香樟籽乙醇提取物成分及抑菌活性探讨

加强自身建设，增强个人的休养。202 1年1月 19日下 午12时 35分21 .1.1921 .1.19
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。202 1年1月 19日星 期二下 午12时 35分27 秒12:3 5:2721. 1.19
让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。2 021年1 月下午 12时35 分21.1. 1912:3 5Januar y 19, 2021
感谢化学工程与食品科学院各位领导、老师在大 学四年里对我的谆谆教导、关心支持！
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。21. 1.1921. 1.19Tue sday, January 19, 2021
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。1 2:35:27 12:35:2 712:35 1/19/20 21 12:35:27 PM
(2)以提取物对供试菌菌丝生长的抑制率为考察指标，在5种供试菌中，香樟籽 无水乙醇提取液在浓度为0.016 g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%， 对木质层孔菌的抑制率最小为7.14%；在浓度为 0.008 g/ml 时对黑曲霉的 抑制率最高，为4.65%，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小， 都为0；且对5种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。21. 1.1912: 35:2712 :35Jan-2119-Ja n-21
日复一日的努力只为成就美好的明天 。12:35: 2712:3 5:2712: 35Tues day, January 19, 2021
安全放在第一位，防微杜渐。21.1.192 1.1.191 2:35:27 12:35:2 7Janua ry 19, 2021
4、孢子萌发法
本实验采用悬浮液测定法，具体步骤如下： 1）取17ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，每种香樟籽无水乙醇提取液做6瓶，然 后于1210C灭菌30min。 2）用无菌生理盐水冲洗长满孢子的培养基，将孢子冲进锥形瓶中，用纱布滤 去杂质。在每个装有液体培养基的锥形瓶中加入1ml孢子悬浮液，其中5瓶再加入 2ml香樟籽无水乙醇提取液，另1瓶加对照液2ml，达到9：1比例，然后在摇床中培 养。培养温度比表1中的最高温度高10C（孢子培养比病原菌温度高有利于萌发）。 3）孢子萌发(以孢子芽管长度大于孢子短半径者为萌发)后，用无菌水稀释到 适当浓度 (以10×10 低倍镜下, 每个视野30～40个孢子为宜) [7]，加到血细胞计 数板上，在10*10倍显微镜下观测。 4）孢子抑制率的计算方法：
香樟树籽
二、技术路线
三、实验材料
1、供试植物 香樟籽（Cinnamomum camphora seeds）采自湖北襄樊学
院校内。
2、供试微生物 真菌：绿色木霉Trichoderma viride 啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 黑曲霉Aspergillus niger 木质层孔菌Fomes ligneus 细菌：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 以上五个菌株由襄樊学院化学工程与食品科学院廖雪义老
5）在酒精灯旁进行，打孔器沾酒精后烧着灭菌，待降温至室 温后再打菌饼。
6）接种环灭菌后挑取菌块于倒平板的培养皿中，每皿2块， 菌饼反向置于培养基上，光照培养箱培养。各菌培养条件见表1。
7）观测时应在同一地方，同一人，同一把米尺测量，以尽量减少误差。 72h后观测；
8）重复以上步骤，对五种供试菌种分别定时进行测定。 9）生长抑制率的计算方法：
师提供，实验室置冰箱中待用。
四、实验方法
1、香樟籽的粗提方法 本实验利用醇浸法提取，具体步骤如下： （1）将采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盘，置于鼓风干燥箱中烘烤 （50℃），使其干燥。然后用微型植物粉碎机粉碎（或用研钵研 碎），得到粉末。（2）将上述粉末分装到250ml磨口三角瓶中 （0.25倍体积），然后加无水乙醇浸泡，间隔24h收集初提液， 并在原瓶中加新的无水乙醇浸泡，收集所有初提液，并抽滤得过 滤液。（3）用旋转蒸发仪减压浓缩上述过滤液,得膏状物。
