三七生粉入药灭菌工艺的选择-最新文档

三七生粉入药灭菌工艺的选择
[] Objective To choose the sterilization method for Panax Notoginseng Powder in Chinese medicine preparations.
Methods The influence of different sterilization methods for Panax notoginseng in different physical states to the active ingredient stability was compared，and the dilution effect and the sterilization in the later preparation procedures was considered ，the selected sterilization method for Panax Notoginseng Powder was established ，which was validated in the Chinese medicine preparations of Sanqitongfeng Capsules ，Sanqitongshuan Tablets and Sanqiyishen Granules. Results When the bacteria number of Panax notoginseng decoction pieces was controlled at a certain level and the fluidized bed granulation procedure ( or with capsule filling procedure ，or with tableting procedure ) was contained in the preparation process ，the microbiological examination including aerobic bacterial count ，mold and yeast count ，escherichia coli count and coliform bacteria count could be ensured while Panax Notoginseng Powder was not sterilized alone before mixing
into solid preparations. Conclusion Panax notoginseng powder without sterilization is applied to the Chinese medicine preparations of Sanqitongfeng Capsules ，Sanqitongshuan Tablets and Sanqiyishen Granules ，and the bacteria test could be ensured to comply to relevant standards.
中药三七是五加科植物三七Panax notoginseng （Burk. ）F.H.Chen 的干燥根和根茎，功效散瘀止血，消肿定痛，是应用历史悠久的贵重药材，在临床制剂上常以生药粉直接入药。

《中国药典》只是规定了生药粉入药制剂的微生物学限度，但是没有单独对生药粉的微生物学检查进行规定[1] 附录79-
88 。

有研究考察对比不同的灭菌方法对三七药材中含量的影响[2] ，也有研究考察含三七生粉制剂的灭菌方法[3] ，本研究对比了不同灭菌方法对三七的性状和含量的影响，提出“只要控制固体制剂生产条件和饮片微生物含量，入药的三七生粉在制剂前（包含流化床制粒工艺）可以不用单独灭菌”的理念，并在以三七痛风胶囊、三七通栓片和三七益肾颗粒3 个制剂中进行了验证[4-5] ，证明了制剂中三七生药粉不灭菌直接入药的微生物学可行性。

1仪器与试药
1.1仪器
1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技XX公司），
XS10 型分析天平（0.1 mg ，梅特勒-托利多分析仪器XX公司），LD-Y1000A药材粉碎机（上海顶帅电器XX公司）。

LMQ.J型立式灭菌器（山东新华医疗器械XX公司），MJ-150-I
型霉菌培养箱（上海浦东荣丰科学仪器XX公司），DHG-9240A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器XX公司），100 级超净台，高压消毒锅。

HWS26型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器XX公司）；恒温电热套（巩义市宇华仪器XX公司），FL-5 和FL-60 型沸腾制粒机（上海华发制药机械成套发展公司），ZPS8型旋转压片机（上海天祥健台制药机械XX公司）。

1.2 试药三七药材（批号：101210，产地：云南），三七饮片6 批（批号：101229、111207、130110、131122、140403和140825，产地：云南），均购自上海康桥中药饮片XX公司；人参皂苷Rg1 对照品（批号：110703-200322 ），人参皂苷Rb1（批号：110704-200318）；三七皂苷R1（批号：110745-200617 ），均购自中国食品药品检定研究院；三七痛风胶囊（批号：110615、110616 和110617），三七通栓片（批号：130520、130712和140529），三七益肾颗粒（批号：141026、141027 和141028），均为实验室自制。

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉：菌株均由上海中药制药技术XX公司保存；4- 甲基
伞形酮葡萄糖苷蛋白胨培养基、氯化钠- 蛋白胨缓冲液、胆酸乳盐培养基、营养琼脂、玫瑰红钠琼脂：均由上海盛思生化科技
XX公司提供。

2方法与结果
2.1微生物检验
按照《中国药典》中微生物限度检查法，分别以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5 种菌株进行方法学验证[1] 附录79-88 。

