草鱼Dnd的基因克隆

草鱼Dnd的基因克隆与功能研究
Dnd是一种RNA结合物，特异地在生殖细胞中表达。
1有性生殖生物研究中生殖细胞的发生备受关注。
2生殖细胞具有非常独特的基因表达模式，一些 基因只在生殖细胞中表达。
Dnd在生殖细胞中的作用
• 斑马鱼 • 小鼠 • 泥鳅 这些实例表明它在脊椎动物生殖细胞 的发育中有很重要的作用，并且是保守的。 它的作用机制是与小分子mRNA结合， 从而阻止或解除mRNA对生殖细胞中基因的 抑制从而促进生殖细胞的发育。
三
Dnd mRNA的显微注射 用来观察过量表达对生殖细胞的发育 的影响。把Dnd的编码区克隆到Cs2+表达 载体上，使用SP6 RNA聚合酶在体外合成 mRNA，然后进行显微注射。观察注射后的 草鱼生殖细胞数量及迁移变化情况，以 Vasa为标记进行原位杂交观察。
淡水养殖的“四大家鱼”之一。 鱼苗，鱼种来源非常容易，并且生长迅 速，饲料来源广，肉质细嫩，肌间刺少。 草鱼年产量居首位，而且价格低廉。

草鱼的“四病”
• • • • 赤皮病 烂腮病 肠炎病 出血病 这些问题都制约着草鱼养殖以及生产的 发展，这些问题可以通过基因工程技术对 草鱼品种进行改良，培育转基因草鱼。这 时又会有新的问题……
研究方法和技术路线
一 基因的克隆 提取鱼类性腺RNA，逆转录为cDNA。 以性腺cDNA为模版，采用兼并引物进行 PCR扩增获取部分序列。在测序检测后， 合成基因特异引物，采用RACE方法获取 cDNA的全序列。并以特异引物检测Dnd在 鱼各组织和胚胎发育阶段的表达。
二 Dnd morpholino 的显微注射 用来抑制Dnd的表达观察生殖细胞 的发育及性的分化情况。以草鱼作为代 表进行研究。在Morpholino注射后，以 vasa为标记，进行原位杂交，以检测原 生殖细胞的数量变化和迁移情况。鱼苗 发育到成年后，进行解剖，切片，观察 性腺的发育和性的分化。