YS沙门氏菌培养基研制报告

YS沙门氏菌培养基研制报告
9977勺氏.,l中国卫生检验杂志1年第卷第ll期1,J?23?
袭3回归分析结果〞一5.8598y--0.3308)
左右.由于样液的NaCI起始浓度低,漓定突跃
较小,因此很容易造成测量误差.而增大样品实
际取用量,随之带来的酱油基色又会干扰终点
滴定终点判别容易,方法准确度也较原法提高
2倍(实验数据略).
2.4加标回收试验:取数份酱油样品分别参加
观察.为此,本文选择0.02NAgNOa溶液替代不同量的NaCI标准作加标回收测定,结果见
滴定以适当增大其消耗量,试验结果说明,不仅表4,平均回收率100.1. 表4样品加标回收试验结果
3小结
3.1摩尔法测定酱油中食盐含量,因指示剂
Kcr:O.参与沉淀反响,会造成不同程度的实
验偏差.应用倍比原理进行校正,不仅能有效消
除这类分析误差,而且可同时计算出AgNO.滴
定溶液的实际浓度,保证分析结果准确可靠.
3.2降低漓定翔AgNOz的使用浓度可适当提
高样品测定结果的准确性}而改当量浓度N(非
法定计量单位)为滴定度T计算实验结果,那么
可防止NaCI当量值的重复计算以及保证计量
单位法定化,使方法更趋直观方便科学.
●考文越
1中华人民共和胃国囊标准rt童品卫生检验方珐(理化部分)’.北京:中国标准出版杜t1986
2武汉大学,辱.分析化学?jE京r人民教育出版牡.1979: 75
吗一Ys沙门氏菌培养基研制报告
邵荣标宋金林1正锦华葛健民胡琳
‘———1点幕i卫生防疫站(盐城224002)
本文报告采用太肠埃希氏菌噬菌体,枸橡
酸杆菌噬菌体和结晶紫作为抑菌剂,研制出一
种新型的YS沙门氏菌固体琼脂培养基.对已
知沙门氏菌的检出率迭100;与Ss琼脂培养
汤权.
忍6?
基配对,对537份健康人粪便检验,沙门氏菌的
检出率前者为2.42,后者为0.95(x.=6.
125.p<O.025),且保存一周后的YS不影响沙
门氏菌的检出率;对大肠埃希氏菌和枸橼
酸杆菌的抑制率分别为94,74和46.43;在
琼脂平板上就能够区别缓慢发酵乳糖的菌株,
沙r]氏菌的菌落特征明显,易于识别
为防止伤寒等肠道传染病爆发和各种沙门
氏菌食物中毒的发生t经常需要检查沙f】氏菌. 常用的ss,WS等由于杂菌生长太多,菌落色
彩单调等,沙门氏菌检出率较低.我们研制出一
种对大肠埃希氏菌(简称大肠菌),枸橼酸杆菌(简称枸菌)有较强抑制作用的新型沙门氏菌培
养基(简称YS培养基),可显着提高沙门氏菌
的检出率.现把有关情况报告如下.
1材料
1.1YS培养基配制方法称取蛋白胨
]Og,乳糖1Og,胆盐10g,枸橼酸钠10g,氯化钠
5g,枸橼酸铁铵1—0g,DL一胱氨酸0.5g,琼脂
粉(海燕牌)1618g,加水1O00m[,加热溶化
后,调pH至7.4—7.6,加人O.2的结晶紫水
溶液2.5m!.参加0.4溴麝香草酚蓝乙醇溶液
l6ml,封口,煮沸.待冷至40--50〞C时,参加复
合多价大肠菌和枸菌噬菌体50ml,摇匀,倾注
平皿,制成YS平板.
t.2其他培养基ss琼脂,SC增菌液,克氏
双糖铁琼脂等均为商品,按说明书所述使用各种生化反响培养基均按文献方法配制
1.3菌种经过严格生化,噬菌体,血清鉴定
的菌种,大肠菌57株;枸菌28株}肠杆菌1株; 变形杆菌3株;伤寒沙门氏菌25株;甲,乙型副伤寒沙门氏菌各1株;其他沙门氏菌91株.
2方法
2.1YS培养基成分的选择根据文献资
料选择根底营养成分,沙门氏菌生长促进
剂,生化指示系统,指示剂.抑制剂的选择:将待选物质加人到营养肉汤中,测定其对大肠菌,枸苗的最低抑制浓度和对沙门氏菌的最大允许浓度,将适用者适当配合,组合成抑制系统,合成YS培养基.
2.2性能测试
2.2.1菌种检验将沙门氏菌代表株接
种肉沥,37c培养3-4h后,接种Ys平板,
37c培养24h观察生长情况将大肠菌等接种
中国卫生检验杂志1997年第7卷第1期
肉汤,37c培养23h一接种YS乎板.37【,培养
24h,观察生长情况.
2.22粪便标本检验大便标本接种SC增
菌液.37c培养18—24h,同时转种YS,ss平
板,37C培养24h.可疑菌落接种克氏双糖铁琼
脂.仍可疑者进行鉴定.
2.2.3保存试验将制成的Ys平板放冰箱
一
周后,取出进行菌种和粪便标本检验.
