奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的含量测定

奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的含量测定
目的：研究奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的含量测定方法。

方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Elite C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（10∶90）；流速为1.0 ml/min；检测波长为250 nm；柱温25℃。

结果：本法平均回收率为97.28%，RSD=1.07%（n＝9）。

结论：本法操作简便、重复性良好，可用于奥沙利铂脂质体的质量控制。

[Abstract]Objective:To study a method for content determination of oxaliplatin in oxaliplatin liposomes.Methods:A RP-HPLC method was applied with Elite C18(250 mm×4.6 mm,5 μm). The mobile phase was methanol-water(10:90). The flow rate was 1.0 ml/min, and the UV detective wavelength was 250 nm.Results:The average recovery of the method was 97.28％, RSD=1.07%(n＝9).Conclusion:The method is covenient, economical and accurate with a good reproducibility. It can be used for the quality control of oxaliplatin liposomes.
[Key words]Oxaliplatin;Liposomes;RP-HPLC;Content determination
奥沙利铂是继顺铂和卡铂之后，由瑞士Debiopharm 公司研制开发的第三代铂类抗癌药[1]。

它与顺铂的抗肿瘤谱不完全相同，体外及体内的临床前研究表明，奥沙利铂对大肠癌细胞株及顺铂耐药的细胞株等多种肿瘤，有显著的抑制作用。

奥沙利铂与顺铂的药动学有明显差异，在15 min内可完成全部DNA结合，无蓄积毒性，对肾脏无损害，主要经尿道排泄[2]。

以脂质体为载体制成的脂质体药物具有良好的靶向性，可以提高和延长药物疗效、缓和药物毒性，具有避免耐药性和改变给药途径等优点[3]。

为控制奥沙利铂脂质体的质量，本文建立了反相高效液相色谱法测定奥沙利铂脂质体中奥沙利铂的含量，该法可用于奥沙利铂脂质体临床前质量控制。

1 仪器与试药
1100型高效液相仪（美国Agilent公司），包括G1311A四元泵，DAD检测器，G1316A柱温箱，Agilent Chem化学工作站；760型紫外分光光度计（上海分析仪器厂）。

奥沙利铂对照品（中国药品生物制品检定所，批号100583-200401）；奥沙利铂原料（山东铂源化学有限公司，批号20070204）；奥沙利铂脂质体（自制）；甲醇（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯）。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Elite C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（10∶90）；
流速1.0 ml/min；检测波长250 nm；柱温25℃。

理论塔板數按奥沙利铂峰计算不低于2 000[4]。

2.2 对照品溶液的制备
精密称取奥沙利铂对照品52.0 mg，置50 ml的量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得每毫升含1.02 mg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备
精密吸取奥沙利铂脂质体2.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

然后精密量取1 ml于10 ml量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液[5]。

2.4 阴性对照品溶液的制备
按供试品溶液制备方法，制得不含奥沙利铂的空白脂质体阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察
精密量取奥沙利铂对照品溶液（1.02 mg/ml）1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml分别置于50 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别得到浓度为20.8，41.6，62.4，83.2，104.0 μg/ml的溶液。

分别精密吸取20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。

以浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y=6.929 5X+ 4.653，r=0.999 8 (n=5)。

结果表明奥沙利铂在20.8~104.0 μg/ml范围内线性关系良好。

2.6 专属性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，供试品溶液中奥沙利铂达到基线分离，阴性对照溶液无干扰，基线稳定。

结果见图1。

2.7 精密度试验
吸取供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪，连续进样5次，测定奥沙利铂的峰面积，RSD＝0.67%(n=5)。

结果见表1。

2.8 重复性试验
取奥沙利铂脂质体，按上述供试品溶液的制备方法，平行制备5份溶液，进样测定，RSD＝0.95%(n=5)。

结果见表2。

2.9 加样回收试验
精密吸取奥沙利铂脂质体10 ml 9份，分别精密加入定量的奥沙利铂对照品，定容；分别精密吸取2.0 ml，按“供试品溶液制备”与“样品测定”项下同法操作，结果平均回收率为97.28%；RSD为1.07%（n＝9）。

结果见表3。

2.10 稳定性试验
取奥沙利铂对照品溶液，按含量测定项下色谱条件，分别在0，24，48 h进样20 μl，测定奥沙利铂的峰面积，计算RSD＝0.56%，表明48 h内测定结果稳定。

结果见表4。

2.11 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定。

外标法计算样品中奥沙利铂的含量，样品测定结果见表5。

3 讨论
本试验旨在对奥沙利铂脂质体中奥沙利铂含量测定方法进行研究，以制定奥沙利铂脂质体临床前研究的质量标准。

含量测定方法学的考察结果显示，本法操作简便、专属性强，具有良好的重复性，可作为奥沙利铂脂质体临床前研究的质量标准。

取奥沙利铂对照品适量，用蒸馏水溶解并制成浓度为1 mg/ml的奥沙利铂溶液，于波长180~400 nm范围内进行扫描，测得奥沙利铂最大吸收波长为250 nm，而空白脂质体在此范围内吸收极弱，对测定无干扰。

因此选定检测波长为250 nm。

本试验在进行流动相选择时，比较了甲醇-水（10∶90）和甲醇-水（90∶10）。

结果表明，选用甲醇-水（10∶90）时，能使奥沙利铂与杂质峰完全分离，同时峰型尖锐、对称，而选用甲醇-水（90∶10）作为流动相时，奥沙利铂杂质峰分离不完全，峰型不尖锐且有拖尾现象。

[参考文献]
[1]Mathe G, Kidani Y, Segiguchi M,et al. Oxalato-platinum or L-OHP, a third-generation platinum complex[J].Biomed and Pharmacother,1989,43:237-250.
[2]Raymond E, Feiver M, Waynarowshi JM, et al. Oxaliplatin: mechanism of action and anti-meoplastic activity[J]. Semin Oncol,1998,25(2):4.
[3]吴芳.脂质体制剂的研究及应用[J].中国医药工业杂志,1999,30(12):564-566.
[4]任鹏,孙坚彤,沈云玉,等.反相高效液相色谱法测定奥沙利铂的含量[J].抗感染药学,2005,2(1):24.
[5]吴琼,邓意辉,王绍宁,等. RP-HPLC法测定多西紫杉醇脂质体药物含量[J].中国药剂学杂志,2003,1(3):113-116.
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