HPLC法测定盐酸二甲双胍的不确定度评定

HPLC法测定盐酸二甲双胍的不确定度分析
1.目的
对高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍含量进行不确定度分析，找出影响不确定度的因素，分析不确定度来源，给出分析结果的不确定度，使之符合测量不确定度指南和客户对检测结果的要求。

2.不确定度分析
2.1测量方法简述
依据《药品补充检验方法和检验项目批准件（批准件编号2009029）》“二、高效液相色谱法(2)”。

2.1.1对照品溶液的制备
取盐酸二甲双胍对照品适量置25ml容量瓶，加甲醇溶解至刻度，临用时取10ml与另一对照品溶液等量混合（10ml+10ml）。

2.1.2样品溶液的制备
称取一次口服剂量的待测样品，加三氯甲烷20ml，超声10min，过滤，滤渣挥干，加甲醇20ml，超声10min，过滤，滤液作为供试品。

2.2仪器设备：
CPA225D 电子天平仪器编号：A-LH2-48 U=0.02mg，k=2
YP1002N 电子天平仪器编号：A-LH2-45 U=10mg，k=2
岛津LC-20A HPLC色谱仪仪器编号：A-LH2-76
25mL量瓶，容量允差±0.03mL（A级）
10mL移液管，容量允差±0.02mL（B级）
环境条件：（20±3）℃，相对湿度≤60%
3．不确定度分量的来源及其分析
4.不确定度分量评定 4.1对照品
A ：称取对照品的不确定度u rel (m s )：
检定示值误差（检定证书）：0.02mg 按B 类不确定度，矩形分布分析： u c =0.02/3=0.0115 mg
则对照称量的合成相对不确定度为（称取量m s =10mg ）： u rel （m s ）=0.0115/10=0.00115
B ：对照品溶液用25ml 定容的不确定度u rel.c (25ml)
1） 25ml 容量瓶允差为±0.03ml 按B 类不确定度，三角形分布分析：
)1(c u =0.03/3 =0.018ml ； 2）温度效应：
实验室温度变化约为±3℃，对照品用甲醇溶解，甲醇的体积膨胀系数约为1.2×10-3℃-1，温度影响的体积变化：
ΔV=α×Δt×V=1.2×10-3×3×25=0.09ml ，按矩形分布
)2(c u =0.09/3=0.05196mL
u(25ml) =)2()1(2
2
c c u u +=2
205196.0018.0+=0.055
u rel （25ml ）=0.055/25=0.0022
C:对照品用10ml 移液管等体积稀释的不确定度
1）10ml 移液管允差为±0.02ml 按B 类不确定度，三角形分布分析：
)3(c u =0.02/3 =0.0115ml ； 2）温度效应：
实验室温度变化约为±3℃，对照品用甲醇溶解，甲醇的体积膨胀系数约为1.2×10-3℃-1，温度影响的体积变化：
ΔV=α×Δt×V=1.2×10-3×3×10=0.036ml ，按矩形分布
)4(c u =0.0036/3=0.02079mL
u(20ml) =)4(2)3(22
2
c c u u +=2202079.0*20115.0*2+=0.034
u rel （20ml ）=0.034/20=0.0017 4.2重复性
平行制备7个平行样，上机测定，结果重复性： RSD （x ）=1.36% (n=7)，可直接作为不确定度。

u rel (rep)=0.00136
4.3供试品
A: 称取试样的不确定度u rel (m x )：
示值误差：10mg ，按B 类不确定度，矩形分布分析： u c =10/3=5.77 mg
则对照称量的合成相对不确定度为（称取量m x =1000mg ）： u rel （m s ）=5.77 /1000=0.0058 B:样品制备的不确定度u rel.(20ml)
10mL 移液管，移取甲醇2次，标准不确定度同对照品的稀释。

即:u rel （20ml ）=0.034/20=0.0017
5不确定度分量表
6.合成不确定度
盐酸二甲双胍测定的合成不确定度为：
u rel （C x ）=)m ()ml 20(*2)ml 25()()(x 2
2
2
2
2
rel rel rel S rel rel u u u m u rep u ++++ 将各分量代入上式得到
u rel （C x ）=2222
20058.00017.0*20022.000115.000136.0++++
=0.0069
扩展不确定度，取k=2，置信概率95%
Urel ＝k ×u rel （C x ）＝2×0.0069＝1.38％
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