生物化学练习及思考题问答题参考答案
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6、根据蛋白质的理化性质，详细阐述蛋白质分离提纯的一般步骤和主要方法？
答：蛋白质分离纯化的一般步骤包括 1．样品前处理、粗分级分离和纯化。根据蛋白质的 性质，蛋白超过滤 2）密度梯度离心：物质大小和密度不同，经密度梯度离心后，每种蛋白质颗粒沉
可逆抑制抑制剂以非共价键与酶结合，造成酶活性的暂时丧失，可用透析等 简单方法除去而使酶活性完全或部分恢复，称为可逆抑制。
可逆抑制作用包括竞争性、非竞争性、反竞争性抑制。如磺胺类药物对二氢 叶酸合成酶的竞争性抑制。
3、写出米氏方程，并说明什么是 Km 值及其意义。 米氏方程：
Vmax [S] V= Km + [S] Km 值本身的含义是：酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 Km 值的意义： ① 不同的酶具有不同 Km 值，它是酶的一个重要的特征物理常数。 Km 值只是在固定的底物，一定的温度和 pH 条件下，一定的缓冲体系中测定的，不 同条件下具有不同的 Km 值。 ② Km 值表示酶与底物之间的亲和程度： Km 值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km 值小表示亲和程度大，酶的催化活性高。 ③、Km 可判断酶专一性和最适底物：Km 值最小的底物为最适底物。 ④、Km 帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 ⑤、已知 Km，可计算出某一底物浓度时，其反应速率相当于 Vmax 的百分率。 ⑥、可用来确定测定酶活性时所需的底物浓度。
2、简述酶的作用机理。
（1）酶能够大幅度降低反应的活化能，使反应体系中活化分子数目增加，因此使反应大大 速度加快。 （2）酶之所以能够降低反应活化能，可以用中间产物学说来解释—酶催化反应时，首先与 底物结合，生成不稳定的中间产物 ES，然后 ES 再分解为产物和酶。由于 ES 的形成，改变 了原来的反应途径，使分子内部的化学键有稳定变成活化状态，因此降低了反应的活化能。 （3）酶如何与底物形成 ES，可用诱导契合学说解释。当 E 和 S 接触时，E 在 S 的诱导下， 空间结构发生一定的变化，使活性中心的活性基团重新排列定向，形成更适合与 S 结合的空 间结构，同时 S 也发生相应的变化，经变化后的 E 和 S 相互吻合，形成 ES。
之间形成两个氢键，G 与 C 之间形成三个氢键。在 DNA 分子中，嘌呤碱基的总数与嘧 啶碱基的总数相等
3. 何谓核酸变性和复性，简述影响 Tm 和复性速度的主要因素。 (1) 核酸的变性： 核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂， 变成单链结构的过程。变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不 涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 (2) 核酸的复性： 变性 DNA 在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔 合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 影响 Tm 因素： （1）G-C 含量：高——Tm 值越大 （2）溶液中的离子强度：大——Tm 值越大 （3） 溶液的 pH：小——Tm 值越大 (4) 变性剂：破坏氢键使 Tm 值减小。 影响复性速度的主要因素： （1） 单链片段的浓度：大——快 （2） 单链片段的大小：小——快 （3） 片段内的重复序列：多——快 （4) 溶液的离子强度：大——快（消除磷酸的负电斥力）
4. 简述 tRNA 二级结构的组成特点。 tRNA 二级结构呈三叶草型，分别由氨基酸臂等四臂及二氢尿嘧啶环、反密码环
和 TΨC 环组成。在氨基酸臂的有共同的 CCA-3’端，整个分子组成中含有较多的稀有 碱基。反密码环上的反密码子决定了所携带的氨基酸种类，
5. 用 1mol/L 的 KOH 溶液水解核酸，两类核酸（DNA 及 RNA）的水解有何不同? 答：RNA 几乎完全水解，生成 2-或 3-磷酸核苷。
生物化学练习及思考题——问答题参考答案
蛋白质
一、 名词解释：（自己在教材中找答案） 氨基酸的等电点、蛋白质的变性与复性、蛋白质的变构效应、层析技术、两 性离子 必需氨基酸、 一级结构、二级结构、三级结构、四级结构
二、全章问答题： 1、写出组成蛋白质的氨基酸的结构通式，根据 R 基团的极性性质，蛋白质氨基 酸可以分为几类，各-氨有基哪酸些的氨通式基酸。
降到与自身密度相等的介质密度梯度时即停止。如蔗糖梯度、聚蔗糖(Ficoll)梯度。 3）凝胶过滤(分子排阻层析)：比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内，比网孔小的
分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。于是，大分子物质先被洗脱，小分子物质后 被洗脱。 （2）利用溶解度差别的纯化方法
1）等电点沉淀：等电点溶解度最小 2）盐析 ：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质沉
4、简述结合蛋白酶的分子组成及其功能特点
５.比较三种可逆抑制作用的特点？
(1) 竟争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。 动力学特点：反应速度下降 :Km 增加;Vmax 不变
解除方法：增加底物浓度即提高底物的竞争能力 (2) 非竟争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合，竟争酶的非活性中心，并导至酶活性下降。 动力学特点：Km 不变;Vmax 下降 抑制作用与抑制剂的浓度有关.
