实验二 抗体制备和凝集反应 (2)沉淀反应
10版医学免疫学教学大纲(临床本科)
《医学免疫学》教学大纲课程编号：07100016学时：32（其中理论20学时，实验12学时）学分：1.5课程类别：专业必修课面向对象：临床医学专业本科学生课程英文名称：Medical immunology一、课程的任务和目的任务：使学生掌握本课程的基本理论、基本知识和基本技能，为学习其他基础医学和临床医学课程打下基础。
目的：医学免疫学是重要的基础医学课程之一。
本课程的内容有理论和实验两部分组成。
通过理论课的教学，使学生能掌握机体免疫系统的组成及其功能，熟悉免疫应答的基本过程，了解病理性免疫应答的发病机制及免疫学防治，为学习其他医学基础课和临床课奠定基础。
通过本课程的实验教学，使学生掌握常见的免疫学诊断方法及其原理，熟悉免疫学诊断的基本方法和基本技能，了解其临床应用。
二、课程教学内容与要求（一）免疫学概论1．目的要求掌握：免疫的基本概念及基本功能。
熟悉：免疫应答的类型与作用特点。
了解：免疫学的基本内容及免疫学在医学中的地位及前景。
2．教学内容（1）免疫的基本概念及基本功能。
（2）免疫应答的类型与作用特点。
（3）免疫学发展简史及在医学中的地位和前景。
3．难点：理解免疫功能的双重性。
（二）免疫组织和器官1．目的要求掌握：免疫器官的组成。
熟悉：免疫组织和器官的结构与功能。
了解：淋巴细胞的归巢与再循环。
2．教学内容（1）中枢免疫器官：骨髓、胸腺及其功能。
（2）外周免疫器官：淋巴结、脾的结构及其功能；黏膜免疫系统的组成与功能。
（3）淋巴细胞的归巢与再循环的基本概念和生物学意义。
（三）抗原1．目的要求掌握：抗原的概念和特性；抗原的异物性与特异性。
熟悉：影响抗原免疫原性的因素；抗原的种类。
了解：超抗原、佐剂、丝裂原的基本概念。
2．教学内容（1）抗原的概念和特性。
（2）抗原的异物性。
（3）抗原免疫原性的决定因素：抗原的理化性质、宿主因素和免疫方法。
（4）抗原的特异性：抗原决定基的概念与分类；共同抗原与交叉反应。
（5）抗原的种类：胸腺依赖性抗原与胸腺非依赖性抗原；异嗜性抗原、异种抗原、同种异型抗原、自身抗原；内源性抗原与外源性抗原。
沉淀反应
二、 絮状沉淀试验
絮状沉淀试验：是将抗原与相应抗体混合， 在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉 眼可见的絮状沉淀物。 方法评价：敏感度较低、简便、受抗原抗体 比例的影响非常明显 应用：性病研究实验室试验（VDRL）、USR、 RPR，本实验只能作为定性或半定量实验方法。
絮 Ag
1:2
状
沉淀线靠近谁浓度则小，沉淀弧趋向谁分子量则大
1表示待检Ag 2表示标准Ag 两条沉淀线互相吻合相连，表明两个抗 原完全相同。 两条沉淀线呈部分相切，表明两个抗
原之间有部分相同。
两条沉淀线交叉而过，表明两个抗原 完全不同。 待检Ag与标准Ag性质相同；但含量较 低；
1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。
＋
－
对流免疫电泳
• 优点及应用 • 电场限制了抗原抗体运动方向，加速了 反应速度，使反应时间大大缩短了，灵 敏度显著提高了，本法主要用于一些病 原微生物及其他蛋白质抗原的检测。
二、火箭免疫电泳
rocket immnoelectrophoresis，RIE
1、原理
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术 电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的抗原 向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动 的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的 沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性 复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗 原量呈正相关。
体量固定，所测吸光度与复合物的量成正比，与
待测抗原量成正比。用已知浓度的抗原标准品建 立标准曲线，根据待测样品的吸光度可得出抗原
的含量。
2、方法：
1) 稀释检测标本和标准抗原（5个浓度） 2) 将稀释标本和标准抗原与适当过量的抗血清混 合反应 3) 在340nm处测各管吸光度（IC：35~100nm，选择 范围：290~410nm）
生物技术制药 第二版 课后思考题及答案(全)
1. 生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1）应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂。
（2）基因药物，如基因治疗剂，基因疫苗，反义药物和核酶等（3）来自动物、植物和微生物的天然生物药物（4）合成与部分合成的生物药物2．生物技术制药具有什么特征？（1）分子结构复杂（2）具有种属特异性（3）治疗针对性强，疗效高（4）稳定性差（5）基因稳定性（6）免疫原性（7）体内的半衰期短（8）受体效应（9）多效性（10）检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用？应用主要有：（1）基因工程制药：包括基因工程药物品种的开发，基因工程疫苗，基因工程抗体，基因诊断与基因治疗，应用基因工程技术建立新药的筛选模型，应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物，基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用，利用转基因动植物生产蛋白质类药物（2）细胞工程制药：包括单克隆抗体，动物细胞培养，植物细胞培养生产次生代谢产物（3）酶工程制药（4）发酵工程制药4.基因工程药物制造的主要程序有哪些？基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造DNA重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验5.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢付荷（5）工程菌的培养条件6.质粒不稳定分为哪两类，如何解决质粒不稳定性？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。
质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。
