血液分析仪计数低值血小板的误差

血液分析仪计数低值血小板的误差
许蕾;宋颖;沈薇;李卿;李栋成;金大鸣;李泳
【摘要】目的探讨血液分析仪对低值血小板的计数误差.方法将Beckman-Coulter LH-750和Sysmex XE-2100全自动血液分析仪检测的120例血小板数≤50 × 109/L的新鲜血液常规标本,同时用血小板计数参考流式细胞术法测定,用Kappa和相关回归等统计学方法分析血液分析仪对低值血小板检测的准确性.结果全自动血液分析仪在血小板计数(0～50)×109/L时,与参考方法结果的总符合率均>90%,Kappa值均>0.80.但在血小板计数≤15×109/L时,与参考方法符合率仅75.0%～82.3%,Kappa值95%的可信限下限均<0.80.结论全自动血液分析仪对低值血小板计数的准确性较好,但随着血小板数值的降低,其准确性有所下降.当血小板计数≤15×109/L时,血液分析仪对血小板的计数有一定误差,应重视复核.有条件时建议用流式细胞术(FCM)复核.
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2010(028)002
【总页数】2页(P151-152)
【关键词】低值血小板;血液分析仪;参考方法;Kappa和相关回归分析
【作者】许蕾;宋颖;沈薇;李卿;李栋成;金大鸣;李泳
【作者单位】上海市临床检验中心,上海,200126;上海市临床检验中心,上
海,200126;上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海,200127;上海市临床检验中心,上海,200126;上海市临床检验中心,上海,200126;上海市临床检验中心,上海,200126;上海市临床检验中心,上海,200126
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
准确计数低值血小板(platelet，PLT)已成为检验医学领域一个亟待解决的问题。

我们用国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的血小板计数国际参考方法[1-2](即流式细胞仪法)探讨血液分析仪对低值血小板检测的准确性，寻找相应的解决方法。

1.1 新鲜全血标本收集上海交通大学医学院附属仁济医院(东院)和瑞金医院2009
年5～7月病房和门诊血常规检测中血小板数≤50×109/L的全血标本共120份，患者年龄1～83岁，男性65例，女性55例，采血后5 h内完成检测。

1.2 仪器和试剂美国Beckman Coulter公司XL Epics型流式细胞仪(简称FCM)，Z2颗粒计数仪,LH-750全自动血液分析仪(简称LH-750)，日本Sysmex公司XE-2100全自动血液分析仪(简称XE-2100)。

仪器使用的质控品、试剂均为原装进口
产品。

使用前各仪器分别用原装校准品校准，并均需先检测质控品，在控后再检测新鲜全血标本。

1.3 荧光染液异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗CD41和抗CD61抗体(Beckman Coulter公司)。

1.4 方法新鲜全血标本经充分颠倒混匀后在经校准的LH-750和XE-2100血液分
析仪上分别计数血小板，并观察有无血小板报警信号出现及出现的类型。

1.5 ICSH推荐的BPC国际参考方法(FCM法) 将抗CD41-FITC和抗CD61-FITC
荧光抗体以1∶1等量混合，待用；取充分颠倒混匀的新鲜全血标本5 μl，加100 μl磷酸盐-牛血清清蛋白缓冲液(PBSA)中充分轻柔混匀；加10 μl抗CD41和抗
CD61荧光抗体混合液，充分混匀，室温18～22 ℃，避光温育15 min；加885 μl PBSA，充分混匀；取上述反应管内混合液500 μl加到2 000 μl PBSA中，使
全血的最终稀释度为1∶1 000，充分混匀；在室温避光条件下在经校准的FCM
上测定。

FCM检测方案：将待检血细胞按细胞大小、细胞内颗粒多少、对激光的前向和侧向散射光的反应强度，以及对特异荧光染料的亲和程度不同，将待检血细胞分设在A～F 6个不同的门内，从中收集50 000个RBC信号，其中包括PLT信号至少1 000个，然后计算出RBC/PLT比率。

新鲜全血标本经充分颠倒混匀后在经校准的Z2颗粒计数仪或全自动血液分析仪上计数红细胞。

并计算出参考方法的PLT计数值。

计算公式：)×RBC。

式中BPC为被测样品中PLT数，P为FCM计
数的PLT数，CPR为FCM计数的RBC和PLT重合数，R为FCM计数的RBC数，RBC为Z2颗粒计数仪或血液分析仪上计数的RBC数。

1.6 根据FCM法血小板计数结果进行分组第1组：血小板计数(0～15)×109/L，共34 例；第2组：血小板计数(16～30)×109/L，共39 例；第3组：血小板计
数(31～50)×109/L，共47例。

1.7 统计学分析应用Kappa和相关回归等统计学方法[3]进行数据分析。

2.1 各组用血液分析仪与FCM法计数血小板结果符合率和Kappa检验结果见表1～表3。

表1～表3显示，无论光学法或电阻法，在BPC(0～50)×109/L 时，全自动血液
分析仪与FCM法血小板计数结果总符合率>90%，Kappa值均>0.80。

但在
BPC≤15×109/L时，全自动血液分析仪与FCM法血小板计数结果的符合率仅75.0%～82.3%。

2.2 各组用FCM法检测RBC/PLT与血液分析仪检测RBC计算BPC结果相关回归比较见表4。

表4显示,用血液分析仪测得的RBC与流式细胞仪测得的RBC:PLT计算出的BPC，各仪器间相关性很好,r2均>0.95。

低值血小板是临床判断患者是否需要输注血小板的一个重要指标，所以准确计数低值血小板已成为一个迫切需要解决的问题。

目前国际上尚未见可供溯源性计量的血
小板标准品，对低值血小板复核的标准也各不相同，且大多以手工计数法作为复核手段，而手工复核存在很多技术上的问题[4-5]。

2001年ICSH推荐了间接法血小板计数的新的国际参考方法，以弥补手工法复核的不足。

我们以ICSH推荐的间接法血小板计数国际参考方法(FCM)为标准，同时观察血液分析仪的低值血小板计数值，实验显示无论电阻法或光学法，血小板数≤50×109/L时，血液分析仪的检测结果与FCM法的总符合率>90%，Kappa值均>0.80。

但在BPC≤15×109/L时，血液分析仪与FCM法血小板计数结果的符合率大多<80%，95%Kappa可信限下限均<0.80。

表明在BPC≤15×109/L时，血液分析仪和FCM法计数的一致性有
些不足，如要求更为准确的结果而条件又具备时，则此类标本可用FCM法复核。

致谢：上海交通大学医学院附属仁济医院和瑞金医院检验科为本次实验提供了新鲜血液标本，在此深表感谢。

【相关文献】
[1]ICSH. Cytometry panel platelet counting by RBC/platelet ratio method[J].
AJCP,2001,115(3)：460-464.
[2]Harrison P, Ault KA, Chapman S, et al. An interlaboratory study of a candidate reference method for platelet counting[J]. AJCP,2001,115(3):448-459.
[3]颜虹，徐勇勇.医学统计学[M].北京：人民卫生出版社，2005:214.
[4]朱忠勇.准确计数血小板的方法学研究进展[J].国外医学临床生物化学和检验学分册,2002,23(3)：131-132.
[5]丛玉隆，乐家新.现代血细胞分析技术与临床[M].北京：人民军医出版社，2005:10-15.。