高效液相色谱实验汇总

高效液相色谱实验汇总
化学与材料工程学院
环境监测分析实验报告
实验名称：高效液相色谱分析苯-甲苯混合物
专业班级：应化13
学号： 150313135 姓名：朱建南
指导教师：翟春
实验地点：敬行楼A210
实验日期： 2016年 11月 28日
高效液相色谱实验
一、实验目的
1．了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作；
2．学习苯-甲苯混合物的定性分析方法；3．评价色谱柱柱效；
4．了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；
5．学习未知样品的定量分析方法。

二、实验原理
不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分离。

色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等
1．色谱定性分析方法
a保留时间定性 b 峰高增量定性
2．色谱定量分析方法
a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。

b 标准曲线法（外标法）。

简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较
自动进入“采集数据”模式。

注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。

f 待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据。

g 点击谱图处理中的定量结果，记录组分的保留时间以及峰面积、峰高等色谱信息。

注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。

注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。

4．结束工作
所有样品分析完毕后，流动相继续流动10～20 min，至基线稳定。

关闭检测器，按“Stop”停泵。

关闭泵电源。

五、实验内容
1. 分别进样苯、甲苯标样和苯-甲苯混合试样，保留时间定性，记录苯-甲苯混合试样色谱谱，计算分离度。

2. a. 分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分峰的位置，并测定各自的峰面积。

b. 根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。

六、实验图谱与数据处理
1、0.001%
序号 保留时间（min ） 峰面积（mAu*s ） 峰高（mAu ） 分离度
1 3.438 7.180 2.13
2 1.129 2 3.81
3 1.485 0.63
4 3.497 3 3.972 9.43
5 2.281
1.047
图1：含量0.001%的液相色谱图
2、0.01%
序号 保留时间（min ） 峰面积（mAu*s ） 峰高（mAu ） 分离度
1 3.415 73.635 12.445 5.371
2 3.798 86.339 1.986 1.574
3 3.948 91.255 10.798
0.872
8
10
1214
信号
0.01%
3.948
3.415
信号值（
mAu
）
时
间（
min
）
0.001%
3.972
3.813
3.438
3.288
3.593
图2：含量0.01%的液相色谱图
3、0.1%
序号 保留时间（min ） 峰面积（mAu*s ） 峰高（mAu ） 分离度 1 3.437 639.561 132.655 - 2 3.820 578.256 22.367 1.554 3 3.963 618.367 121.775 0.642
图3：含量0. 1%的液相色谱图
1
2
3
4
5
6
-20
020406080100120140信号值（
mAu
）
时
间（
min
）
0.1%
3.968
3.820
3.437
4、苯增0.1%
序号 保留时间（min ） 峰面积（mAu*s ） 峰高（mAu ） 分离度 1 3.428 721.86 274.169 - 2 3.813 1436.477 26.776 1.587 3 3.962 709.341 122.955 0.652
图4：苯增0.1%的液相色谱图
5、1%
序号 保留时间（min ） 峰面积（mAu*s ） 峰高（mAu ） 分离度
1 3.438 14229.737 1685.464 1.546
2 3.800 13768.57
3 1386.901 1.337 3 3.967 17818.787 1690.934
0.457
1
2
345
6
050
100
150
200
250
300
信号值（
mAU
）
时
间（
min
）
苯
增
0.1%
3.428
3.813
3.962
2.402
1
2
3
4
5
6
-200
0200
40060080010001200140016001800
信号值（
mAU
）
时
间（
min
）
1%
3.438
3.800
3.967
图5：含量0.001%的液相色谱图
序号浓度% 苯峰面积（mAu*s）甲苯峰面积（mAu*s）
1 0.001 1.485 9.435
2 0.01 86.339 91.255
3 0.1 578.256 618.367
4 1 13768.573 17818.787
5 待测1436.477 709.341
苯
甲苯
峰
面
积
（
mAU*s
）
含量（%）
图6：含量与峰面积的标准曲线图
已知待测样中加入了0.1%的标样，其苯的峰面积为1436.477（AU*s），甲苯的峰面积为709.341（AU*s）。

从图6中找出对应的苯含量为0.123（%），甲苯为0.0623（%）。

七、思考题：
（1）若进样之后，没有样品峰出现，有哪些可
能的原因？
答：仪器漏液；分析时间过短；进样量少、样品浓度低等
（2）与气相色谱柱相比，为何液相色谱柱一般都很短？
答：高效液相色谱柱采用的填料粒径很小，常规5-20um，填料还有涂层、键合物等，这样物质在经过色谱柱的时候分配的次数就相当多了。

气相色谱柱的填料粒径较大，或是无填料，与液相色谱柱比较起来的话，气相的色谱柱单位长度的理论塔板数要远远低于液相，为了达到比较理想的分离效果，要求理论塔板数要达到一定的数量，因此气相的色谱柱一般都比高效液相的色谱柱长得多。

（3）为了提高液相色谱的分离效果，可采取哪些有效措施？
答：1.增加色谱柱长度；2.更换扩散性较差的溶剂；3.延长分离时间。

八、实验小结
一开始我以为不会难做,就像以前做物理实验一
样,做完实验,然后两下子就将实验报告做完.直到做完测试实验时,我才知道其实并不容易做,但学到的知识与难度成正比,使我受益匪浅.。