提高质粒稳定性的方法如下：（1）选择合适的宿主细菌2）选择合适的载体（3）选择压力（4）分阶段控制培养（5）控制培养条件（6）固定化7.影响基因工程菌发酵的因素有哪些？如何控制发酵的各种参数？影响因素：（1）培养基（2）接种量（3）温度（4）溶解氧（5）诱导时机的影响（6）诱导表达程序（7） PH值8.什么是高密度发酵？影响高密度发酵的因素有哪些？可采取哪些方法来实现高密度发酵？高密度发酵：是指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上，理论上的最高值可达200gDCW/L 影响因素：（1）培养基（2）溶氧浓度（3）PH (4)温度（5）代谢副产物实现高密度发酵的方法：（1）改进发酵条件：a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力（2）构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌：a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因（3）构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。
免疫学实验整理
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
凝集反应和沉淀反应
自身红细胞凝集试验
RBC为未经致敏 的受检者新鲜红 细胞，试剂：抗 人O型红细胞的 单克隆抗体
临床应用： HIV检测 HBV检测
22
四、胶乳凝集试验
致 敏 于 胶 乳 颗 粒
23
24
五、明胶凝集试验
将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明 胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用 时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉 眼可见的粉红色凝集
抗体球蛋白
带负电荷较少，籍 ＋
电渗作用向负极泳
动
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对流免疫电泳
结果分析： ✓ 无沉淀线出现则表明无相
应的抗原。 ✓ 沉淀线位于抗原抗体孔中
间，说明两者比例较适合 。 ✓ 沉淀线偏向抗原孔一方， 表示抗体浓度＞抗原，反 之，则是抗体浓度＜抗原 浓度。
44
二、火箭免疫电泳
+
Ab
-
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术 注：只能测定ug/ml以上的含量
反应特点：
IgM 的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗 体
5
可见反应形成
6
第二节 直接凝集反应和间接凝集反应
一、直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用
下，出现肉眼可见的凝集现象
常用的凝集试验有玻片法和试管法
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第三节 抗球蛋白参与的血凝试验
抗球蛋白试验是 抗球蛋白参与的 间接血凝试验， 又称Coombs试验
直接Coombs试验 间接Coombs试验
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（一）直接Coombs试验
抗球蛋白抗体
全血操作
检测红细胞上不完全抗体
应用：检测新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自
单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义？
单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义？哈哈~我们刚考到这题原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的.将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术.1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c 小鼠.免疫的方法取决于所用抗原的性质.免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法.2）骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG 的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）.骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养,融合前24h换液一次,使骨髓瘤细胞处于对数生长期.3）细胞融合的关键:1技术上的误差常常导致融合的失败.例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答.这必然要失败的.2融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个干净的环境,以及适宜的无菌操作技术.4）阳性克隆的筛选应尽早进行.通常在融合后10天作第一次检测,过早容易出现假阳性.检测方法应灵敏、准确、而且简便快速.具体应用的方法应根据抗原的性质,以及所需单克隆抗体的功能进行选择.常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等.其中ELISA法最简便,RIA法最准确.阳性克隆的筛选应进行多次,均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增.5）克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体.克隆化应尽早进行并反复筛选.这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的,有丢失染色体的倾向.反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株.克隆化的方法很多,而最常用的是有限稀释法.（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞,然后进行单细胞培养.这种方法操作复杂,效率低,故不常用.（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后,按每孔1个细胞接种在培养皿中,细胞增值后成为单克隆细胞系.