化学发光微粒子免疫法与化学发光酶免疫法检测异常凝血酶原的对比分析

Mod Diagn Treat 现代诊断与治疗2018Jun 29(14)
异常凝血酶原(PIVKA-II )是维生素K 缺乏或拮抗剂-II 诱导的蛋白质,可出现于维生素K 缺乏或肝细胞肝癌(HCC )患者的血清中,是诊断HCC 的另一个重要指标,可与AFP 互为补充[1,2]。

常用于已确诊的肝癌患者进行动态监测以辅助判断疾病的进展或治疗效果,国内外已把PIVKA-II 列为肝癌检测极其重要的指标[3],可与AFP 互为补充提高HCC 的早期诊断率。

化学发光法是目前检测该项目的主流方法,但目前该项目国际上尚无公认的参考方法和参考物质用于标准化,本文对检测PIVKA-II 的这两种方法进行方法学的比较分析,以便于临床上选择更合理的选择PIVKA-II 的检测方法。

报道如下。

1资料与方法
1.1一般资料根据EP9-A2文件要求,随机抽取样本浓度完全分布在仪器允许检测范围内且覆盖医学决定水平的样本80例。

1.2仪器与试剂对照组为化学发光微粒子免疫法(CMIA ),使用雅培Abbot 公司生化免疫一体机162000,PIVKA-II 检测试剂、校准品均为雅培公司生产的原装配套试剂盒,检测范围为0mAU/ml ~30000mAU/ml 。

观察组为化学发光酶免疫法(CLEIA ),使用富士公司瑞必欧LUMIPULSE 化学发光分析仪,及该仪器原装配套检测试剂盒与定标液,检测范围为5mAU/ml ~75000mAU/ml 。

质控品均采用美国伯乐BIO-RAD 的肿瘤标志物质控品。

1.3方法
1.3.1方法的选择依照CLSI EP9-A2文件标准,对肝癌组患者样本进行检测及比对,对照组为化学发光微粒子免疫法(X),观察组为化学发光酶免疫法(Y ),依据依据EP9-A2文件要求进行比对实验。

1.3.2样本检测操作者能够熟练掌握使用仪器设备,实验前认真做好仪器的保养、校准、维护等,做好室内质控并保证质控结果受控,然后进行标本的测定。

采用无菌真空采血管采集门诊及住院患者新鲜血液标本3ml,以3000r/min 分离血清。

1.3.3数据结果离群值检查以检测结果绝对差值和相对差值应小于4倍平均绝对差值(4DX 、4DY )和4倍相对差值平均值(4DX'̄、4DY'̄)作为方法内离群点界限;以两种方法的绝对差值与相对差值,小于4倍的绝对差值平均值(4E)和4倍的相对差值平均值(4E')作为方法间离群点判断界限。

1.4数据作图
1.4.1重复检测均值的散点图以试验法双份测定的均值对比较方法双份测定的均值的散点图,Y 轴为观察组即化学发光酶免疫法检测的结果,X 轴为对照组化学发光微粒子免疫法的结果。

1.4.2所有结果的散点图以观察组的每个检测结果Y ij 对对照组结果均值(Xi)作图。

1.4.3均值差异偏倚图以电化学发光法为X 抽变量(Y-X )对(Y+X)/2作图。

1.4.4单个结果差值偏倚图(单个观察方法结果Y IJ -单个比较方法结果X I )对(对照方法均值Y+比较方法均值X)/2作图。

1.5临床判定标准
1.5.1X 取值范围合适宽度检验用两种方法的直线相关系数(r )判断X 的取值范围是否合适够宽,如果r ≥0.975,则可用线性回归来统计斜率和截距,并计算试验方法线性回归方程Y=bX+a 。

1.5.2检测指标阴阳性判断范围为:样本检测值PIVKA-Ⅱ≤40mAU/ml 为阴性,样本检测值PIVKA-
化学发光微粒子免疫法与化学发光酶免疫法检测
异常凝血酶原的对比分析*
王欢,李介华,徐令清,陆惠慧(广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院检验科,广东清远
511518)
摘要:目的探讨化学发光微粒子免疫法(CMIA )与化学发光酶免疫法(CLEIA )检测肝细胞肝癌患者血清中异常凝血酶原的可比性及应用价值。