Vmax [S] V= Km + [S]
(1)当底物浓度较低时，反应速度 v 与底物浓度[S]成正比，表现为一级反应。 (2). 随底物浓度增加，v 不按正比升高的混合级反应 (3). 当底物浓度达到一定值，反应速度不再增加，表现为零级反应。 1.3、pH 的影响
在一定的 pH 下, 酶具有最大的催化活性,通常称此 pH 为最适 pH。 1.4 温度的影响
酶
五、简答题： 1、简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其特点？
（1）酶与一般催化剂的共同点： • 在反应前后没有质和量的变化； • 只能催化热力学允许的化学反应； • 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。
（2）酶作用的特点条件 • 温和：常温、常压、pH=7； • 高效率：反应速度提高 108～1020，比普通催化剂提高 107～1013； • 专一性：即酶只能对特定的一种或一类底物起作用
核酸
1. 试比较 DNA 和 RNA 在化学组成、分子结构、分布和生物学功能等方面的主要特点。
2. 简述 DNA 双螺旋结构的主要特点 （1）DNA 分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称 DNA 单链)组成。两条链沿着同一 根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反。 （2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平 面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成 90°角。 （3）螺旋横截面的直径约为 2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为 3.4 nm，每 10 个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为 34 nm。 （4）两条 DNA 链相互结合以及形成双螺旋的力是链间的碱基对所形成的氢键。A 和 T
醛酮反应生成弱碱性的西佛碱（Schiff’ base） C=N-。
（5）脱氨基反应：脱去氨基生成 α-酮酸。
3、蛋白质为什么能形成稳定的胶体溶液？ 水化膜和双电层
4、试述蛋白质的空间结构的构建。
5、举例说明蛋白质的结构与功能的关系
（1）、一级结构决定决定蛋白质的功能(1 分) 1）同功能蛋白质中氨基酸顺序具有种属差异(1 分) 2）一级结构相同的蛋白质的功能也相同(1 分) 3）一级结构上的细微变化可直接影响其功能(1 分)
（2）、高级结构与功能的关系 1）蛋白质高级构象破坏，功能丧失(2 分)
天然蛋白质在构象上的亚稳定性的，当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影 响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变 或丧失，但并未导致其一级结构的变化，——变性；蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则 是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象， 恢复原有的理化性质和生物活性——复性。 2）蛋白质在表现生物功能时，构象发生一定变化(2 分) 别构效应：又称变构效应，是指寡聚蛋白与配基结合，改变蛋白质构象，导致蛋白质生物活 性改变的现象
(3) 反竞争性抑制 抑制剂与酶-底物复合物结合,生成的三元复合物不能解离产物 动力学特点：Km、Vmax 下降 抑制作用与底物及抑制剂的浓度有关.