结果表明实验组和对照组的菌回收率均大于85%，符合方法验证规定。

取供试品10 g，加pH值7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 mL，混匀，作为1∶10 的供试液，进行微生物检查。

检查项目包括细菌总数、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群，其中细菌总数、霉菌和酵母菌按照平皿法检查，大肠埃希菌和大肠菌群按照常规法检查。

2.2含量测定按《中国药典》的方法，对三七药材、三七饮片和三七生粉中三七皂苷类成分含量进行检测[1]11-12 。

2.2.1色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈（A）和水（B）为流动相，梯度洗脱（A 的比例：0～12 min，19%；12～60 min，19%～36%），检测波长为203 nm，流速1.0 mL/min ；柱温：25℃。

对照品、供试品为各进样10 μL。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1 对照品、三七皂苷R1适量，以甲醇制成浓度分别为0.4 、0.4 、0.1 mg/mL 的对照品溶液。

2.2.3供试品的制备取三七粉末约0.5 g ，精密称定，加入甲醇50 mL，称重，放置过夜，置80 ℃水浴锅保持微沸2 h，
放冷，称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品。

2.3灭菌方式的考察
三七从药材到饮片，再到粉碎、过筛成生粉，然后混合入药，经过较长的处理流程，如果针对三七进行灭菌，则灭菌步骤的选择可以在粉碎前和粉碎后。

2.3.1粉碎后灭菌将三七饮片（批号：101229）粉碎成60 目后，分别考察湿热灭菌、干热灭菌两种灭菌方式对生粉中皂苷类指标成分的影响，实验中，第一组采用湿热灭菌，选择相对时间较短的条件，即121℃下15 min，灭菌后的三七药粉具有较大的湿度，又采用60℃真空干燥2 h 后测定；第二组选择干热灭菌中时间较短温度较高的条件，灭菌后的药粉呈现焦炭状；第三
组为干热灭菌中温度和时间均相对较低的条件，灭菌后药粉有部分碳化现象。

各灭菌条件下三七中指标性皂苷成分均有较大幅度的损失，其中湿热灭菌损失37.7%，250℃干热灭菌下全部损失，160℃干热灭菌损失也达48.2%，可见三七中的皂苷成分对热较为敏
感，常规的干热和湿热灭菌方案会对其活性成分造成大量的损失，故不适合作为三七生药粉的灭菌工艺。

见表1。

2.3.2粉碎前灭菌三七药材的药用部位是三七植物的根和根茎，木质部质地坚硬密实，微生物难以滋生且一般难以被污染，所以三七的微生物主要分布在药材或饮片的表面。

虽然生药粉不适合采用常规灭菌方式，但是有必要考察粉碎前针对药材或饮片的灭菌工艺。

结合上一阶段的考察结果，选择对皂苷含量影响最小的湿热灭菌法（121℃，15 min），对三七药材（批号：101210）和饮片（批号分别为：101229、111207、130110、131122、140403 和140825）进行灭菌操作后，60℃真空干燥2 h，粉碎，测定药材含量，验证灭菌对指标性皂苷成分含量的影响。

湿热灭菌法结果表明，针对三七药材灭菌后活性成分下降11.3%，而针对饮片灭菌后活性成分下降17.7 ～25.1%之间。

三七在药材状态下灭菌对含量影响最小，而在饮片状态下灭菌对含量有较大影响。

而现在中药制剂一般采用饮片投料，所以此结果无实际指导价值。

见表2。

2.4不单独灭菌可行性的探讨用所考查的几种方法单独对三七进行灭菌不可实现，结合后续的制剂工艺，考察不对三七进行单独灭菌工艺的可行性。

在中试无菌环境中，进行三七药材（批号：101210）、三七饮片（批号：101229）的粉碎，然后按照三七痛风胶囊的制剂工艺进行制剂（以红花等4 味药水提干浸膏粉、三七生粉及适量糊精为底料，以生延胡索、大黄的醇提浓缩液喷入，流化床沸腾制粒），制得沸腾颗粒，灌装胶囊。

