迷迭香水提液对大鼠脑缺血再灌注后SOD和·OH的影响

迷迭香水提液对大鼠脑缺血再灌注后SOD和OH的影响
黄宏妙;李灵;王勤;郭占京;周雪梅
【摘要】[Objective] To investigate the inhibitory effect of the aqueous extract of rosemary on superoxide dismutase (SOD) and hydroxyl radical (·OH) activity in the rats with whole cerebral ischemia reperfusion injury. [ Method ] 50 SD male rats were randomly divided into five groups as followings normal group, model group, rosemary group (10, 30 and 50
g/kg as low, moderate and high dose respectively). The model of the whole cerebral ischemia reperfusion injury was established by four-vessel occlusion (4-VO) after the continued intragastric administration of rosemary for seven days- Three hours after the establishment of models, the rats were sacrificed. The activities of SOD and the inhibitory action
of ·OH in the brain and liver tissues were determined by the colorimetric methods. [Result] Compared with the model groups, the activity of SOD and the inhibitory action of ·OH in the cerebral and hepatic tissues were enhanced remarkably (P<0.05 or P<0.01) in all doses of rosemary , and presented a positive dose-effect relation. The effect was the best with 50
g/kg rosemary. [Conclusion] Aqueous extract of rosemary had protective effects on the whole cerebral ischemia reperfusion injury in rats, and the mechanism may be involved in oxidative stress.%[目的]研究迷迭香水提液对
大鼠脑缺血再灌注损伤后超氧化物歧化酶(SOD)活力和羟自由基(·OH)抑制能力的
影响.[方法]取健康SD雌性大鼠50只,采用4-血管阻断(4 - VO)方法建立全脑缺血再灌注动物模型,造模前灌胃给药7d,造模后3 h取材,利用分光光度法检测大鼠肝、
脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和羟自由基(·OH)抑制能力.[结果]与模型组比较,迷迭香水提液各剂量组均能显著提高大鼠各组织中SOD活力(P＜0.01)和·OH 抑制能力(P＜0.05或P＜0.01),并存在一定的量效关系,以高剂量组(50 g/kg)效果最佳.[结论]迷迭香水提液对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与改善氧化应激状态有关.
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2012(040)017
【总页数】2页(P9262-9263)
【关键词】迷迭香(Rosmarinus officinalis L.);脑缺血再灌注;超氧化物歧化酶(SOD);羟自由基(·OH)
【作者】黄宏妙;李灵;王勤;郭占京;周雪梅
【作者单位】广西中医学院药学院,广西南宁530001;广西中医学院药学院,广西南宁530001;广西中医学院药学院,广西南宁530001;广西中医学院药学院,广西南宁530001;广西中医学院药学院,广西南宁530001
【正文语种】中文
【中图分类】S567
迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)别名艾菊，为唇形科(Lamiaceae)迷迭香属(Rosmarinus)多年生常绿小灌木［1］，原产于地中海沿岸地区，1981年由中国科学院植物研究所北京植物园引入我国。

迷迭香在云南、贵州、广西、海南和新疆等地都有大面积栽种［2］。

迷迭香是目前公认的具有较高抗氧化作用的植物，其抗氧化作用强于咖啡酸、绿原酸和叶酸等，且安全无毒［3］。

目前，对于其抗氧
化性的研究主要集中在食品添加剂方面。

笔者通过观察迷迭香对脑缺血损伤大鼠超氧化物歧化酶(SOD)活力和羟自由基(·OH)抑制能力的影响，考察其体内抗氧化作用，探讨迷迭香对急性脑损伤的保护作用，以期为迷迭香的进一步开发利用提供依据。

1.1.1 研究对象。

迷迭香，采于广西巴马县，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为唇形科植物迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)。

1.1.2 主要仪器。

紫外－可见分光光度计UV-160，购自日本shimadzu公司;江弯-Ⅰ型C通用立体定向器，购自第二军医大学;TGL-16型台式高速冷冻离心机，购自上海安亭科学仪器厂。

1.1.3 主要试剂。

双缩尿试剂，购自南京建成生物工程研究所，批号:20090416;羟自由基(·OH)试剂测试盒，购自南京建成生物工程研究所，批号:20101012;超氧化物歧化酶(SOD)，购自南京建成生物工程研究所，批号:20100507。

1.1.4 试验动物。

健康SD大白鼠50只，雌性，体重(190±10)g，由广西中医学院实验动物中心提供。

1.2.1 迷迭香水提液的制备。

将干燥迷迭香剪成1～2 cm的小段，分别称取干燥药材小段150.00、450.00 和750.00 g，按料液比1∶8(g/ml)分别加入纯净水，浸泡3 h，文火加热煮沸30 min，滤出水煎液，继续分别按料液比1∶6(g/ml)加入纯净水，再煮1次，合并2次水煎液，浓缩至150 ml，即得浓度为1、3和5
g/ml的样品溶液。

1.2.2 动物分组与给药。

取健康SD雌性大白鼠50只，随机平均分5组，即:正常组、模型组和迷迭香水提液低、中、高剂量给药组(10、30和50 g/kg)，灌胃给药;正常组和模型组给予等量生理盐水(10 ml/kg)，灌胃7 d后进行造模试验。

1.2.3 全脑缺血再灌注模型的建立。

模型组和给药组采用改良的Pulsineli 4－血管阻断(4－VO)方法［4］建立全脑缺血模型，具体操作为:用浓度2%的戊巴比妥钠
按45 mg/kg腹腔注射麻醉，用立体定向器定位头颅，剥离暴露左右椎动脉，电
凝阻断，缝合;再于背部定位，分离双侧颈总动脉，挂线结扎，造成完全缺血。