六、论述题； 1、影响酶促反应速度的因素有哪些？并简要说明它们各有什么影响。
1.1、酶浓度对酶作用的影响 底物足够过量时，速度与酶浓度成正比
1.2、底物浓度对酶促反应的速度的影响可以用米氏方程表示
绝对专一性：有些酶只作用于一种底物，催化一个反应， 相对专一性：作用结构相近的一类底物。包括键专一性和簇
（基团）专一性。 立体异构专一性：这类酶不能辨别底物不同的立体异构体，只
对其中的某一种构型起作用。
• 易变敏感性：受各种因素影响，在活细胞内受到精密严格调控。 ——可调节性
2、抑制剂对酶的抑制作用分为几种类型？举例说明 抑制剂对酶的抑制有不可逆抑制和可逆抑制。
一方面是温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变 化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温 度条件下,反应速度最大。 1.5 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 激活剂可以提高酶的活性：无机离子、中等大小的有机分子如半胱氨酸等、具有蛋白 质性质的大分子物质 （如酶原激活） 1.6 抑制剂对酶活性的抑制:可逆抑制和不可逆抑制. 不可逆抑制：抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。 可逆抑制：抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通 过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。
（3）烃基化反应： 1）与 2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应
在酸性条件下水解，得到黄色 DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不 同的 DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。1955 年，Sanger 首先用该反应鉴定多 肽或蛋白质的 N-端氨基酸
2） 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应 生成的苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA) 是无色的，可用层析法加以分离鉴定。 瑞典的 Edman 用该反应鉴定 N-端氨基酸。 （4）形成西佛碱反应：在生物体内，氨基酸分子中的氨基在某些酶的催化下，可与
淀，称为盐析。 3）有机溶剂分级分离法 ：甲醇、乙醇、丙酮等均可沉淀蛋白质。①脱水作用；②使
水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。一般预先将有机溶剂冷却到-40C-60C，可防止 变性。 （3） 根据电荷不同的纯化方法
1）电泳：不同的蛋白质分子所带电荷及电荷量不同，且分子大小也不同，故在 电场中的移动速度也不同。 2)离子交换层析 ：用于蛋白质分离纯化的离子交换剂多为纤维素离子交换剂。 溶液的 pH 决定离子交换剂与蛋白质的解离程度。 （4）利用选择性吸附和特异亲和力的纯化方法 利用吸附层析力和解吸性质不同达到分离。如亲和层析：利用待纯化的分子和杂 质分子与吸附剂之间的吸附能：利用蛋白质分子对配体特有的识别能力建立的纯 化方法。
（4）酶具催化高效性的机制：“邻近”和“定向”效应；底物的张力和形变；酸碱催化； 共价催化，金属离子的作用，疏水环境。
生物氧化
1、图示呼吸链的电子传递顺序。
不可逆抑制：酶的某些基团以共价键的方式结合。必须通过其他的化学反应 才能把抑制剂从酶分子上除去。该抑制作用是因为降低了酶的 Vmax。不可逆抑 制剂有：有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、烷化剂等化合物。如有机磷化合物 能同酶蛋白分子中的或酶活性中心上的 ser 残基的侧链-OH 结合，从而抑制酶活 性。
2、 简述氨基酸α-NH2 参加的主要化学反应。 （1）亚硝酸盐反应，生成氮气，可以计算氨基酸的量 （2）酰化反应：氨基酸与 5-(二甲胺基)萘-1-磺酰氯(DNS-Cl)反应，生成 DNS-氨基酸。
丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，1963 年，Giray 和 Hartley 将该反应用于多肽链 N 末端氨 基酸的鉴定
答：蛋白质分离纯化的一般步骤包括 1．样品前处理、粗分级分离和纯化。根据蛋白质的 性质，蛋白超过滤 2）密度梯度离心：物质大小和密度不同，经密度梯度离心后，每种蛋白质颗粒沉
可逆抑制抑制剂以非共价键与酶结合，造成酶活性的暂时丧失，可用透析等 简单方法除去而使酶活性完全或部分恢复，称为可逆抑制。
可逆抑制作用包括竞争性、非竞争性、反竞争性抑制。如磺胺类药物对二氢 叶酸合成酶的竞争性抑制。
3、写出米氏方程，并说明什么是 Km 值及其意义。 米氏方程：
Vmax [S] V= Km + [S] Km 值本身的含义是：酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 Km 值的意义： ① 不同的酶具有不同 Km 值，它是酶的一个重要的特征物理常数。 Km 值只是在固定的底物，一定的温度和 pH 条件下，一定的缓冲体系中测定的，不 同条件下具有不同的 Km 值。 ② Km 值表示酶与底物之间的亲和程度： Km 值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km 值小表示亲和程度大，酶的催化活性高。 ③、Km 可判断酶专一性和最适底物：Km 值最小的底物为最适底物。 ④、Km 帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 ⑤、已知 Km，可计算出某一底物浓度时，其反应速率相当于 Vmax 的百分率。 ⑥、可用来确定测定酶活性时所需的底物浓度。
2、简述酶的作用机理。
（1）酶能够大幅度降低反应的活化能，使反应体系中活化分子数目增加，因此使反应大大 速度加快。 （2）酶之所以能够降低反应活化能，可以用中间产物学说来解释—酶催化反应时，首先与 底物结合，生成不稳定的中间产物 ES，然后 ES 再分解为产物和酶。由于 ES 的形成，改变 了原来的反应途径，使分子内部的化学键有稳定变成活化状态，因此降低了反应的活化能。 （3）酶如何与底物形成 ES，可用诱导契合学说解释。当 E 和 S 接触时，E 在 S 的诱导下， 空间结构发生一定的变化，使活性中心的活性基团重新排列定向，形成更适合与 S 结合的空 间结构，同时 S 也发生相应的变化，经变化后的 E 和 S 相互吻合，形成 ES。
之间形成两个氢键，G 与 C 之间形成三个氢键。在 DNA 分子中，嘌呤碱基的总数与嘧 啶碱基的总数相等
