牛奶中蛋白质含量的测定---- 凯氏定氮法

牛奶中蛋白质含量的测定
---- 凯氏定氮法
一：实验目的：掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理
学会凯氏定氮法的操作技术
二：实验原理：◆蛋白质的含氮量较恒定，一般为16%，上下略有浮动
◆N/16%=N*6.25=蛋白质的含量
◆样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳
和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨
与硫酸结合成硫酸铵。

然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收，
再以标准盐酸溶液滴定，测出释放的氨含量，并计算氮素含量，
再乘以6.25即为蛋白质的含量。

◆整个过程分三步：消化、蒸馏和吸收、滴定
1：消化：蛋白质+ H2SO4 →（NH4)2SO4 + SO2↑+ CO2
↑+ H2O
瓶颈45度角倾斜
2：蒸馏：消化液+ 氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气
2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3 ↑＋Na2SO4 ＋
2H2O
3：吸收与滴定（1）用4%硼酸吸收
（2）用盐酸标准溶液滴定
（3）混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿混合
指示剂）
指示剂：红色———→绿色———→红色
（酸）吸收（碱）滴定（酸）
3NH3 + H3BO3→(NH4)3BO3
(NH4)3BO3+ 3HCl →3NH4Cl + H3BO3
三：实验步骤
1、消化：准确量取牛奶0.5mL，移入干燥的凯氏烧瓶中（勿粘附在瓶壁
上），加入0.2g硫酸铜、0.3g硫酸钾、10mL浓硫酸，小心摇匀，
于通风橱内消化（先小火，待炭化完全后，加大火力至溶液呈蓝
绿色），冷却至室温，定容至25mL。

同时消化一份空白试剂为对照。

2、蒸馏、吸收
◆取40mL硼酸溶液于锥形瓶中，加2d混合指示剂，置于冷凝管下端，
为接受瓶。

◆量取5mL样品消化液由加料口加入反应室，用5mL蒸馏水冲洗加
料口，再加入40%NaOH10mL（溶液呈蓝褐色），不要摇动，立即封
口。

◆夹紧缓冲管下口，开始蒸馏，当接收瓶溶液颜色变化时，继续蒸馏
3-5min，下降接收瓶，使硼酸液面离开冷凝管口，继续蒸馏1min，
用蒸馏水淋洗浸入硼酸的管外壁，移出接收瓶，滴定。

3、滴定
◆用0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定接收瓶内的反应液
◆同时做空白对照
×5 W—蛋白质的质量分数，%；
c—盐酸标准液的浓度，mol/L；
1—空白滴定消耗标准盐酸液量，mL；
V2—样品滴定消耗标准盐酸液量，mL；
m—样品体积，mL；
0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol；
F—蛋白质系数。