第一次克隆化时加一定量的饲养细胞.由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化,所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成.应该注意的是,每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存,以便重复检查,避免丢失有意义的细胞.（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度,然后与琼脂混悬.在琼脂中的细胞不能自由移动,彼此互不相混,从而达到单细胞培养的目的.但此法不如有限稀释法好.（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞,然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞,并进行单细胞培养.6）细胞的冻存与复苏7）大规模单克隆抗体的制备选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备,因为融合细胞随培养时间延长,发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加.抗体制备有两种方法.一是增量培养法,即将杂交瘤细胞在体外培养,在培养液中分离单克隆抗体.该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化.最普遍采用的是小鼠腹腔接种法.选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去.通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集5～10ml的腹水,有时甚至超过40ml.该法制备的腹水抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平.此外,腹水中的杂蛋白也较少,便于抗体的纯化.意义：用于以下各种生命科学实验并具有医用价值（1）沉淀反应：Precipitation reaction（2）凝集实验：haemaglutination（3）放射免疫学方法检测免疫复合物（4）流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离. （5）ELISA 等免疫学检测（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .(7) 免疫印记（western blotting)（8）免疫沉淀：（9）亲和层析：分离蛋白质（10）磁珠分离细胞（11）临床疾病的诊断和治疗；。
实验二沉淀反应
沉淀反应
一、实验内容
1.双向琼脂扩散试验(小组做)
2.单向琼脂扩散试验(示教) 3.免疫电泳(示教) 4.火箭电泳(示教) 5.尿液HCG检测(胶体金免疫法 ) (小组操作) 6.录像：免疫反击战
免疫标记技术
沉淀反应
二、目的与要求
1.掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果
分析及应用。
2.熟悉免疫电泳基本原理及应用。
用途：抗原或抗体的检测，定性或可粗略定量。
缺点：需时长，灵敏度不高。
3.单向琼脂扩散试验（示教）
Ag稀释度
1 :80 1 :40
1 :20
1 :10
用途：已知抗体测抗原，定量实验； 缺点：耗时长。
4.免疫电泳（示教）
1
2
先Ag电泳，后扩散。
注意：1、2孔为Ag样本孔。
免疫电泳的用途：
A.用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断；
B.用于抗原纯度的定性分析。
5.火箭电泳（示教）
火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场 用途：已知抗体测抗原，定量实验；
优点：耗时短，反应敏感性好。
四、操作内容
1.甲胎蛋白(AFP)的检测（小组操作）
（1）材料：
A.待测Ag： AFP可疑血清； B.阳性对照：AFP阳性血清； C.阴性对照：生理盐水（NS）
早早孕HCG胶体金试纸,采用了双抗体夹心 法的检测模式。
HCG金标试纸
带条中含有均匀分布的胶 体金标记的鼠抗人HCG单抗 1.鼠抗人HCG单抗 (固定的检测线) 2.羊抗鼠IgG(固定的质控线)
标志线
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG结合形成免疫复合物； 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人 HCG 单抗 (IgG) 随着尿液上行 , 到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
免疫学凝集反应实验报告
免疫学凝集反应实验报告一、实验目的本实验旨在通过免疫学凝集反应实验，了解抗原-抗体反应的基本原理，掌握凝集反应的方法和技巧。
二、实验原理1. 抗原-抗体反应抗原是指能够诱导机体产生特异性免疫反应的物质，通常是蛋白质、多糖或脂质等大分子化合物。
当抗原进入机体后，会刺激机体产生相应的抗体，抗体与抗原结合形成复合物，从而发挥免疫作用。
2. 凝集反应凝集反应是指在特定条件下，由于抗原与抗体结合形成可见的凝集现象。
这种现象可以用于检测血清中是否存在某种特定的抗体或抗原。
三、实验步骤1. 制备试剂将所需试剂按比例配制好，并进行必要的消毒处理。
2. 样品处理将待测样品进行必要的处理，如离心、稀释等。
3. 加入试剂将样品加入已经配制好的试剂中，并混匀。
4. 观察结果观察混合液是否出现凝集现象，并记录结果。
四、实验注意事项1. 实验过程中应严格按照操作规程进行，避免操作失误。
2. 试剂的配制和消毒处理应注意卫生和安全。
3. 样品处理时应注意离心速度和时间，避免对样品造成损伤。
4. 操作时应注意洁净卫生，避免污染试剂和样品。
五、实验结果分析通过本次实验，我们成功地观察到了抗原-抗体反应产生的凝集现象。
根据观察结果，我们可以判断待测样品中是否存在特定的抗体或抗原。
此外，在实验过程中我们也掌握了凝集反应的方法和技巧，并了解了抗原-抗体反应的基本原理。
六、实验结论通过本次免疫学凝集反应实验，我们深入了解了抗原-抗体反应的基本原理，并掌握了凝集反应的方法和技巧。
这对于我们今后在医学、生物学等领域开展相关研究具有重要意义。
血液凝集实验报告
血液凝集实验报告篇一：直接凝集反应实验报告免疫学·直接凝集反应实验报告实验一：玻片凝集实验1.实验原理：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。
凝集反应的方法有两种：①直接法；②间接法。
颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。
如玻片凝集反应和试管凝集反应。
将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。
如RF因子检测玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。
此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。
本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类aBo血型的鉴定。
aBo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。
人类aBo血型抗原有两种：a抗原和B抗原。
a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗B抗体；B型血红细胞表面具有B型抗原，血液中具有抗a抗体；aB型血红细胞表面具有a抗原和B抗原，血液中不具有抗a、B抗体；o型血红细胞表面不具有a、B抗体，但血液中含有抗a、B抗体。
若用已知的抗a血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。
2.实验方法：（1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、B分区。
（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在B区内滴加抗B血清一滴。
（3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。
（4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗B血清中搅拌均匀。
（5）用无菌棉棒压迫手指止血。
（6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。
3.实验结果：4.结果分析：实验二：试管凝集实验1.实验原理：试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。
免疫学实验——精选推荐
免疫学实验实验⼀凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成⾁眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥⽽呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发⽣特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分⼦间的静电排斥⼒，此时已有凝集的趋向，在电解质（如⽣理盐⽔）参与下，由于离⼦的作⽤，中和了抗原抗体复合物外⾯的⼤部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥⼒，分⼦间相互吸引，凝集成⼤的絮⽚或颗粒，出现了⾁眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进⾏定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两⼤类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[⽬的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作⽅法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻⽚，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），⽛签或⽕柴棒，记号笔。
2. 灭菌的⽣理盐⽔，灭菌的0.5%⽯炭酸⽣理盐⽔。
3. 布⽒杆菌病试管凝集抗原，布⽒杆菌病平板凝集抗原，布⽒杆菌病虎红平板凝集抗原，布⽒杆菌病阳性⾎清，布⽒杆菌病阴性⾎清，被检⾎清（⽜、⽺或猪）。
4. 鸡⽩痢平板凝集抗原，鸡⽩痢阳性⾎清，鸡⽩痢阴性⾎清，被检鸡⾎清。
[实验内容及操作⽅法]（⼀）试管凝集试验以⽜布⽒杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份⾎清⽤试管4⽀，另取3⽀试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检⾎清有多份，对照只需做1份。
2. 被检⾎清稀释：第1管加⼊2.3ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔，第2、3、4管加⼊0.5 ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔；然后⽤加样器或刻度吸管吸取被检⾎清0.2 ml，加⼊第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加⼊第2管中，混匀后吸取0.5 ml加⼊第3管，依此类推⾄第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
实验2 凝集反应-ELISA(双抗原夹心法)
4
ABO血型鉴定步骤
红细胞悬液的制备（用于血型鉴定及ELISA实验） 1. 取EP管1支，加入5滴生理盐水 2. 消毒耳垂或手指皮肤 3. 用采血针采1-2滴血，加入盛有生理盐水的EP管中混匀 4. 2000rpm，离心3min
取上清用于ELISA实验
5. 取红细胞悬液用于ABO血型鉴定 6. 取已加有抗A血清与抗B血清载玻 片 1张，分别加入待测抗原各 1 滴， 并用牙签混匀。 7. 置室温5 分钟左右观察结果。
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ABO血型鉴定的判断
抗A型标准血清 抗B型标准血清 抗A型标准血清 抗B型标准血清
B 型 A 型
示 意 图
抗A型标准血清 抗B型标准血清 抗A型标准血清 抗B型标准血清
O 型
AB 型
注意事项
用牙签研磨时，注意防止将抗A血清带到抗 B血清中，反之亦然。
如果凝集现象不太明显时，可用显微镜观察。
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实验报告
玻片凝集反应-ABO血型鉴定
酶联免疫吸附试验（双抗原夹心ELISA）
免 疫 学 实 验 课
贵阳医学院免疫学教研室
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实验内容
