198例小儿重症肺炎病原学分析

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198例小儿重症肺炎病原学分析
孙永烽1,2,杨勤1 ,陈敏2
,靳蓉2,谢汝佳1,徐慧2,程星2,王琦2(1.贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室,贵州贵阳 550004;2.贵阳市儿童医院呼吸科,贵州贵阳 550003)
[摘 要]目的:分析198例小儿重症肺炎患儿的病原学特点。

方法:采集100例小儿重症肺炎患儿痰、血清
标本,98例小儿重症肺炎患儿痰、肺泡灌洗液及血清标本,采用病原菌培养、免疫荧光法检测7种呼吸道病毒,采用实时定量PCR(qPCR)法检测支原体和衣原体并分析其病原菌分布特点。

结果:198例患儿中,病原检测阳性者1
69例,前3位的依次为单纯细菌感染、混合感染及单纯病毒感染;革兰阴性杆菌以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌为主,革兰阳性球菌以肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌为主,病毒感染以呼吸道合胞病毒为主,混合感染以细菌合并支原体和细菌合并病毒感染为主;婴幼儿多发生单纯细菌或病毒感染,婴儿以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染为主,病毒以呼吸道合胞病毒和腺病毒感染最常见,其年龄分布差异有统计学意义(P<0 05);3~7岁儿童单纯支原体感染和细菌合并支原体混合感染多见;冬、春季患儿对呼吸道合胞病毒和腺病毒易感,其季节分布差异有统计学意义(P<0 05)。

结论:小儿重症肺炎多发生于婴幼儿,主要以细菌和病毒感染为主;病毒感染冬和春季易发,肺炎支原体感染在学龄前儿童中多见;混合感染不容忽视。

[关键词]儿童;病原;痰;支气管肺泡灌洗液;血液;细菌;重症肺炎;呼吸道病毒
[中图分类号]R725.6 [文献标识码]A [文章编号]1000 2707(2020)03 0345 05
DOI:10.19367/j.cnki.1000 2707.2020.03.019
EtiologicalAnalysisof198ChildrenwithSeverePneumonia
SUNYongfeng1,2,YANGQin1,CHENMin2,JINRong2,XIERujia1,XUHui2,CHENGXing2,WANGQi

(1.DepartmentofPathophysiology,CollegeofBasicMedicine,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,
China;2.DepartmentofRespiration,GuiyangChildren'sHospital,Guiyang550003,Guizhou,China)
[Abstract]Objective:Toanalyzetheetiologycharacteristicsof198childrenwithseverepneumonia.Methods:Sputumandserumsampleswerecollectedfrom100childrenwithseverepneumonia,andsputum,alveolarlavagefluid,andserumsamplesfrom98childrenwithseverepneumonia.Thesesampleswereculturedusingbacterialculturingtechniquetoformcolonies.Seventypesofrespiratoryvirusesweredetectedinpurifiedcoloniesbyimmunofluorescence.MycoplasmaandchlamydiaweredetectedbyqPCR.Thedistributioncharacteristicsofpathogenicbacteriawereanalyzed.Results:Of
the198children
,169werepathogenpositive.Thetopthreeinfectionsweresimplebacterialinfection,mixedinfectionandsimpleviralinfection.IdentifiedGram negativebacilliweremainlyKlebsiellapneumoniaeandEscherichiacoli,whileGram positivecocciaremainlyStreptococcuspneumoniaeandStaphylococcusaureus.Identifiedviralinfectionsaremainlyrespiratorysyncytialvirus.Mixedinfectionsaremainlybacterialcombinedwithmycoplasmaorviralinfection.Infantsandyoungchildren
werepronetobacterialandviralinfections.Amongtheinfantsunder1yearold
,K.pneumoniaeandEscherichiacoliwerethemostcommonbacterialinfections,whilerespiratorysyncytialvirusand
adenoviruswerethemostcommonviralinfections.Theagedistributionwasstatisticallysignificant
(P<0.05).Mycoplasmainfectionandmixedbacterialplusmycoplasmainfectionwerecommonin
第45卷 第3期2020年3月 贵州医科大学学报JOURNALOFGUIZHOUMEDICALUNIVERSITY Vol.45 No.3
2020.3
[基金项目]贵州省科学技术基金[黔科合
LH(2015)7029];贵阳市人才创新创业资助项目[筑人才办合同字(2015)18];贵州省卫生厅科学技术基金

gzwkj2013-1-016) 通信作者
E mail:qinyang@gmc.edu.cn;chenmin911565397@qq.com
childrenaged3~7yearsold.Childrenweresusceptibletorespiratorysyncytialvirusandadenovirusinwinterandspring,andtheseasonaldistributionwasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion:Bacterialandviralinfectionsarethemaincausesofseverepneumoniaininfantsandyoungchildren.Childrenareeasilyinfectedwithvirusesinwinterandspring.Mycoplasmapneumoniaeinfectionismorecommoninpreschoolchildren.Mixedinfectionscannotbeignored.
[Keywords]children;pathogen;sputum;bronchoalveolarlavagefluid;blood;bacteria;severepneumonia;respiratoryvirus
小儿重症肺炎是儿科临床的常见病及多发病,也是小儿死亡的重要原因之一,我国每年约有648万肺炎患儿,其中约有10%属于小儿重症肺炎,共死亡率可达5 7%[1]。

小儿重症肺炎不但使患儿承受着生理痛苦,也给患儿家庭带来了沉重的经济负担,成为一个亟待解决的问题。

小儿重症肺炎的病原体种类很多,有细菌、病毒及肺炎支原体等,研究表明小儿重症肺炎的病原不仅跟患儿的年龄和季节有关,还存在地区间的差异[2],明确病原体类型对于临床治疗和改善小儿重症肺炎患儿的预后有着十分重要的意义[3]。

