妇科千金片对阿奇霉素在慢性盆腔炎大鼠体内药物动力学的影响

妇科千金片对阿奇霉素在慢性盆腔炎大鼠体内药物动力学的影响研究妇科千金片对阿奇霉素（AZM）在慢性盆腔炎大鼠体内多次给药药物
动力学的影响，评价联合用药的合理性。

以雌性SD大鼠为实验对象，采用子宫内接种混合菌液加机械损伤法建立慢性盆腔炎动物模型。

将模型大鼠随机分为对照组和联合用药组，对照组灌胃给予阿奇霉素10 mg·kg-1·d-1，联合用药组给予等剂量阿奇霉素2 h后灌胃妇科千金片166 g·kg-1·d-1，每日1次，连续7 d。

于不同时间点采集血浆样本，HPLCMS测定血浆中阿奇霉素浓度。

采用ADAPT 51软件反向高斯模型计算药动学参数，SPSS软件对各组参数进行统计学分析。

结果显示妇科千金片对阿奇霉素的药动学参数CLt，CLd，MIT，F均无显著影响，研究表明临床妇科千金片与阿奇霉素联合应用于慢性盆腔炎的治疗具有一定的合理性。

标签：妇科千金片；阿奇霉素；多次给药；药动学；联合用药
Effect of Fuke Qianjin tablets on pharmacokinetics of Azithromycin in
rats with chronic pelvic inflammatory disease
LI Wei1，ZOU Liang1*，GONG Yun2，ZHANG Peng2，WANG Ping3，ZHANG Yan3，QIU Lu1
（1 Chengdu University，Chengdu 610106，China；
2 Zhuzhou Qianjin Pharmaceutical Co，Ltd，Zhuzhou 412003，China；
3 Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China）
[Abstract] To investigate the effect of Fuke Qianjin tablets on the pharmacokinetics of Azithromycin（AZM）in rats with chronic pelvic inflammation，and evaluate the rationality of the drug combination The animal models of chronic pelvic inflammatory disease were established by intrauterine injection of mixed bacterial suspension plus mechanic injury in female SpragueDawley（SD）rats The model rats were randomly divided into control group and drug combination group The rats in control group were given with Azithromycin 10 mg·kg1·d1 by intragastric administration，while the rats in drug combination group were given with Fuke Qianjin tablets 166 g·kg1·d1by intragastric administration 2 hours after the equivalent dose of azithromycin，once a day，consecutively for 7 days Plasma samples were collected at different time points and the concentration of AZM in plasma was determined by high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry（HPLCMS）ADAPT 51 software was used to calculate the pharmacokinetic parameters of each group by Inverse Gaussian Function model SPSS
software was used for the statistical analysis of data in each group The results showed that Fuke Qianjin tablets had no significant effects on the main pharmacokinetic parameters of AZM，including CLt，CLd，MIT and F The study showed that Fuke Qianjin tablets can be combined with azithromycin for treatment of chronic pelvic inflammation disease
[Key words] Fuke Qianjin tablets；Azithromycin；multiple dosing；pharmacokinetics；drug combination
doi：10.4268/cjcmm20161227
慢性盆腔炎（chronic pelvic inflammatory disease，CPID）为妇科常见病，临床主要表现为下腹坠痛、腰骶酸痛等。

其发病机制较为复杂，现代医学研究认为该病主要是由致病菌引起，以抗生素治疗为主。

我国传统医学认为湿热瘀结、气滞血瘀是导致该病的主要原因。

由于部分慢性盆腔炎发展过程中并无病原体存在[1]，同时抗生素常具有耐药性，因此西医学单独应用抗生素治疗的效果并非特别理想。

近年来，随着中医药现代化进程加速，中西药联合应用日趋广泛，临床对慢性盆腔炎的治疗亦常采用中西医结合疗法[23]或中药与抗生素联合应用[4]。

有研究报道妇科千金片与抗生素联合应用治疗慢性盆腔炎疗效显著提高，且不良反应发生率明显降低[57]。

妇科千金片由千斤拔、穿心莲、金樱根、功劳木、单面针、当归、鸡血藤、党参8味药组成，具有清热除湿、益气化瘀之效，为临床治疗慢性盆腔炎的常用药。

妇科千金片联合阿奇霉素对慢性妇科炎症的疗效优于单用阿奇霉素，因此临床上常将两者联合应用于治疗慢性妇科炎症疾病[8]。

本文以慢性盆腔炎大鼠为动物模型，定量研究妇科千金片与阿奇霉素联合应用后对阿奇霉素药动学过程及生物利用度的影响，探讨二者临床配伍应用的合理性。

1 材料
岛津HPLCMS 2020（ESI接口），色谱工作站（Lab solution 55）（日本岛津）；QL901涡旋混合仪（江苏海门市麒麟医用仪器厂）；H2050R台式高速冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；CP124S电子天平（北京赛多利斯有限公司）；FIS1399016超低温冰箱（Thermo Scientific）。

阿奇霉素对照品（批号130593201002，纯度943%）和罗红霉素对照品（批号130557201002，纯度941%），均购自中国食品药品检定研究院；金黄色葡萄球菌（ATCC25923）和大肠埃希菌（ATCC25922）购自中国国家菌种库；MH（B）培养基（OXOID公司）；妇科千金片（株洲千金药业股份有限公司）；阿奇霉素片（zithromax，辉瑞制药有限公司）；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；生理盐水（四川科伦药液股份有限公司）；水为屈臣氏蒸馏水。

雌性SD大鼠，SPF级，体重（200±20）g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证编号SCXK（川）200824。

2 方法
21 慢性盆腔炎模型的建立参照文献[9]，采用20%乌拉坦0005 mL·g-1腹腔注射麻醉大鼠，10 mL注射器磨去针头尖，于阴道底部的子宫颈分叉处小心进入一侧宫腔内，针头在宫腔内来回抽拉2次以机械性损伤子宫内膜组织。

另用1 mL 注射器抽取混合菌液[混合菌液由金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌经生化鉴定后，用MH（B）培养基37 ℃培养，取对数生长期，金色葡萄球菌和大肠埃希菌按1∶1混合，稀释，备用]，朝一侧卵巢方向推注菌液01 mL，同样操作步骤将01 mL 菌液注入另一侧子宫，注射完毕后，倒置大鼠5 min，以防菌液漏出。

22 分组及给药雌性SD大鼠20只，随机分为对照组和联合用药组，每组10只。

2组动物灌胃等剂量阿奇霉素10 mg·kg-1·d-1，联合用药组在给予阿奇霉素2 h后灌胃妇科千金片生理盐水混悬液166 g·kg-1·d-1，每日1次，连续7 d。

23 采血时间点的设计雌性SD大鼠3只，单剂量灌胃阿奇霉素10 mg·kg-1进行预实验，结果表明单次给药后血药浓度达峰时间约为2 h，观测周期内最低血药浓度时间约为24 h。

同时考虑到阿奇霉素临床用药为每日口服给药1次，结合其药动学特征和临床给药方案，选取给药后达峰时间和最低血药浓度时间，即每日给药后2 h和24 h为后续实验采血时间点。

24 血浆样品采集2组动物按22项下给药方案，于首日给予阿奇霉素后2，24，26，48，50，72，74，96，98，120，122，144，146，168，170 h经尾静脉采血03 mL至含有肝素钠离心管中，37 ℃温育10～20 min，3 500 r·min-1离心10 min，分离血浆于-80 ℃保存待测。

25 对照品溶液的制备精密称取罗红霉素对照品，置10 mL量瓶中，加稀释液（乙腈水65∶35）制备成质量浓度为10 g·L-1的内标罗红霉素储备液。

同法制备阿奇霉素对照品储备液，以上储备液均于 4 ℃冰箱贮藏备用。

对照品工作液临用时稀释至所需浓度即得。

26 血浆样品预处理取血浆50 μL，加入10 mol·L-1 NH4OH溶液和160 μg·L-1内标罗红霉素甲醇溶液各10 μL，涡旋30 s混匀，加入2 mL乙醚，涡旋1 min，13 300 r·min-1离心5 min，吸取上层有机相，30 ℃氮气流下吹干，残留物加入150 μL流动相溶解，涡旋1 min，14 000 r·min-1离心10 min，取上清液30 μL按26项下色谱条件测定。

27 血浆中阿奇霉素测定条件参照文献方法进行测定[10]，Agilent poroshell 120 ECC18色谱柱（46 mm×100 mm，27 μm ）；流动相乙腈10 mmol·L-1醋酸铵溶液（65∶35），流速02 mL·min-1；柱温40 ℃；进样量5 μL。

质谱检测条件：电喷雾电离化（ESI）方式，采用选择性正离子检测（SIM），阿奇霉素SIM离子为m/z 74935[M+H]+，内标罗红霉素SIM离子为m/z 83735[M+H]+，电离源电压45 kV，喷雾气（N2）的流速15 L·min-1，脱溶剂温度250 ℃，检测器电压15 kV。

28 数据分析药动学模型采用ADAPT 51分别进行1，2，3室房室模型和反向高斯模型拟合[11]。

采用SPSS statistic对数据进行统计分析，药动学参数的对
比分析采用t检验。

3 结果
31 血浆中阿奇霉素测试方法学的建立参考文献建立的阿奇霉素血浆药物浓度HPLCMS测定方法具有较高的精密度及准确度，低（10 μg·L-1）、中（100 μg·L-1）、高（500 μg·L-1）3种浓度批内精密度的RSD分别为856%，643%，327%；连续3 d批间精密度的RSD分别为102%，735%，572%。

采用乙醚萃取法进行血浆样品处理，方法回收率为9753%～1086%。

以阿奇霉素峰面积（AS）和内标罗红霉素峰面积（Ai）的比值R对血药浓度C作线性回归，结果表明血浆阿奇霉素在5～2 000 μg·L-1线性关系良好，回归方程为R=0012 5C+0047 6（r=0998 9），血浆中阿奇霉素的定量限为5 μg·L-1。

另对该分析方法的基质效应进行了考察，将空白血浆及等体积水按26项下方法处理后加入等量阿奇霉素对照品，测定响应值并比较，结果3个浓度水平的平均基质效应分别为1085%，1012%，9887%，均在8500%～1150%。

综上，采用文献方法建立的血浆样本测定方法稳定可行，符合生物样本检测的各项要求。

32 慢性盆腔炎模型的评价参照文献方法建立慢性盆腔炎动物模型，分别于造模后24，72，96 h后阴道刮片，进行菌落培养。

菌落计数结果显示，2组大鼠所感染菌量符合实验要求。

解剖后模型大鼠子宫直观可见明显炎性充血肿胀，多数宫腔迂曲扩张，末端膨大，结果表明本研究所采用模型制备方法可成功复制大鼠慢性盆腔炎模型。

33 多次给药血药浓度及药动学模型拟合2组实验动物分别按相应方案给药，采集血液样本，观测周期内血药浓度见表1。

根据所得药物浓度，对阿奇霉素的药动学模型分别采用经典1，2，3房室模型和反向高斯模型进行拟合，以残差图，最小化信息量AIC，参数估计值变异率为标准比较各模型拟合优度。

结果表明多数个体动力学模型以反向高斯模型为优，模型拟合优度见图1 C，最终全体样本均采用该模型分析。

34 联合用药对阿奇霉素药动学及生物利用度的影响与对照组相比，联合用药组妇科千金片对阿奇霉素的药动学参数CLt，CLd，MIT和F均无显著影响，主要药动学参数见表2，药时曲线见图1 A和图1B。

4 讨论
阿奇霉素（azithromycin，AZM）是第二代半合成大环内酯类广谱抗生素，作为治疗感染性疾病的一线药物，与中药配伍使用频繁，其临床主要用于治疗呼吸道、泌尿生殖道和真皮感染[12]。

阿奇霉素在体内具有独特的药物动力学特性：口服吸收快（Tmax=2～4 h）、组织分布广、胞内浓度高（约为同周期血药浓度的10～100倍）、及半衰期长（约50 h）等[13]；50%以上的药物以原形由胆汁排泄，部分为去甲基的代谢产物，在尿液中主要以原型药物排出[14]。

本研究对阿奇霉素在慢性盆腔炎模型大鼠体内的药动学参数，采用多种模型进行拟合，结果以反向高斯模型拟合最优。

反向高斯模型是一种灵活的经验输入函数模型，主要用于描述药物非血管内给药后进入机体的过程（包含溶解和吸收
过程）。

阿奇霉素属生物药剂学分类系统（BCS）Ⅱ类药物，即高渗透性低溶解度，溶解后即能快速吸收入血。

本研究选取这种新型模型，能定量描述药物的溶解吸收过程，比经典房室模型更符合阿奇霉素在该疾病动物模型体内的实际过程。

模型的拟合优度图可进一步印证该模型能较好的描述阿奇霉素在慢性盆腔炎模型大鼠体内的药代动力学过程。

本研究结果显示，对照组多次给药后阿奇霉素血药浓度逐渐增加，与妇科千金片联合应用，后期生物利用度略有降低，但主要药动学参数无显著差异，提示长时程给予慢性盆腔炎模型大鼠妇科千金片对阿奇霉素的药动学过程无明显影响。

原因可能有以下几方面，首先，阿奇霉素为氮杂环内酯化合物，该结构在酸性条件下稳定性良好[14]，因此其吸收过程受胃肠道pH影响较小。

妇科千金片主要抗炎作用机制是通过提高机体免疫力，减轻由炎症细胞介导的炎症反应[1516]，有研究表明妇科千金片中主要药味穿心莲对人类细胞色素P450酶（CYP2C9，CYP2D6，CYP3A4）具有显著的抑制作用[1718]，可能导致某些药物代谢减慢，作用时间延长，进而提高与之合用药物的生物利用度。

而阿奇霉素在体内主要通过O去甲基、N去甲基、去甲后去红霉糖和羟基化4种方式代谢，既不被CYP3A4代谢，也不是它的抑制剂，因此代谢不受细胞色素P450酶系的影响[19]。

故在与妇科千金片合用时，不易受其主要化学成分的影响，生物利用度不发生明显改变。

本研究以临床长周期多次给药为依据，以相应疾病动物模型为研究对象，建立了一种操作简便、科学可靠的中西药物联合应用生物利用度评价方法，并以妇科千金片对阿奇霉素在慢性盆腔炎大鼠体内的药动学为例进行探讨。

结果表明妇科千金片长周期多次给药对阿奇霉素在慢性盆腔炎大鼠体内的主要药动学参数及生物利用度无明显影响，结合相关药效学报道[6]，提示妇科千金片在临床上可与阿奇霉素联合应用于慢性盆腔炎等疾病的治疗，该结果可为二者临床合理应用提供一定的科学依据，并对后续相关研究具有参考价值。

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