1、ABO血型鉴定--玻片凝集反应（1份/1人） 2、乙型肝炎病毒表面抗体检测--ELISA法(1份/1人）
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（一）玻片凝集反应
已知抗血清与未知颗粒性抗原置于 清洁玻片上，在一定的条件下，若两者 相对应，则会发生凝集。本方法主要用 于抗原的定性分析，如菌种鉴定、ABO 血型鉴定等。
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乙型肝炎病毒表面抗体的检测 ——双抗原夹心ELISA法
测定原理 采用纯化乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg） 包被反应板，加入待检标本，当标本中存在抗HBs时，该抗体与包被HBsAg结合，再加入辣根 过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原 （ HBsAg –HRP），最后形成HBsAg-抗HBs-酶 标记抗原复合物，加入底物产生显色反应。
实验二凝集沉淀反应
材料：
待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）、 生理盐水、琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、酒精灯。
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双向扩散法测血清中AFP操作步骤
1、制备琼脂板：
1%盐水琼脂加热溶化，取5ml均匀铺与载玻片上。
2、打孔：
琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。
3、封底：
用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
应用:
检测 AFP 、HBsAg, 协助疾病诊断.
.
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双向琼脂扩散法测血清中AFP
甲胎蛋白（AFP）：
是一种在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成的α球蛋白， 存在于胎儿血清中，出生后血清中AFP几乎消失。正常 成人血清中仅含极微量的AFP，经典的免疫学方法检测 不出。
当肝细胞发生癌变时，AFP含量增高，测血清中AFP， 可协助诊断原发性肝癌。
本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度 约为10～20μg／ml.
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
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单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
.
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（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
原理:
将可溶性抗原与相应抗体两种溶液置于琼脂糖凝胶的不 同位置，使两者在凝胶中各自向四周扩散,抗原与抗体相遇并 在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。
伤寒血清 ＋
待测菌液
阴性
.
？
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直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
免疫凝集反应实验报告
免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应是一种常用的实验方法，用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。
通过观察凝集反应的形成与否，可以判断样品中是否存在目标物质，从而进行疾病的诊断和治疗。
在本次实验中，我们选择了血清中的抗体作为检测目标。
首先，我们需要制备一系列稀释的抗原溶液，以便与待测抗体发生反应。
这些抗原溶液可以是细菌、病毒、细胞膜蛋白等。
在实验中，我们选择了一种常见的病原体，即流感病毒。
接下来，我们需要将待测抗体与抗原溶液混合。
在混合过程中，抗体与抗原之间会发生特异性结合，形成免疫复合物。
当抗原与抗体的浓度适当时，免疫复合物会发生凝集反应，即形成可见的沉淀物。
为了观察凝集反应的结果，我们采用了显微镜进行观察。
将混合液滴在载玻片上，然后放置在显微镜下进行观察。
如果出现了凝集反应，我们可以看到显微镜下形成的沉淀物。
沉淀物的形状和大小可以提供有关抗原与抗体结合程度的信息。
在实验过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，我们发现凝集反应的程度与抗原与抗体的浓度有关。
当抗原或抗体的浓度过高或过低时，凝集反应的程度都会减弱。
这是因为在过高或过低的浓度下，抗原与抗体的结合机会减少，从而减少了凝集反应的可能性。
其次，我们还观察到了凝集反应的时间和温度对实验结果的影响。
在适宜的温度下，凝集反应的速度会加快，形成的凝集物也更为明显。
然而，过高或过低的温度都会影响凝集反应的进行，甚至完全阻止凝集的形成。
因此，在进行免疫凝集反应实验时，选择适宜的温度非常重要。
最后，我们还进行了一些控制实验，以确保实验结果的准确性。
例如，我们在反应中添加了阴性对照组，即不含抗原的溶液。
通过与阴性对照组进行比较，我们可以排除非特异性凝集的可能性。
此外，我们还进行了阳性对照实验，即添加已知含有抗原的溶液。
阳性对照实验的结果可以验证我们实验的可靠性和准确性。
总结起来，免疫凝集反应是一种简单而有效的实验方法，用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。
工作报告之对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告【篇一：实验十一免疫电泳】免疫电泳技术抗原与抗体的结合在沉淀反应中，呈一定的分子比例。
不同抗原和抗体之间的分子比例是不同的，但只有在分子比例合适时，才出现可见的沉淀。
所以沉淀能否出现并不完全反映抗原和抗体是否存在和发生结合。
抗原结合多个抗体分子，称抗原为多价；抗体一般只能结合两个抗原分子（igm类抗体分子通常可以结合5个抗原分子）的抗原决定法簇，故为二价。
