阿魏挥发油成分GC指纹图谱研究

阿魏挥发油成分GC指纹图谱研究
2008年4月
第30卷第4期
中成药
ChineseTraditionalPatentMedicine
April2008
V o1.30Nn.4
表3回收试验表4.
3讨论
本试验采用CZE法建立了黄芩CEFP,并测定了黄芩苷
含量.考察了不同背景电解质,不同分离模式,不同pH对
CEFP的影响,并运用不同参数从化学成分分布比例和含量
两个方面评价各产地黄芩与对照CEFP相似性,实现利用指
纹图谱全面评价黄芩质量.本试验用色谱指纹图谱信息量
表4样品中黄芩苷的含量测定(,l=3)
指数,和,,评价黄芩CEFP,它既能揭示指纹图谱总信息量,
反映指纹图谱总信号大小,又能揭示指纹信号平均化程度,
两者与色谱指纹图谱指数F和F构成了评价指纹图谱优劣
的新参数.本试验含量测定结果表明,虽然不同产地药材在
化学成分组成方面具有很好相似性,但黄芩苷含量差异较
大,以云南禄丰县,西安商州区,北京延庆县,山西屯留县4
个产地的黄芩药材中黄芩苷的含量较高,甘肃陇西县的含量
最低.不同产地黄芩中黄芩苷的含量差异较大,可能与各地
土壤,气候,采收和贮藏条件不同有关.
参考文献:
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阿魏挥发油成分GC指纹图谱研究
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王珊,柯瑾.,蒲旭峰
(1.成都市药品检验所,四川成都610021;2.成都中医药大学,四川成都610075)
关键词:阿魏;挥发油;指纹图谱;仲丁基.1.丙烯基二硫化物;毛细管气相色谱
摘要:目的:研究阿魏挥发油毛细管气相色谱指纹图谱的分析方法.方法:色谱柱:HP—INNOW AX毛细管柱(30m×0.53
收稿日期:2007-07-17
作者简介:王珊(1976～),女,主管药师,研究方向:药品检验及新药开发,电话:028--85367165.
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第3O卷第4期
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April2008
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mm,1.om),程序升温9ooc(15mi)18ooc(5mi)2o0oc(3mi)22ooc(5mi),FID
检测器温度230℃.结果:以仲丁基一1一丙烯基二硫化物为参照物,标定阿魏挥发油指纹图谱有17个共有峰,其稳定性,
精密度,重复性均符合要求.结论:所选择的10批阿魏挥发油的指纹图谱具有良好的相似性,该方法可靠,简便,可作为
阿魏质量控制的参考方法.
中图分类号:R944.27文献标识码:A文章编号:1001—1528(2008)04-0472-03 AnalysesofessentialoilfromFerulasinkiangensisK.M.Shen
W ANGShan,KEJing.,
PUXu.feng'
(,.ChengduInstituteofDrugControl,Chengdu610041,China;2.ChengduUniversityofTra nditionalChinseseMedwine,Chengdu610075,China)
KEYWORDS:FerulasinkiangensisK.M.Shen;essentialoil;see—butyl—cis/trans一1一propentyldisulfide;capilary
GC;fingerprint
ABSTRACT:AIM:ToestablishaqualitativefingerprintanalysiswithcapillaryGC.METH ODS:HP—INNO—
W AXc.1umn(30m×0.53mm1.0m),c.1umntempemture:90℃(15min)l80℃(5min) 200℃(3min)一2℃()l0℃/min220℃(5min)
,
FIDdetectortemperature:230℃.RESULTS:Compared withrefereneepeakofSec—butyl—cis/trans一1一propentyldisulfide,17commonpeaksonfingerprintsoftheoilfromfer—ulasinkiangensisK.M.Shenwereindicatedbythemethodwithsatisfiedstability,precisiona ndrepeatability.
CONCLUSION:Therearegoodsimilaritiesamong10batchesofessentialoilfromFerulasin kiangensisK.M.
Shen,andthismethodisreliable,simpleandprovidesarefereneestandardforthequalitycontr olofFerulasinki—
angensisK.M.Shen.
阿魏为伞形科植物新疆阿魏FerulasinkiangensisK.M.
Shen或阜康阿魏FerulafukanensisK.M.Shen的树脂.性温,
味苦,辛.中国药典2005年版一部记载具有消积,散痞,杀
虫之功效….阿魏挥发油中其主要成分有顺反仲丁基一1一丙烯基二硫化物,.蒎烯,8一蒎烯等..