3. 何谓核酸变性和复性，简述影响 Tm 和复性速度的主要因素。 (1) 核酸的变性： 核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂， 变成单链结构的过程。变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不 涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 (2) 核酸的复性： 变性 DNA 在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔 合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 影响 Tm 因素： （1）G-C 含量：高——Tm 值越大 （2）溶液中的离子强度：大——Tm 值越大 （3） 溶液的 pH：小——Tm 值越大 (4) 变性剂：破坏氢键使 Tm 值减小。 影响复性速度的主要因素： （1） 单链片段的浓度：大——快 （2） 单链片段的大小：小——快 （3） 片段内的重复序列：多——快 （4) 溶液的离子强度：大——快（消除磷酸的负电斥力）
4. 简述 tRNA 二级结构的组成特点。 tRNA 二级结构呈三叶草型，分别由氨基酸臂等四臂及二氢尿嘧啶环、反密码环
和 TΨC 环组成。在氨基酸臂的有共同的 CCA-3’端，整个分子组成中含有较多的稀有 碱基。反密码环上的反密码子决定了所携带的氨基酸种类，
5. 用 1mol/L 的 KOH 溶液水解核酸，两类核酸（DNA 及 RNA）的水解有何不同? 答：RNA 几乎完全水解，生成 2-或 3-磷酸核苷。
生物化学练习及思考题——问答题参考答案
蛋白质
一、 名词解释：（自己在教材中找答案） 氨基酸的等电点、蛋白质的变性与复性、蛋白质的变构效应、层析技术、两 性离子 必需氨基酸、 一级结构、二级结构、三级结构、四级结构
二、全章问答题： 1、写出组成蛋白质的氨基酸的结构通式，根据 R 基团的极性性质，蛋白质氨基 酸可以分为几类，各-氨有基哪酸些的氨通式基酸。
降到与自身密度相等的介质密度梯度时即停止。如蔗糖梯度、聚蔗糖(Ficoll)梯度。 3）凝胶过滤(分子排阻层析)：比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内，比网孔小的
分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。于是，大分子物质先被洗脱，小分子物质后 被洗脱。 （2）利用溶解度差别的纯化方法
1）等电点沉淀：等电点溶解度最小 2）盐析 ：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质沉
4、简述结合蛋白酶的分子组成及其功能特点
５.比较三种可逆抑制作用的特点？
(1) 竟争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。 动力学特点：反应速度下降 :Km 增加;Vmax 不变
解除方法：增加底物浓度即提高底物的竞争能力 (2) 非竟争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合，竟争酶的非活性中心，并导至酶活性下降。 动力学特点：Km 不变;Vmax 下降 抑制作用与抑制剂的浓度有关.
Vmax [S] V= Km + [S]
(1)当底物浓度较低时，反应速度 v 与底物浓度[S]成正比，表现为一级反应。 (2). 随底物浓度增加，v 不按正比升高的混合级反应 (3). 当底物浓度达到一定值，反应速度不再增加，表现为零级反应。 1.3、pH 的影响
在一定的 pH 下, 酶具有最大的催化活性,通常称此 pH 为最适 pH。 1.4 温度的影响
酶
五、简答题： 1、简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其特点？
（1）酶与一般催化剂的共同点： • 在反应前后没有质和量的变化； • 只能催化热力学允许的化学反应； • 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。
（2）酶作用的特点条件 • 温和：常温、常压、pH=7； • 高效率：反应速度提高 108～1020，比普通催化剂提高 107～1013； • 专一性：即酶只能对特定的一种或一类底物起作用
核酸
1. 试比较 DNA 和 RNA 在化学组成、分子结构、分布和生物学功能等方面的主要特点。
2. 简述 DNA 双螺旋结构的主要特点 （1）DNA 分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称 DNA 单链)组成。两条链沿着同一 根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反。 （2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平 面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成 90°角。 （3）螺旋横截面的直径约为 2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为 3.4 nm，每 10 个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为 34 nm。 （4）两条 DNA 链相互结合以及形成双螺旋的力是链间的碱基对所形成的氢键。A 和 T
醛酮反应生成弱碱性的西佛碱（Schiff’ base） C=N-。
（5）脱氨基反应：脱去氨基生成 α-酮酸。
3、蛋白质为什么能形成稳定的胶体溶液？ 水化膜和双电层
4、试述蛋白质的空间结构的构建。
5、举例说明蛋白质的结构与功能的关系
（1）、一级结构决定决定蛋白质的功能(1 分) 1）同功能蛋白质中氨基酸顺序具有种属差异(1 分) 2）一级结构相同的蛋白质的功能也相同(1 分) 3）一级结构上的细微变化可直接影响其功能(1 分)
（2）、高级结构与功能的关系 1）蛋白质高级构象破坏，功能丧失(2 分)
天然蛋白质在构象上的亚稳定性的，当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影 响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变 或丧失，但并未导致其一级结构的变化，——变性；蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则 是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象， 恢复原有的理化性质和生物活性——复性。 2）蛋白质在表现生物功能时，构象发生一定变化(2 分) 别构效应：又称变构效应，是指寡聚蛋白与配基结合，改变蛋白质构象，导致蛋白质生物活 性改变的现象
(3) 反竞争性抑制 抑制剂与酶-底物复合物结合,生成的三元复合物不能解离产物 动力学特点：Km、Vmax 下降 抑制作用与底物及抑制剂的浓度有关.
