈｅ １ ６ｔｈ
ｎｕｍｂｅｒ ｌｉｑｕｏｒ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌｓ．刀｝ｅ
ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｕｓ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏｎ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｌ ｔｏ ２
本声明的法律责任由本人承担。
日期：趔：：』：垒
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ｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ ｂｙ ａ ｒａｔｉｏ ｏｆ ３ ｔｏ １ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅ ｄｅｆｅｃｔ ｒｅｐａｒｉｎｇ ａｎｄ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ
７－
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ
ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｅｍｅｎｔ ｍｉｃｒｏｍｏｒｓｅｌｉｚｅｄ ｂｏｎｅ
结果Ｘ线检查发现：实验组材料明显促进成骨，８周时材料周围有明显 的骨痂，１６周时缺损完全修复、材料完全降解，优于对照组； ８周和１６周 时，实验组单位面积的骨矿盐含量均高于对照组，统计学检测，Ｐ＜０．０１：１６
周时实验组和对照组的最大扭矩分别为：（０．８４３±Ｏ．０１６）ｍＮ、（０．５４０±０．０２９） ｍＮ，统计学检验Ｐ＜０．０１；组织学检查发现：在同一时间点实验组新生骨量 明显多于对照组，降解速度也比对照组快。
ｍａｎｉｐｕｉｌｉｔｙ，ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ．
Ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｖｉｖｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｒａｄｉｕｓ ｄｅｆｅｃｔ ｗｅｒｅ ｃｒｅａｔｅｄ ｂｙ
ｓｕｒｇｅｒｙ ｏｎ Ｊａｐａｎ ｗｈｉｔｅ ｂｉｇ ｅａｔ＂ｒａｂｂｉｔｓ．Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｗｉｔｈ ａ ｒａｔｉｏ ｏｆ ３ ｔｏ １ ｉｎ ａ ｌｅｇ
ｗｅｒｅ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｅｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｎ Ｘ—ｒａｙ，ｂｏｎｅ ｄｅｎｓｉｔｙ，ｍａｘｉｍｕｍ ｔｏｒｓｉｏｎａｌ ｍｏｍｅｎｔ ａｎｄ
ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＣＰＣ ａｎｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｌ ｔ０
＆
３（Ｐ＜０．０５）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ １ ｔｏ ３ ｗａｓ ｔｈｏｕｇｈｔ ｔｏ ｂｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｏｎｅ ｉｎ
ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｍｉｘｅｄ谢ｍ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ ｏｆ ｌ ｔｏ ２ ａｎｄ １ ｔｏ ３，ａｎｄ ｔｈｅ
ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｅｌｌ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｗａｓ ｓｍａｌｌｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｅｅｌｌ ｏｎ ｔｈｅ
中文摘要
磷酸钙骨水泥复合自体颗粒骨修复兔桡骨缺损 的实验研究
目的通过体内外实验研究，探讨磷酸钙骨水泥复合自体颗粒骨修复兔 桡骨缺损的最佳比例。
体外试验
方法取６只日本大耳白兔双侧股骨制作颗粒骨，实验组为颗粒骨与
ＣＰＣ分别以１：ｌ、 ｌ：２、１：３、ｌ：４、ｌ：５混合固化的材料；对照组为 单纯ＣＰＣ固化的材料。测定对照组和实验组的固化时间及最大抗压强度；骨 髓间充质干细胞培养于材料浸提液中， ３ｄ后ＭＴＴ检测细胞增殖情况；骨髓 间充质干细胞与各组材料共培养５ｄ，扫描电镜观察材料表面的细胞量及形态。