根据现代药效学研究,顺反仲丁基一1一丙烯基二硫化物
具有辛通温开,解毒脱瘾的功效.由于阿魏挥发油成分复
杂,仅对某个有效成分进行定性定量分析并不能有效的控制其质量,目前指纹图谱已成为国际公认的控制中药或中成药质量的有效手段,而有关阿魏挥发油的指纹图谱目前尚未见报道.本试验通过用毛细管气相色谱对1O批阿魏挥发油(批号801—810)进行了分析,以挥发油中有效成分仲丁基一
1一丙烯基二硫化物为参照,发现有17个色谱峰为各样品中均能检测到的共有峰,从而确定了这17个峰为共有峰,以控
制阿魏挥发油为原料的中药注射液的批间一致性及稳定性. 1仪器与试药
1.1仪器Agilent6890气相色谱仪,HPChemstations工作
站,FID检测器,AE240电子天平.
1.2试药阿魏药材:1O批阿魏药材购自新疆,经新疆维
吾尔自治区中药民族药研究所鉴定为新疆阿魏(Ferula sinkiangensisK.M.Shen)的树脂.
阿魏挥发油:1O批阿魏挥发油由成都市药物研究所提
供,采用水蒸汽蒸馏法制备.
1.3对照品仲丁基一1一丙烯基二硫化物对照品,由成都市
药物研究所分离提取,GC面积归一化法测定纯度>98%.
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备
取阿魏挥发油样品(批号801)60mg,置25mL量瓶中,
精密称定,用正己烷.异丙醇(1:3)混合溶剂溶解并稀释至刻
度,摇匀,作为供试品溶液.
2.2参照物溶液的制备
称取仲丁基一1一丙烯基二硫化物对照品15mg于25mL
的量瓶中,精密称定,用正己烷一异丙醇(1:3)溶解并稀释至
刻度,摇匀,作为参照物溶液.
2.3色谱条件的确立
吸取上述两种溶液各1进样.以不同升温程序分别
进行试验,以分析时间和分离度为评价指标,最终选择出色
谱条件为:色谱柱:HP—INNOW AX30nl×0.53mm,1.0m;
FID检测器;进样口温度:230℃;柱温:90℃(15min)
!18o℃(5min)__三200℃(3mi)
220oC(5min);检测器温度:230℃;载气(N);3
mlMmin;氢气:30mlMmin;空气:350mlMmin;Makeup(N2);
25mIMmin.
根据以上色谱条件,确定指纹图谱积分方式为:峰宽(PeakWidth)0.1,域值(Threshold)5O,最小峰面积为s(反
式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物)峰的3%.该条件下,所得阿魏挥发油(批号801)指纹图谱中有17个共有峰(图1).
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10A
900
600
400
200
2030405060
,/mIn
阿魏挥发油的GC指纹图谱
3方法学考察
3.1精密度精密吸取供试品溶液1进样,按上述色谱
条件连续进样5次,以样品中反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化
物峰(第二个峰)为参照,计算5次试验测得指纹图谱中主
要色谱峰的相对保留时间及RSD.结果显示,各峰相对保留
时间RSD均在1%(n=5)以下,各色谱峰的相对峰面积比值
的RSD均在3%(n=5)以下.符合指纹图谱的检测要
求.结果见表1.
表1精密度试验共有峰相对峰面积/%
3.2稳定性精密吸取供试品溶液1L,各于0,1,2,4,8h
进样,以样品中反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物峰(第二个
对保留时间及RSD.结果显示,各峰相对保留时间RSD均在
1%以下.各色谱峰的相对峰面积比值的RSD均在3%(n=
峰)为参照,计算5次试验测得指纹图谱中主要色谱峰的相5)以下,符合指纹图谱的检测要求.结果见表2.
表2稳定性试验共有峰相对峰面积/%
3.3重复性精密称取阿魏挥发油(批号801)5份,按上述
供试品溶液的制备方法操作,取供试品1进样测定,以样
品中反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物峰(第二个峰)为参照,
计算5次试验测得指纹图谱中主要色谱峰的相对保留时间
及RSD.结果显示,各峰相对保留时间RSD均在1.4%以
下.各色谱峰的相对峰面积比值的RSD均在3%(n=5)以
下,符合指纹图谱的检测要求.结果见表3.
表3重复性试验共有峰相对峰面积/%
4阿魏挥发油指纹图谱及技术参数
取10批样品,按上述方法,条件试验,建立阿魏挥发油
的指纹图谱.根据《中药注射剂色谱指纹图谱试验研究技术
指南(试行)》的要求,以反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物峰(第二个峰)为参照峰,将其保留时间设为1,计算10批阿魏
挥发油的指纹图谱17个峰的相对保留时间为:
0.26(1),0.32(2),0.36(3),0.38(4),0.40(5),0.44
(6),0.96(7),1.oo(S),1.40(8),1.80(9),1.88(10),1.92
(11),1.97(12),2.03(13),2.07(14),2.10(15),2.13(16).
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各峰的相对保留时间均在±1%之间.
