IFN-γ体外释放检测法

IFN-γ释放试验
结核病潜伏感染检测是结核病诊断中的一大难题，结核菌感染者大部分（约90%）处于潜伏感染状态，临床检测及X光胸透不能发现异常状况。

此外，由于儿童普遍实行卡介苗计划免疫，结核菌素（PPD）皮内变态反应因不能区分卡介苗免疫与结核菌感染而无法应用。

γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assay, IGRA）将结核菌特异性抗原加入受试者的血液标本或者含有分理处的外周血单核细胞的培养基中进行孵化，如果受试者受到过结核分枝杆菌感染，那么被结核菌激活的记忆T细胞就会对这些特异性抗原产生反应，发生增殖分化并释放出γ-干扰素以及其他一些细胞因子，通过检测γ-干扰素的释放水平来判断是否存在结核菌感染。

整个试验体系中，对于结核菌特异性抗原的选定是至关重要的。

γ-干扰素释放试验诞生的早期曾使用PPD作为特异性抗原，由于PPD成分不单一，特异性和敏感性均不理想。

后来研究者开始使用ESA T-6和CFP-10作为抗原，得到了较好的效果。

ESA T-6（早期分泌抗原靶6000蛋白）和CFP-10(培养滤出液蛋白-10)的蛋白编码来源于结核分枝杆菌基因中的一个菌种特异性基因片段，称为region of difference 1(RD1)。

这个基因片段不存在大部分的非结核分枝杆菌以及所有的牛型分枝杆菌（包括卡介苗）中，因此ESA T-6和CFP-10作为抗原的特异性相对于PPD要高的多。

牛γ-干扰素与人γ-干扰素、鼠γ-干扰素氨基酸同源性分别为63%和47%。

陈颖钰等在发表的文献《人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用》中克隆表达了人IFN-γ基因，利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠，用所获得的单抗及兔多抗建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA。

分别用牛结核菌素、禽结核菌素、牛重组IFN-γ作为检测抗原，用建立的夹心ELISA方法测定，结果均为阴性反应，说明建立的方法特异性良好。

用此方法与商业试剂盒平行检测阳性样本与健康对照样本，两种方法检测结果相符。

2011.02.22。