15 min后，放开左右颈总动脉，形成脑缺血再灌注模型，常规缝合，3 h后处死大鼠;正常组不作处理。

1.2.4 组织匀浆的制备。

造模后，立即断颅处死小鼠，取脑、肝等组织，用浓度
0.154 mol/L的NaCl冰水溶液洗净，分离组织包膜，快速用滤纸吸干，准确称取各组织1.000 g，按1∶9(g/ml)加入浓度 0.154 mol/L NaCl冰水溶液，在 3 000 r/min速度下进行匀浆5 min，制成浓度10%的匀浆，然后用高速低温离心机离
心(3 000 r/min，离心20 min)，取上清液置冰箱内4℃保存，备用。

1.2.5 蛋白质、·OH和SOD含量的测定。

分别参照蛋白定量(考马斯亮蓝法)测试盒、·OH测试盒、SOD测试盒说明书进行测定。

1.2.6 统计方法及软件。

数据用¯x±s表示，采用组间t检验，用中国医学百科统计软件包(PEMS V2.1)进行统计分析，P＜0.05有统计学意义。

2.1 迷迭香水提液对大鼠脑、肝组织中羟自由基(·OH)抑制能力的影响由表1可知，大鼠全脑缺血再灌注手术后，·OH抑制能力均明显下降(P＜0.05)，表明脑缺血再
灌注后大鼠机体损害较大，致使大鼠器官组织的氧化性物质增多，羟自由基抑制能力下降。

而迷迭香水提液各剂量给药组·OH抑制能力均显著高于模型组(P＜0.05
或P＜0.01)，说明迷迭香水提液能提高脑缺血再灌注损伤后肝、脑组织的羟自由
基抑制能力，保护组织器官的正常机能。

同时通过不同剂量给药组对羟自由基抑制能力的组间比较，发现不同剂量给药组在肝组织中的羟自由基抑制能力有显著性差异(P＜0.01)，说明迷迭香水提物对提高大鼠肝器官的羟自由基抑制能力有量效关系，以高剂量(50 g/kg)给药组的效果最好;而在脑组织中没有显著性差异。

2.2 迷迭香水提液对大鼠脑、肝组织中超氧化歧化酶(SOD)活性的影响 SOD是机
体中重要的抗氧化酶，是自由基清除系统的重要组成成分。

由表2可知，大鼠脑
缺血再灌注手术后，SOD活性明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，说明脑缺血再灌注后超氧阴离子自由基增多，抗氧化能力降低。

而迷迭香水提液各剂量给药组的SOD活性比模型组明显升高(P＜0.01)，说明迷迭香水提液能提高脑缺血再灌注损伤后SOD活力，减轻对肝、脑组织的损伤;并且通过各剂量组间比较发现，高剂量组(50 g/kg)的SOD活性明显高于中剂量组和低剂量组(P＜0.05)，表明存在一定的量效关系，高剂量组(50 g/kg)的效果最好。

脑缺血时，脑积蓄的儿茶多酚和多巴胺等能多途径地产生自由基，还可以不断诱发机体产生新的自由基或活性氧［5］。

大鼠脑缺血再灌注的急性期可产生大量的自由基，其中包括超氧阴离子自由基、羟自由基(·OH)及其活性衍生物H2O2等，以羟自由基化学性质最活泼。

羟自由基能杀死红细胞，降解DNA、细胞膜和多糖化合物，继而又发现许多由他所致有害效应当加入羟自由基的抑制剂后会明显降低，所以研究羟自由基的抑制剂对研究某些病变原因、衰老机理的揭示具有重大意义［6］。

并且在大鼠脑缺血再灌注的急性期产生大量自由基的同时，消耗了SOD 而使其活性下降，SOD能催化发生歧化反应，在体内形成一套解毒系统，对机体起保护作用［7］。

研究结果表明，在脑缺血再灌注过程中，大鼠脑、肝组织中的SOD的活力和羟自由基抑制力都降低，导致大量自由基产生而对组织造成损伤。

而灌喂迷迭香水提液后，大鼠的脑、肝组织中·OH抑制能力和SOD的活力都有明显地提高。

表明迷迭香水提液对缺血性脑损伤具有一定的保护作用。

【相关文献】
［1］江苏新医学院.中药大辞典(下册)［K］.上海:上海科技出版社，1992:1738 －1739.
［2］屠鹏飞，徐占辉，郑家通，等.新型资源植物迷迭香的化学成分及应用［J］.天然产物研究与开发，1998，10(3):62.
［3］CHEN J H，HO C T.Antioxidant activities of caffeic acid and its relatedhydroxycinnamic acid compounds［J］.J Agric Food Chem，1997，45(7):2374 －2378.
［4］PULSINELI W A，BRIELEY J B.A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat［J］.Stroke，1979，10(3):267.
［5］田有勇.单胺类神经递质与脑缺血［J］.卒中与神经疾病，1999(6):23－25.
［6］张冲，陈四利，冯玉红，等.迷迭香水溶性成分清除·OH自由基活性研究［J］.时珍国医国药，2008，19(5):1117 －1118.
［7］张丽萍，王爱华，张秀清.脑缺血再灌注损伤对血清及脑SOD、MDA、NO、NOS 的影响［J］.齐鲁医学检验，2003，14(2):57.。