方法依照美国临床实验室标准化协会指南比对标准文件EP9-A2,以CMIA 为对照组,CLEIA 为观察组,通过检测数据比对分析,对两种检测方法之间的偏倚进行评估。

结果两种方法检测PIVKA-II 相关性良好,r =0.99953,直线回归方程为Y=0.78508+0.99395X ,在PIVKA-Ⅱ阳性参考限40mAU/ml ,其预期的偏倚值95%可信区间为38.830~42.256mAU/ml 。

结论CMIA 与CLEIA 两种方法均能有效检测PIVKA-II 且相关性良好,均能满足临床需要。

关键词:化学发光微粒子免疫法;化学发光酶免疫法;方法学比较中图分类号:R466.6
文献标识码:B
文章编号:1011￣8174(2018)14￣2301￣02
*::广东省清远市社会发展领域自筹经费科技计划项目(2016B048)
2301··
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Ⅱ>40mAU/ml 为阳性。

1.6统计学处理采用SPSS 2
2.0统计软件进行数据分析,计数资料采用例(百分率)表示,行χ2检验,P <0.05差异有统计学意义。

用Logistic 的回归筛选变量并建立回归方程,对变量及各单项指标进行曲线(ROC)分析;试验方法(Y)和比较方法(X)测定数据,按照NCCLS EP9-A2文件要求编制相关函数公式进行计算分析,软件自动进行数据统计并绘制图表。

2结果
2.1离群值的检查方法内离群点检测控制限
4DX=8.433、4DY =10.2145、4DX'̄=0.0882、4DY'̄=
0.0650,检测结果绝对差值和相对差值均在控制限4倍平均绝对差值(4DX 、4DY )和4倍相对差值平均值(4DX'̄、4DY'̄)范围内范围内,无方法内离群点;方法间离群点检测控制限4E=10.5685、4E'=0.1442,两种方法的绝对差值与相对差值均在4倍绝对差值平均值(4E)和相对差值平均值(4E')为离群点的检测限范围内,两种方法间检测结果无离群点。

2.2数据作图散点图1和散点图2可见,观察组与对照组检测结果线性关系良好,无明显离群点,数据分布均匀;在偏倚图3、4中可见,两种方法对同一份标本测定结果偏差较小,无明显离群值,分布合理。

图1重复检测均值的散点图2.3研究数据取值合适范围的检验对照组的(X )的取值合适范围,可用相关系数r 做粗略的估计。

依据EP9-A2文件给出的r 计算公式得出本研究的r =0.99953。

大于文件要求的r ≥0.975的要求,说明本研究数据取值范围合适,回归方程的斜率和截距可靠。

2.4直线回归分析依据EP9-A2文件相关计算公式,本研究数据求得截距(a )=0.78508斜率(b )=0.99395,直线回归方程为Y=0.78508+0.99395X ,在PIVKA-Ⅱ阳性参考限40mAU/ml ,其预期的偏倚值95%可信区间为38.830~42.256mAU/ml 。

2.5选定PIVKA-Ⅱ医学决定水平40mAU/ml ,以对照组为参考方法计算两种方法检测值的阳性符合率为95%,差异无统计学意义(P >0.05)。

见附表。

3讨论
《全球癌症报告2014》指出,中国的肝癌新增病例和死亡人数均居世界首位,同时中国拥有全球将近50%的肝癌患者人口,肝脏健康管理是我国亟待解决
的问题。

早期诊断率低是造成肝癌患者死亡率高的主要原因[4,5],但是传统诊断方法存在不足之处,限制了肝癌早期诊断率的改善和提升。

维生素K 缺乏或拮抗剂-II 诱导蛋白(Protein induced by vitamin K ab ⁃sence or antagonist-II ,PIVKA-II ),是一种异常形式的凝血酶原,又被称为异常凝血酶原。