分别测定其微生物学指标。

经过洗净、干燥、切片后的三七饮片所含微生物已大大减少，
且通过稀释及制剂过程，微生物进一步降低，由饮片所制成的制剂已经符合中国药典中微生物的相关要求。

故考虑选择三七饮片，在洁净条件下进行粉碎处理，最终可以满足制剂微生物的要求。

见表3。

2.5工艺验证和稳定性试验
针对三七痛风胶囊、三七通栓片和三七益肾颗粒3 个复方制剂，采用以上的三七灭菌工艺方案，各制备3 批中试样品，并进行相关的微生物检验，最终制剂均符合微生物学标准，结果见表4。

在随后的加速考察6 个月和室温放置稳定性试验中，3 个复方制剂的各批号样品的微生物学指标也均符合相关要求。

以上实验证明了本实验所涉及的三七药材灭菌思路在中药固体制剂中的可行性。

3讨论中药制剂灭菌方式有多种，包括干热灭菌、湿热灭菌、辐照灭菌、环氧乙烷法、臭氧法、微波干燥灭菌等，但是不同方法有不同的优缺点[6-11] 。

实际生产中，需要根据目标药材和制剂的物性、稳定性和制剂特点选择合适的灭菌方式，既要达到灭菌的要求又不能对药材中的活性成分产生较大的破坏[12] 。

生药粉的灭菌是比较困难的工作，一种方式可选择对粉碎前的药材或饮片进行灭菌，保证得到符合要求的灭菌药材或饮片，
再选择于洁净区内进行粉碎，这样可得到符合要求的灭菌药粉；另一种方式是先对药材进行粉碎，然后对得到的生药粉采用适当的方式灭菌，达到最终的要求。

无论选择哪种灭菌方式，均应以不改变药粉和最终制剂的质量为原则[13] 。

生产实践中，关于三七灭菌工艺最早见于方茂水等的研究[14] ，通过对比干热法、紫外线照射法和热压蒸汽法3 种灭菌方式，发现热压蒸汽法效果最好。

陈晓平等[2] 对比了不同灭菌方式后三七药粉的质量，发现流通蒸汽灭菌法在灭菌效果好的同时还能保证三七药粉的质量不变。

也有研究指出[15-19] ，高压蒸汽灭菌法会破坏三七皂苷R1等皂苷成分，应采用辐照等其他灭菌方法。

本研究也证实，干热灭菌法和湿热灭菌法均会造成三七药材、饮片和生药粉中指标性皂苷成分含量的下降。

本研究尝试了一些灭菌手段，主要是用于探索三七生药粉在固体制剂中制剂前的单独灭菌的可行性和必要性，虽然未能尝试所有灭菌手段，但是通过对研究结果的逐步分析获得启发，尝试并验证了在包含流化床制粒工艺的制剂中三七生药粉不单独灭菌的可行性。

与其他三七生粉入药的制剂相比[2-3 ，14] ，本实验所用的三七饮片的微生物数量较低。

可能是随着近年来中药饮片加工企业执行GMP生产的规范程度大幅度提升，在炮制、加工、储存和运输等环节严格限制了药材和饮片中的微生物数量的增长。

根据相关炮制规范的规定[20] ，三七饮片的制作需经过药材洗净、润透、切片、干燥等步骤，针对三七药材木质部质地
坚硬密实、微生物难以在内部滋生的特点，主要分布于药材表面的微生物在炮制过程中已经被大部分清除。

王丽萍等[7] 认为中药饮片经灭菌后其微生物限度指标只有低于（不能超过）《中国药典》所规定的相应制剂标准，才能保证最终所生产的相应制剂微生物限度合格。

笔者认为其观点未能考虑到中药饮片在制剂过程中的稀释效应。

本实验也验证了三七饮片的微生物数目会在制剂过程中被稀释，而且一些特定的制剂步骤（如流化床制粒、包衣等）也会有杀灭微生物的效果。

只要确保饮片的微生物数目在一定范围内（具体要根据三七生药粉的用量和在处方中的用药比例），粉碎环境保证在车间的洁净区，就能在生粉不单独灭菌的情况下保证最终制剂的微生物检查符合要求。

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