六、论述题； 1、影响酶促反应速度的因素有哪些？并简要说明它们各有什么影响。
1.1、酶浓度对酶作用的影响 底物足够过量时，速度与酶浓度成正比
1.2、底物浓度对酶促反应的速度的影响可以用米氏方程表示
绝对专一性：有些酶只作用于一种底物，催化一个反应， 相对专一性：作用结构相近的一类底物。包括键专一性和簇
（基团）专一性。 立体异构专一性：这类酶不能辨别底物不同的立体异构体，只
对其中的某一种构型起作用。
• 易变敏感性：受各种因素影响，在活细胞内受到精密严格调控。 ——可调节性
2、抑制剂对酶的抑制作用分为几种类型？举例说明 抑制剂对酶的抑制有不可逆抑制和可逆抑制。
一方面是温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变 化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温 度条件下,反应速度最大。 1.5 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 激活剂可以提高酶的活性：无机离子、中等大小的有机分子如半胱氨酸等、具有蛋白 质性质的大分子物质 （如酶原激活） 1.6 抑制剂对酶活性的抑制:可逆抑制和不可逆抑制. 不可逆抑制：抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。 可逆抑制：抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通 过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。
（3）烃基化反应： 1）与 2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应
在酸性条件下水解，得到黄色 DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不 同的 DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。1955 年，Sanger 首先用该反应鉴定多 肽或蛋白质的 N-端氨基酸
2） 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应 生成的苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA) 是无色的，可用层析法加以分离鉴定。 瑞典的 Edman 用该反应鉴定 N-端氨基酸。 （4）形成西佛碱反应：在生物体内，氨基酸分子中的氨基在某些酶的催化下，可与
淀，称为盐析。 3）有机溶剂分级分离法 ：甲醇、乙醇、丙酮等均可沉淀蛋白质。①脱水作用；②使
水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。一般预先将有机溶剂冷却到-40C-60C，可防止 变性。 （3） 根据电荷不同的纯化方法
1）电泳：不同的蛋白质分子所带电荷及电荷量不同，且分子大小也不同，故在 电场中的移动速度也不同。 2)离子交换层析 ：用于蛋白质分离纯化的离子交换剂多为纤维素离子交换剂。 溶液的 pH 决定离子交换剂与蛋白质的解离程度。 （4）利用选择性吸附和特异亲和力的纯化方法 利用吸附层析力和解吸性质不同达到分离。如亲和层析：利用待纯化的分子和杂 质分子与吸附剂之间的吸附能：利用蛋白质分子对配体特有的识别能力建立的纯 化方法。
（4）酶具催化高效性的机制：“邻近”和“定向”效应；底物的张力和形变；酸碱催化； 共价催化，金属离子的作用，疏水环境。
生物氧化
1、图示呼吸链的电子传递顺序。
不可逆抑制：酶的某些基团以共价键的方式结合。必须通过其他的化学反应 才能把抑制剂从酶分子上除去。该抑制作用是因为降低了酶的 Vmax。不可逆抑 制剂有：有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、烷化剂等化合物。如有机磷化合物 能同酶蛋白分子中的或酶活性中心上的 ser 残基的侧链-OH 结合，从而抑制酶活 性。
2、 简述氨基酸α-NH2 参加的主要化学反应。 （1）亚硝酸盐反应，生成氮气，可以计算氨基酸的量 （2）酰化反应：氨基酸与 5-(二甲胺基)萘-1-磺酰氯(DNS-Cl)反应，生成 DNS-氨基酸。
丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，1963 年，Giray 和 Hartley 将该反应用于多肽链 N 末端氨 基酸的鉴定