各共有峰峰面积比值为:0.200(1),0.122(2),0.079
(3),0.O56(4),0.186{5),0.128(6),0.239(7),1.00(S),
0.203(8),0.071(9),0.170(10),1.021(11),0.119(12),
0.192(13),0.251(14),0.251(15),0.078(16).
除s峰外,11号峰峰面积为总峰面积的23%,其余各峰
单峰面积均小于总峰面积的10%.非共有峰总面积小于总
峰面积的10%.
5指纹图谱的相似度
l
m图
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以共有模式为参照,通过《中药指纹图谱相似度计算软
件》计算得到各批次药材色谱指纹图谱的相似度.结果表明
10批阿魏药材挥发油指纹图谱相似,质量稳定可控.结果见
表4.
表410批阿魏挥发油指纹图谱的相似度
样品12345678910
相似度0.970.950.910.930.980.920.990.930.970.94
6讨论
6.1有报道采用GC—MS法探明阿魏挥发油中含有以顺
式和反式仲丁基.1一丙烯基二硫化物为主的多种含硫化合物, 其中顺式和反式仲丁基一1一丙烯基二硫化物之和约占挥发油总量的50%左右.成都市药物研究所采用色谱分离技术,分
离提取仲丁基一1一丙烯基二硫化物,经MS,IR,uV,NMR等检测手段确定其结构,GC面积归一化法测定纯度>98%,作为
阿魏挥发油成分GC指纹图谱的对照品.MS结果为二硫化
物同位素峰m/z164(5.76%),分子离子峰m/z162
(53.38%),其他各离子碎片均能合理解释,与仲丁基丙烯基
二硫化物的结构式相符.紫外光谱图,最大吸收峰在227
nm处,对应了C=C在紫外区的特征吸收.红外光谱图中,
波数1611.1为烯烃基特征伸缩振动,波数933.9为反式烯
烃基特征伸缩振动,波数670.6为顺式烯烃基的特征伸缩振动.H—NMR谱中61.75(3H,dd,J=9.0,1.1Hz)为H一1的
甲基信号,H一5和H-7的甲基信号分别出现在61.36(3H,d,J =
6.9Hz),0.98(3H,t,J=
7.4Hz),与仲丁基一丙烯基二硫烯
基二硫化物的结构式相符."C—NMR及DEPT谱上出现有顺
式及反式仲丁基.丙烯基二硫化物的两组共14个碳信号.
其中,顺式结构的7个碳中有3个CH,1个CH,,3个CH;反
式结构的7个碳中有3个CH,1个CH,3个CH与仲丁基一
丙烯基二硫化物的分子式cH.S2吻合.
6.2在色谱条件的选择时,重点以各峰的分离度为指标进
行筛选,尤其考察作为参照峰的反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物与顺式仲丁基一1.丙烯基二硫化物的分离度:每分钟升温4℃的条件得到该分离度>1.5,符合分离度要求,而进一步
降低升温速度,分离度变化不大,考虑分析时间,最终决定使
用4/min作为升温速度.在程序升温的最后阶段一快速升
温过程,是为了让所有成分在分析时间内出峰,确保指纹图
谱的可靠性.
6.3该色谱条件下阿魏挥发油样品溶液共检出峰37个,根
据《中药注射剂色谱指纹图谱试验研究技术指南(试行)》的
要求.积分条件设定最小峰面积为S(反式一仲丁基一1一丙烯基二硫化物)峰的3%,确定共有峰为17个.
6.4本试验根据10批阿魏挥发油检测结果,选择各批共有
且保留时间和峰面积稳定的17个共有峰标定阿魏挥发油指
纹图谱,具有良好的特征性,重复性和相似性,该方法可靠简
便,可作为阿魏质量控制的参考方法.
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不同品种及产地栀子水溶性成分指纹图谱研究
罗光明,陈岩,张晓云,杨雅琴
(江西中医学院,江西南昌330004)
关键词:栀子;水溶性成分;指纹图谱;质量控制;种质资源
摘要:目的:采用HPLC建立江西栀子药材水溶性成分指纹图谱,并进行不同品种,不同产地化学成分指纹图谱分析.方
法:EclipseXDB.C.柱(4.6mm×250mm,5m,Agilent),流动相为乙腈一0.1%磷酸水,采用梯度洗脱,流速1.0mlM
min.最大吸收波长下检测(环烯醚萜苷类吸收波长在238am,西红花苷类吸收波长在440am).结果:通过对江西省道
地产区12批栀子药材水溶性成分指纹图谱的分析,共检出11个分离度良好的共有峰.结论:本方法可以用于栀子药材
质量控制,还可以作为研究栀子种质资源的有力手段.
中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1001—1528(2008)04-0475-04
收稿日期:2007-03—12
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30460156),国家"十五"科技支撑项目(2006BA106A11-05).
作者简介:罗光明(1958～),男,教授,从事药用植物分类,资源保护和再生及药用植物引种栽培研究,电话*************.
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