只有在彼此的结合价饱和时，才出现大量的抗原-抗体复合物沉淀。
当抗原与抗体的比例合适时，即二者结合价彼此饱和，就可形成网状结构的大分子抗原-抗体复合物沉淀，称为等价带。
若比例不合适时，抗体或抗原过量，则虽有抗原、抗体的结合，但不能大量形成网状结构的大分子复合物，沉淀量很少，甚至不出现沉淀。
在抗原、抗体数量关系曲线中，抗体过剩区域称为抗体过剩带，抗原过剩区域称为抗原过剩带。
如图1所示，在等价带的反应液中加入过量的抗原或抗体，沉淀复合物就会有部分溶解，甚至全部溶解的现象。
这是由于新加入的抗原或抗体竞争地结合相应的抗体或抗原，使网状大分子结构破坏，形成小分子复合物，致使沉淀出现溶解，沉淀量减少甚至完全消失。
在沉淀反应中，由于抗原过量而不出现沉淀的现象，称为前带现象。
此时不能误认为无沉淀就是无抗原存在，为了检测就必须稀释抗原。
抗体过量时，称为后带现象，同理需要稀释抗体进行检测。
图1的位置抗原与抗体的结合是依赖于两者分子结构的互补性，故其特异性高。
这种结合也是相当稳定的。
在一定条件下（过酸、过碱或浓盐存在下），二者可以分开，即结合是可逆的。
解离后的抗原、抗体的活性一般保持不变。
双向免疫扩散测定法原理双向扩散法(double diffusion)又称琼脂扩散法，是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。
琼脂或琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可以自由通过，这种分子的扩散作用可使分别处于两处的抗原和相应的抗体通过扩散相遇，形成抗原-抗体复合物，比例合适时出现沉淀。
免疫凝集实验
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象，成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌（如细菌、螺旋体等）颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后，在适量电解质存在的条件下，经过一定的反应时间后，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原；抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法：——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内，自加入待检病原体悬液混合均匀，同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果，出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点：其操作简便、迅速，适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验：（1）实验目的：该试验用于菌种的鉴定及分型.（2）实验材料：待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清（3）实验过程:1.取洁净玻片一张，用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀，随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀，然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果：已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集，若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集，表明两种菌为同一种或属。
2、试管法：——肥达试验（试管凝集实验）将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合，39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照，应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验，常用于某病原微生物感染的免疫学诊断，亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
（1）材料：病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
血库实验指导
广州华兴康复医院医院血库实验指导实验一ABO血型鉴定一、正定型法【目的】通过用标准血型抗体鉴定红细胞膜上ABO血型系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型系统正定型的基本操作方法和结果判断。
【原理】根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。
【器材】小试管、尖滴管、载玻片（或有凹槽的玻璃板）或白瓷板、离心机、记号笔、蜡笔、显微镜。
【试剂】标准抗A、抗B血清，生理盐水。
【标本】外周血或静脉血。
【操作】5％被检红细胞生理盐水悬液制备：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞2滴于小试管中，加人生理盐水 2 ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2 500r/min离心3min后弃去上清液，重复洗涤3次后自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。
（一）玻片法1．标记玻片或白瓷板取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，做好编号分别标记抗A、抗B。
2．加标准抗血清在玻片或白瓷板已标记的区域内分别滴加抗A,抗B标准抗血清各1滴。
3．加被检红细胞悬液在滴加抗A,抗B标准抗血清的小格中分别加被检者5％红细胞生理盐水悬液各1滴，不断摇动玻片或白瓷板，使血清与红细胞充分混匀，室温放置15～30min。
4．观察结果先轻轻摇动玻片，肉眼观察有无颗粒状凝集及凝集程度，再用低倍镜观察，判定阴性、阳性和阳性程度。
5．判断结果(1)凝集结果判断标准：①凝集判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。
②凝集强弱程度判断标准：有助于A、B亚型，类B抗原的发现，在低倍镜下凝集程度强弱判断标准如下。
1)呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（4+）。