本研究收集2016年9月-2017年9月某院收治的198例小儿重症肺炎患儿的痰、肺泡灌洗液及血清样本,检测病原菌以期了解小儿重症肺炎的病原学分布特点,现报告如下。

1 资料与方法
1 1 一般资料
选取2016年9月-2017年9月收治的198例小儿重症肺炎患儿作为研究对象,100例收集痰和血清标本,98例收集痰、肺泡灌洗液及血清标本。

所有患儿符合文献[4]对小儿重症肺炎的诊断标准:在社区获得性肺炎的基础上存在以下任何1项,拒食或脱水症、意识障碍、呼吸频率明显增快(婴幼儿≥70次/min、年长儿≥50次/min,除外发热或哭吵等因素)、发绀及呼吸困难,影像学检查提示多肺叶受累或病变浸润范围多2/3肺野、存在胸膜腔积液、未吸氧时脉搏血氧饱和度<92%,存在肺外并发症;排除异物、支气管哮喘、过敏性非感染性肺炎、结核感染及寄生虫感染等呼吸道疾病,排除存在免疫功能缺陷、或长期使用糖皮质激素或免疫抑制剂者,排除院内获得性肺炎或各种全身疾病引起的肺疾病患儿。

198例患儿中,男95例、女103例,年龄1个月~15岁、平均(3 2±0 6)岁。

1 2 方法
1 2 1 标本采集 患儿于入院24h内,采用一次性无菌吸痰管,无菌操作吸取鼻咽分泌物1~2mL移入无菌生理盐水试管中,或经支气管镜取支气管肺泡灌洗液,机械通气患儿从气管导管负压吸取痰液置于无菌试管中,30min内送检,均为合格样本(鳞状上皮细胞<10个/低倍视野,白细胞>10~25个/低倍视野);采集静脉血2mL储存于2℃冰箱中,用于肺炎支原体、或肺炎衣原体血清抗体检测。

1 2 2 标本处理 将采集的痰和肺泡灌洗液接种至哥伦比亚血平板、中国蓝琼脂平板,放置35℃培养箱中培养18~24h,分离纯化培养出得菌落,采用法国生物梅里埃公司VITEK Copact全自动细菌、真菌分析仪进行鉴定及药敏试验。

采用免疫荧光检测所有样本中呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、流感病毒A型(IFV A)、流感病毒B型(IFV B)、副流感病毒Ⅰ型(HPIV Ⅰ)、副流感病毒Ⅱ型(HPIV Ⅱ)、副流感病毒Ⅲ型(HPIV Ⅲ)等7种呼吸道病毒,试剂盒购自上海贝西生物科技有限公司。

采用实时定量PCR(qPCR)法检测所有样本中支原体(MP)和衣原体(CP)基因,拷贝数≥5×102提示有感染,试剂盒采购于中山大学达安基因股份有限公司。

采用被动凝集法检测样本中肺炎支原体和肺炎衣原体IgM≥1∶160,提示有感染,试剂盒采购于富士瑞必欧株式会社。

1 3 观察指标
(1)分析198例小儿重症肺炎患儿感染病原体的总体分布;(2)将患儿分为<1岁组、1~3岁组、3~7岁组及7~15岁组,分析各组患儿感染病原体的分布情况;(3)分析患儿在不同季节(春、夏、秋及冬)感染病原体的分布情况。

1 4 统计学方法
使用SPSS22 0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两两比较采用t检验,计数资料以率(%)表示,数据比较采用进行χ2检验,P<0 05表示差异有统计学意义。

贵州医科大学学报 45卷 
2 结果
2 1 感染病原体分布
198例患儿中,病原体检测阳性者169例,阳性率为85 35%;占比较高的感染类型分别为单纯细菌感染、混合感染及单纯病毒感染,混合感染中以细菌合并支原体和细菌事并病毒为主;主要感染的革兰阴性菌有肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌,主要感染的革兰阳性菌有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌,主要感染的病毒有RSV、ADV。

见表1。

表1 169例小儿重症肺炎患儿感染病原体分布Tab.1 Thedistributionofinfectiontypesin169childrenwithseverepneumonia
 感染类型n分类占比/%总占比/%
单纯细菌59100 00(59/59) 34 91(59/169) 肺炎克雷伯菌1118 64(11/59)6 51(11/169) 大肠埃希菌915 25(9/59)5 33(9/169) 鲍曼不动杆菌610 17(6/59)3 55(6/169) 铜绿假单胞菌46 78(4/59)2 37(4/169) 嗜麦芽窄食单胞菌35 08(5/59)1 78(3/169) 流感嗜血杆菌23 39(2/59)1 18(2/169) 阴沟肠杆菌11 69(1/59)0 59(1/169) 产气肠杆菌11 69(1/59)0 59(1/169) 卡他莫拉菌11 69(1/59)0 59(1/169) 肺炎链球菌1322 03(13/59)7 69(13/169) 金黄色葡萄球菌711 86(7/59)4 14(7/169) 表皮葡萄球菌11 69(1/59)0 59(1/169)单纯病毒42100 00(42/42)24 85(42/169) RSV2047 62(20/42)11 83(20/169) ADV1228 57(12/42)7 10(12/169) IFV A511 90(5/42)2 96(5/169) IFV B24 76(2/42)1 18(2/169) HPIV Ⅰ24 76(2/42)1 18(2/169) HPIV Ