2霉菌、放线菌、酵母菌的形态观察及酵母菌细胞死活鉴定

注意：观察时，宜用略暗光线，先用低倍镜找到适当视野， 再换高倍镜观察。如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进 行染色后观察，效果会更好。
四、操作步骤
2.霉菌形态观察：
直接制片观察法滴一滴乳酸石碳酸棉蓝染液于载玻片上， 用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量以产孢子的霉菌菌丝， 先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片 上的染色液中，用解剖针小心地将菌丝分开，盖上盖玻片， 置低倍镜下找到适当视野，再换高倍镜观察。
繁殖方式：主要产生无性孢子和有性孢子繁殖。
乳酸石碳酸棉蓝染色：细胞不变形，不易干燥，防 腐，保存时间较长，防止孢子飞散。
霉菌的菌丝。构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。 菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很 像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌 和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产 生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝 体。
酵母菌的形态
酵母菌细胞形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状和香肠 状。酵母菌细胞大小为2.5-10x4.5-21m。
酵母菌细胞形态
酵母菌出芽
酵母菌细胞形态
（2）霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体（基内菌 丝和气生菌丝），气生菌丝长到一定阶段分化产生分 生孢子梗，分生孢子梗上产生孢子。分生孢子梗和分 生孢子的形态特征是分类鉴定的重要依据。
胞。 ④染色30分钟后再次观察，注意细胞死活比例是否发生变化。 ⑤用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 （2）水-碘液浸片法 将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍，滴加一滴于载玻片中央，无菌操作取少许菌体于染色液
中止菌丝污染显微镜物镜镜头。 采取恰当的处理方法永久保持微生物的自然形态。 美蓝染液水浸片法制作酵母菌制片注意染液的浓度和染色
注意：挑菌和制片时要小心，尽可能保持霉菌自然生长状态， 加盖玻片时切勿压入气泡，以免影响观察。
四、操作步骤
3.酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 （1）美蓝染液水浸片法 ①滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔
置于染液中，混合均匀。 ②用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓缓将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 ③将制片放置3min用低倍镜及高倍镜观察酵母形态出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细
⑷孢子 分生孢子（球形、椭圆、杆状或柱状）包囊孢子、游动孢子 插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放 线菌丝沿培养基表面与盖玻片的交接处生长且附着在盖玻片上，观察 时，轻轻取出盖玻片，可观察到不同生长时期放线菌自然生长状态的 形态特征。
链霉菌的一般形态和构造
2.真菌： （1）酵母菌：单细胞真核微生物。 形态：通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。 繁殖形式：无性繁殖，无性繁殖方式是芽殖。芽殖发生在细胞壁的预定点上，此 点被称为芽痕，每个酵母细胞有一至多个芽痕。 有性繁殖，有性繁殖以形成子囊和子囊孢子的方式进行繁殖 美蓝染色：可以区分死活细胞，活细胞使美篮由蓝色变无色，死细胞呈蓝色。 原理：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细 胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢 作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或浅蓝色，借此即可对酵母菌的细胞死和活细胞进行鉴别。
霉菌、放线菌、酵母菌的形态观 察及酵母菌细胞死活鉴定
一、实验目的
1.练习丝状微生物的制片 2.了解放线菌、霉菌的形态特征 3.学习浸片法制作酵母菌临时装片 4.了解酵母菌的形态特征，观察出芽繁殖的 状态 5.了解鉴别细胞死活的方法
二、实验原理
1.放线菌：放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性 菌。典型的放线菌的菌丝体分化产生各种形态特征： ⑴基内菌丝（较细，透明） ⑵气生菌丝（较粗，颜色较深）有的无气生菌丝 ⑶孢子丝（直、波曲。各种螺旋或轮生等）是分类鉴定的重要依据
时间。 菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 盖片时缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。
六、实验结果
1.绘制并说明放线菌、酵母菌、霉菌的形态和结构特征
2.根据你所观察到的吕氏碱性美蓝液浓度及作用时间与酵母 死、活细胞数量变化的情况填写下表：
结果记录
吕氏碱性美蓝液浓度
0.1%
0.05%
作用时间
3min 30min
3min 30min
每视野活细胞个数/个
每视野死细胞个数/个
七、思考题
1.你认为在显微镜下，放线菌、霉菌和酵母菌的主要区别是 什么？
2.吕氏碱性美蓝液浓度和作用的时间不同，对酵母菌死活细 胞数量有何影响？试分析其原因。
3.镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？
霉菌孢子
霉菌
三、实验器材
1.菌种：细黄链霉菌(放线菌）、酵母菌、黑曲霉、青霉、 2.溶液和试剂
0.1%吕氏碱性美蓝染液、乳酸石碳酸棉蓝染液 2.仪器或其他用具
显微镜、载玻片、盖玻片等
四、操作步骤
1.放线菌形态观察： 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面的培养物，然后将有 菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。