DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)

DNA银染
一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)
1、固定液：50ml乙醇
2、前处理液（敏化液）：5ml HNO3
3、染色液：0.5g 硝酸银（避光配制）
4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml
5、终止液：50ml 冰醋酸
二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）
1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；
2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；
3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；
4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；
5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；
6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；
7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；
8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；
9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；
10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。

三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）
1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA
1、尿素：7.2g
2、30%聚丙酰胺，4.68ml
3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)
4、30%AP，35ul
5、TEMED,4ul
四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳
12h Treatment24h Treatment
M
CT 0 5 10 200 5 10 20
Protein银染
一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)
1、固定液：200ml甲醇，50ml冰醋酸
2、前处理液（敏化液）：150ml 乙醇，34g醋酸钠，1g硫代硫酸钠（使用前加入）
3、染色液：1.25g 硝酸银（避光配制）
4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml
5终止液：2g甘氨酸
二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）
1、凝胶固定：准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动30min；
2、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次1min；
3、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化30min；
4、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗3次每次5min；
5、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；
6、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗2次每次5min；
7、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；
8、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇10min；
9、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次5min。