毕业论文PPT格式建议如下： 一、研究目的 二、技术路线 三、研究材料 四、研究方法 五、研究结果 六、主要结论 七、创新点及今后努力方向 八、致谢
香樟籽乙醇提取物成分及其 抑菌活性研究
Chemical composition and Antibacterial activity of the Ethanol extracts of Cinnamomum camphora seed
培养72h后的黑曲霉（基中培养
3、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌孢子萌发的抑制活性
由表4可知，在5种供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016g/ml时 对黑曲霉孢子的抑制率最高，为60.00%，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为 12.00%；在浓度为0.008 g/ml时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为12.50%， 对啤酒酵母孢子的抑制率最小，为0；且对5种供试菌孢子的抑制作用都随提取 液浓度的升高而增强。
需改进的地方
（1）醇浸法对香樟籽活性成分的提取有较高的产量,但处理过程比较麻烦、复 杂,且所需溶剂数量较多，故需要对此提取方式进行优化。另外，也可以采用水 蒸汽蒸馏法进行提取，方法简便。 （2）本实验只局限于小试范围,建议在中试时对提取的加工工艺、设备技术等 方面作进一步的研究。 （3）应该多选几种代表性的细菌做抑制实验，使研究结果更准确。同时需要测 定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度（MBC），为最佳用药量提供一定依据。
3、生长速率测定法
1）从试管中挑取原种接种与液体培养基中，在250C，光 照条件下摇床培养。培养时间，不同的菌培养时间不同，以 锥形瓶中有浑浊为宜（细小颗粒悬浮）。
2）固体培养基融化后倒平板，待培养基凝固后吸取1ml 菌液涂布，然后在250C，光照培养箱中培养。倒平板时，倒 一半即可，摇均形成一薄层，以利于打菌饼。
(3)以孢子萌发抑制率为考察指标，在5种供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取 液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为60.00%，对木质层 孔菌孢子的抑制率最小为12.00%；在浓度为0.008 g/ml时，对绿色木霉孢子 的抑制率最高，为12.50%，对啤酒酵母孢子的抑制率最小，为0；且对5种供 试菌孢子的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。
六、主要结论
(1)采用气相色谱质谱联用仪分析香樟籽无水乙醇提取物的主要组分为：癸酸 (18.44%)、月桂酸(14.87%)、肉豆蔻酸(10.88%)、2-莰酮(10.46%)、a-松油 醇(8.69%)、黄樟油素(8.51%)、辛酸(7.90%)、β-蒎烯(3.57%)、柠檬烯 (2.52%)、莰烯(2.48%) 等37种化合物。
这些年的努力就为了得到相应的回报 。2021 年1月19 日星期 二12时 35分27 秒12:3 5:2719 January 2021
科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。下午1 2时35 分27秒 下午12 时35分1 2:35:27 21.1.19
七、创新之处
（1）香樟树具有速生性、观赏性、长寿性等特性,故种植极为普遍.自然落下香 樟籽,数量很大，已经成为城市环境整治的一大负担。本实验的研究目的是科学 地利用这些“废物”，对城市环境的保护和经济发展将会有重要的意义。 （2）目前，香樟籽极少数被采集入药，对其研究主要集中在油脂产品的开发上 ，但对其活性物质参与农业用药剂这方面的研究为数不多，鲜见报道。因此， 本实验拟通过对香樟籽活性物质对供试真菌和细菌控制展开深入研究，以期发 现一种新型天然抗菌剂，为保护环境、维护生态平衡、恢复和改善人类生存环 境提供技术支持和保障。
系所：生物科学系 专业：生物科学 学号：05124006 作者姓名：杨 顺
指导老师：余海忠
一、研究目的