3结果
3.1YS培养基成分根据试验,选择结晶紫
(0.005mg/m1),胆盐(1Omg/m1)与大肠菡和枸
菌噬菌体(各lOOU/m1)作为抑制剂,DL--胱氨
酸作为沙门氏菌生长促进剂,其他参见本文
1.1.
3.2对大肠菌等的抑制作用结果见表1.
表1YS培养基对大肠菌等的抑制效果
注:*所有酉棘在ss平桠上生长良好,爵黼盛F
**与ss比照,苗落变得细小或不出现苗落即判为抑制.
3.3沙门氏菌在YS培养基上的生长情
况
3.3.1菌落形态经过反复屡次菌种实
验观察,伤寒和甲型副伤寒沙门氏菌在Ys平
板上,形成元色到载蓝色,中心稍蓝,圆形,直径1—1.5ram,光滑,半透明,稍隆起的菌落,侧光
观察时菌落成露滴状.其他沙门氏苗在YS平板上.形成淡蓝到蓝色,中心黑色(黑色局部相当于菌落直径的1/2),圆形,直径卜一3mm,光滑,边缘半透明,稍隆起的菌落.
3.3.2检出率我们试验了伤寒沙门氏菌25 株;甲,乙型副伤寒沙门氏苗各1株;鼠伤寒, 鸭,伦敦沙门氏菌各2株;阿贡纳沙门氏菌11 株;德尔卑沙门氏菌6株;山夫顿堡沙门氏菌8 株,威尼斯沙门氏菌1株;波茨坦沙门氏菌1 株,这些菌株均能在YS平板上生长,形成土文所述菌落,检出率达100.
中国卫生检验杂志1997年第7誊第1期?25? 34粪便标本检验结果用YS平板与ss平
板对照,同时检验537份健康人粪便标本.前者检出13株沙门氏菌,检出率为2.42;后者检
出5株,检出率为0.95.检出菌株分布情况
见表2.
表2检出的沙n氏菌苗型分布
注:*有2诛为保存一同时YS平板所裣出.
3.5保存效果YS平板球箱内保存一周后,
12株沙门氏菌(含6株伤寒沙门氏菌)的检出率为100.12份粪便标本检出2株阿贡纳沙
门氏菌(用新制的ss乎板未检出).对6株
大肠菌和6株枸菌的抑制率均为2/6
4讨论
4.1为选择一种能够抑制大肠菌和枸菌生长
而不阻碍沙门氏菌生长的试剂,我们试验了40 种化学药物J,其中氯化锂在培养基中终浓度达2mg/ml,硫代硫酸钠,十六烷基三甲基溴化铵等终浓度达4mg/ml时仍不能抑制大脑菌, 枸菌的生长.胆盐,柠檬酸钠等对大肠菌,枸菌也无抑制作用,即使胆盐,硫代硫酸钠,柠檬酸钠按比例配合],对绝大多数菌株仍达不到抑
制效果,但是胆盐对革兰氏阳性菌,霉菌等有很强的抑制作用.其最终我们选择了胆盐,结晶紫和复合噬菌体作为大肠菌和枸菌的抑制剂,其中,结晶紫对大肠菌的有效抑制浓度为
0.O05mg/ml,沙门氏菌允许浓度0.O055mg/
m1,复台噬菌体使用浓度为lOOU/ml,可同时抑制大多数大肠菌和枸菌的生长发育.
4.2目前应用于沙门氏菌别离培养的培养基
较多,绝大多数大肠菌,枸菌菌株在这些培养基上发育良好,能形成茂盛的菌落而阻碍沙门氏菌的生长;又ss培养基中的煌绿[在
0.033rag时抑制伤寒沙门氏菌(2/4)]和中性
红[在2.25rag/0/.时抑制伤寒沙门氏菌(3/4)J对沙门氏菌有一定的抑制作用,因而使粪便中沙门氏菌的检出率偏低.另一方面,用SS,WS培养基对粪便标本检验时,各种菌的菌落形态,颜色单调,特别是不能区别缓慢发酵乳糖的菌株, 使得可疑菌落太多,需要挑更多的菌落转种双糖铁琼脂.
YS培养基克服了上述诸多的缺乏,对大
肠菌和枸菌的抑制率分别到达94.74和
46-43,制成的平板即使放冰箱一周,抑制率
仍都到达2/6.对硫化氢十分敏感,有黑色反响的菌落接种双糖铁琼脂后,很大一局部菌株检不出硫化氢.又复台指示剂也非常敏感,缓慢发酵乳糖的菌株形成黄绿色或蓝色,中心微黄(可围绕在黑心周围)的菌落.粪便中的各种细菌形成黄色到深蓝色的各种菌落,沙门氏菌的菌落明显区别于其他杂菌;可疑菌落按种双糖铁琼脂,沙门氏菌的检出率在5O%～1o0,因而不
但提高了沙门氏菌的检出率,而且可节约大量
的人力,物力.
4.3试验结果说明,YS培养基对沙门氏
菌的检出率达几乎达1O0;对537份健康人
粪便检验,沙门氏菌的检出率2.42.远高于
ss琼脂的检出率0.95(=6.125P<
0.025).Ys保存～周后与新制的SS同时检验
12份粪便标本,前者检出2株阿贡纳沙门氏
菌,后者未检出(x.=4.50p<O.05).
综上所述,可以看出YS培养基明显优于
ss琼脂,对提高沙门氏菌检出率将起到一定的
作用.
参考文献
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