既往研究表明,在肝细胞癌筛查中,PIVKA-II 的敏感性和特异性要优于甲胎蛋白,因此在肝细胞癌诊断领域,PIVKA-II
图2所有结果的散点图
图3均值差异与两种方法的均值偏倚图图4单个结果差值对两种方法均值的偏倚图附表两种方法符合率卡方检验分析结果
化学发光微粒子免疫法(CMIA )
合计+-化学发光酶免疫法(CLEIA )合计符合率
+-
755
80
3
7780
95χ2
=0.125P =0.727
7882
1602302··
Mod Diagn Treat 现代诊断与治疗2018Jun 29(14)
高龄孕妇妊娠结局及影响因素分析
周爱华1袁许瑾瑾2(中国科学院大学深圳医院,1.妇幼保健部计划生育技术服务科;2.妇幼保健部妇保科,广东深圳518107)
摘要:目的调查了解高龄孕妇的妊娠结局,分析影响妊娠结局的危险因素。

方法选择产科接收的200例高龄孕妇与200例正常育龄孕妇分别设为高龄组与对照组,比较两组不良妊娠结局发生情况。

根据高龄孕妇不良妊娠结局发生情况,将其分为不良妊娠结局组与正常妊娠结局组,比较两组临床资料,对导致高龄孕妇不良妊娠结局的危险因素进行单因素分析、多因素Logistics 线性回归分析。

结果
高龄组不良妊娠结局发生率为6.50%,显著高于对照组的
1.50%(P <0.05)。

在单因素分析中,不良妊娠结局组与正常妊娠结局组在妊娠期高血压、妊娠期糖尿病、妊娠期贫血、子
受到了越来越多的关注,目前临床推荐AFP 和PIV ⁃
KA-II 联合应用[6,7]。

但目前该项目国际上尚无公认的参考方法和参考物质用于标准化,PIVKA-II 项目的校准品可溯源至内部参考并准品,该内部参考标准品经单次赋值与其商用试剂有一致性,在该背景下本研究依照国内外广泛应用的美国临床实验室标准化协会指南比对标准文件EP9-A2[8],对化学发光微粒子免疫法与化学发光酶免疫法检测异常凝血酶原的进行对比分析。

虽然化学发光法因其可以自动化、快速、重复性好、精密度高等诸多优点,由此已成为目前肿瘤标志物常用的检测方法,但本研究中两种检测方法最后一步测光,是在特定波长下,可检测出具有最大发光强度的发光量,因此检测样品中含有红细胞及其他有形成分、溶血、黄疸、脂血等情况下会影响检测结果,同时要注意采用含有维生素K 类似的药物进行治疗可能导致结果数值出现负偏倚,如果患者正在服用抗菌药物、维生素K 拮抗剂(华法林等)或饮食中维生素K 缺乏,或者酒精性肝病患者摄入酒精,均可能导致结果出现正偏倚[9]。

不同检测系统结果不一致的情况是一个普遍存在的问题,也常见很多报道,引起的原因很多[10],如操作者本身在检测过程中未做好校准、质控、试剂稳定期、规范操作等等[11]。

目前使用的参考范围是根据肝细胞癌的灵敏度以及肝硬化、慢性肝炎的特异性而计算出来的临界值(CUT OFF )为40mAU/ml,两种试剂厂家均提示该项目参考范围会因地区、人种及年龄等差异,各实验室应建立自己的参考范围,2016年,雅培在中国上市PIV ⁃KA-II 的同时,携手国内知名医院和医疗机构,共同发起了“PIVKA-II 中国人群肝癌临床诊断路径多中心研究”。

2018年2月,该研究的一项亚分析成果,显示中国汉族人群的PIVKA-II 95百分位参考范围为13.62~40.38mAU/ml 。

而在中国汉族男性中PI ⁃VAK-II 95百分位参考范围为15.39~42.01mAU/ml ,女性为11.96~39.13mAU/ml 。

在本研究中两种方法检
测PIVKA-II 相关性良好,r =0.99953,直线回归方程为Y=0.78508+0.99395X ,以PIVKA-Ⅱ阳性参考限40mAU/ml ,其预期的偏倚值95%可信区间为38.30~42.256mAU/ml ,以比较方法为参考方法计算两种方法检测值的阳性符合率为95%,差异无统计学意义(P >0.05),提示两种检测方法对PIVKA-II 肝癌诊断有较好的一致性。

CMIA 与CLEIA 两种方法均能有效检测PIVKA-II 且相关性良好,均能满足临床需要。

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收稿日期:2018￣03￣18
2303··。