随着社会的发展和我国综合国力的提高,人们对生活质量的 要求日益提高,对生态农业、绿色食品、持续农业、生物多 样性保护及环境保护的呼声越来越高。为了与我国可持续 发展策略相适应,研制开发的新农药必须具有安全性高、残 留低、无公害、生物活性高、选择性高、使用费用低等特 性。植物性农药由于其原材料取自于天然植物, 自然界有其 顺畅的降解途径, 具有无残留、无公害、不易产生抗药性等 优点, 可广泛用于农作物病虫害防治。
2、气相色谱及质谱条件 香樟籽无水乙醇提取物组分的测定在襄樊市产品质量监督检
验所进行，所用仪器为气相色谱质谱联用仪。气相色谱条件： DB-5ms弹性石英毛细管色谱柱(0.25 mm×30m，0.25μm)。升温 程序：初始温度600C保持10min，以10C·min-1至800C，保持15min， 以20C·min-1至2000C，以200C·min-1至2200C，保持5 min。载气为氦 气，流速0.8 ml·min-1；进样口温度2200C。质谱条件：离子源为EI， 电离电压70eV，离子源温度2000C，溶剂延迟时间，7 min，质谱 扫描范围m/z 40～400；扫描周期0.5 S 。
香樟树系樟树属的常绿乔木植物,是我国亚热带绿 阔叶林的主要树种之一,具有驱虫、防腐耐蛀的功能,樟 树籽可提取色素、香料或樟油等物质制成植物农药， 樟树籽为可再生资源, 其应用前景广阔。我国很早就将 樟树籽作为药物用于治病,并认为樟树籽有驱风散寒、 行气止痛之功效，主要含有癸酸(C10)的樟树籽脂肪油 已被试制成碳酸甘油脂,用于治疗脂肪代谢紊乱病症,并 能降血脂及胆固醇。
那么，这种对人体起作用的香樟籽,它的乙醇提取物 对绿色木霉，酵母菌，黑曲霉，木质层孔菌，枯草芽 孢杆菌等微生物会不会有抑制作用呢？其作用方式又 如何？因此，本研究拟就,香樟籽乙醇提取物成分和抑 菌活性展开探讨。在实验中以香樟籽提取物为抑菌剂 ，对上述微生物生长及孢子萌发的影响进行试验，以 研究其抑菌作用。
八、致 谢
本文是在余海忠老师悉心指导下完的，从论文选 题、实验设计到实验材料的采集、实验的实施、论文 的撰写，导师都倾注大量的心血，导师学术上严谨的 治学态度，对实验操作的严格要求以及对科学真理的 执着追求的精神，一直鞭策着我努力奋进，并将使我 受益终身，在此向导师表示由衷的感谢！
在论文期间襄樊学院化学工程与食品科学院张火 云、廖雪义、肖作安等老师都给予我热情的指导，并 帮我解决实验过程中遇到的困难；另外在实验过程中 还得到本实验室刘远琳等同学的热情支持和帮助以及 班上同学吴飞鸽、邱川、胡光文给予的帮助，在此一 并向他们表示衷心的感谢！
3）取45ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，加入0.9g琼脂粉。 同样做15瓶；取75ml土豆滤液于100ml锥形瓶中，加入1.5g 琼脂粉。同样做3瓶。然后于1210C灭菌30min。
4）PDA固体培养基加热融化后，在恒温水浴锅中降温至 500C左右。用10ml量筒（也可用移液枪）量取5ml香樟籽无水乙 醇提取液，倒入装有45ml PDA培养基的锥形瓶中；用10ml量筒 量取8.33ml对照液，倒入装有75ml PDA培养基的锥形瓶中，即 比例为9：1。倒平板时，倒一半即可，摇均形成一薄层，以利于 能平均倒3份平板。注：倒平板时，应在无菌环境中操作，但实 验在酒精灯旁进行时，由于对照液（如乙醇）易挥发燃烧，靠的 太近会烧着。
五、实验结果
1、香樟籽无水乙醇提取物组分
在前述色谱条件下分析，经计算机检索(质谱数据库 N IST147,N IST27)及人工解析质谱并与标准图核对，用 峰面积归一化法定量测出它们的相对含量，结果见表2。
2、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌菌丝生长的抑制活性
由表3可知，在5种供试菌中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为0.016 g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%，对木质层孔菌的抑制率最小 为7.14%；在浓度为0.008 g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为4.65%，对 啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小，都为0；且对5种供试 菌的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。