食管癌组织中HAAH基因表达及临床意义

食管癌组织中HAAH基因表达及临床意义
王建飞;钟理;陈冬;张小刚;王皓;葛昆;秦向东
【摘要】目的探讨人类天冬氨酸盐β羟化酶(HAAH)基因对食管癌的诊断价值.方法采用半定量RT-PCR法检测23份食管癌组织及其癌旁组织中HAAH基因表达水平,并对实验数据进行统计学分析.结果食管癌及癌旁组织HAAH基因表达率分别为100%(23/23)、78.3%(18/23),P＞0.05.灰度扫描半定量分析,HAAH mRNA 在食管癌组织及癌旁组织中的表达水平值分别为0.688±0.238、0.319±0.157,P＜0.01.经ROC曲线分析,取0.489作为HAAH基因表达水平的阈值时,73.9%(17/23)的癌组织呈现高表达,而癌旁组织中高表达率仅为13%(3/23),P＜0.01.结论 HAAH 基因在食管癌组织中呈高表达;其可作为食管癌诊断的标志物.
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2010(050)019
【总页数】2页(P79-80)
【关键词】天冬氨酸盐β羟化酶基因;食管癌;诊断
【作者】王建飞;钟理;陈冬;张小刚;王皓;葛昆;秦向东
【作者单位】河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002;河北大学,河北保定,071002
【正文语种】中文
【中图分类】R735.1
研究发现,人类天冬氨酸盐β羟化酶(HAAH)是一种具有 prolyl和 lysyl羟化酶作用的依赖α酮基的双加氧酶,在许多人类肿瘤组织及细胞系中均呈过表达现象,但在食管癌中该基因表达水平的研究鲜有报道。

2008年 3月～2009年 3月,我们采用半定量 RT-PCR技术观察了HAAH基因在食管癌组织及癌旁组织中的表达情况,探讨其诊断食管癌的价值。

1 材料与方法
1.1 材料选择河北大学附属医院胸外科手术切除的食管癌新鲜标本 23份,其中男16例,女 7例；年龄 43～77岁,平均 60岁。

术前均未进行化疗、放疗。

每例样本取癌旁组织(距离癌组织 3～5 cm),标本获取后立即置于 RNA Later试剂中,-20℃保存备用。

1.2 方法
1.2.1 HAAH mRNA检测采用半定量 RT-PCR。

按 Trizol说明书进行总 RNA提取,用 Oligo(dt)15及反转录酶 M-MLV进行 cDNA的合成。

所有的样本均按照同样的步骤操作。

PCR反应体系为25μl,其中包含:cDNA模板1μl,上下游引物各
1μl,Taq DNA聚合酶 1 U。

PCR程序:94℃预变性 5 min；PCR扩增:94℃变性 1 min,61℃退火1 min,72℃延伸 1.5 min,共 30个循环；最后72℃终末延伸 10 min。

PCR引物如下:目的HAAH:5′-ATCTGTCTGGCAACGCTCA-3′,5′-ACATCGAATCTTGCAGCCT-3′,扩增长度 442 bp；内参GAPDH:5′-GTTGGAGGTCGGAGTCAACGGA-3′,5′-GAGGGATCTCGCTCCTGGAGGA-3′,扩增长度 240 bp。

PCR产物用 2%琼脂糖凝胶进行电泳检测,利用 Quantity one软件进行图像扫描及灰度值分析。

将目的基因与 GAPDH的比值作为其相对表达量,进行定量分析。

绘制 ROC曲线,确定 HAAH基因表达水平的阈值。

1.2.2 统计学方法采用 SPSS 16.0统计软件。

所得数据以±s表示。

根据样本资料
类型,基因表达率进行χ2检验,基因平均表达水平进行独立样本t检验。

检验水准α=0.05。

2 结果
食管癌及癌旁组织 HAAH基因表达率分为100%(23/23)、78.3%(18/23),P＞0.05。

HAAH mRNA在食管癌组织及癌旁组织中的表达水平分别为
0.688±0.238、0.319±0.157,P＜0.01。

经 ROC曲线分析,取 0.489作为 HAAH 基因表达水平的阈值时,HAAH基因在癌组织中的高表达率为 73.9%(17/23),而在癌旁组织中仅为 13%(3/23),P＜0.01。

3 讨论
HAAH基因位于人类染色体 8q12.1,其开放阅读框共有 2 277个碱基,编码产物为一包含 758个氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白,也称为 BAH。

近年研究报道,HAAH基因在多种人类恶性肿瘤组织及细胞系中均呈高表达现象,其中包括肝癌、胆管癌、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌等,而在相应的正常组织中低表达或不表达。

HAAH的这种过表达与细胞恶性转化[1],移动性增强[2],肿瘤的浸润性增长[3]以及癌症预后不良[4]等密切相关。

本研究发现,HAAH基因表达水平在食管癌组织中显著高于癌旁组织,高表达率为73.9%。

HAAH高表达能促进肿瘤的浸润性增长,而食管癌又是一种浸润性很强的恶性肿瘤,因此我们推测,HAAH高表达可促进食管癌的发展。

HAAH基因的表达产物是一种跨膜蛋白,符合免疫治疗靶点的基本要求。

体外实验证实利用反义寡核苷酸可以明显抑制 HAAH在癌症中的高表达及肿瘤细胞的移动性[5],本研究发现该基因在食管癌旁组织中低表达或不表达。

分析上述,HAAH有可能成为食管癌免疫治疗的一个新靶点。

参考文献:
【相关文献】
[1]Ince N,de la Monte S,Wands JR.Overexpression of human aspartyl(asparaginyl)beta-hydroxylase is associated with malignant transformation[J].Cancer Res,2000,60(5):1261-1266.
[2]Sepe PS,Lahousse SA,Gemelli B,et al.Role of the aspartyl-asparaginyl-beta hydroxylase gene in neuroblastoma cell motility[J].Lab Invest,2002,82(7):881-891.
[3]de la Monte SM,Tamaki S,Cantarini MC,et al.Aspartyl-(asparaginyl)-β-hydroxylase regulates hepatocellular carcinoma invasiveness[J].J Hepatol,2006,44(5):971-983.
[4]Luu M,Sabo E,de la Monte SM,et al.Prognostic valueof aspartyl(asparaginyl)-beta-hydroxylase/humbug expression in non-small cell lung carcinoma[J].Hum
Pathol,2009,40(5):639-644.
[5]Maeda T,Sepe P,Lahousse S,et al.Antisense oligodeoxynucleotides directed against aspartyl(asparaginyl)beta-hydroxylase suppress migration of cholangiocarcinoma cells[J].J Hepatol,2003,389(5):615-622.。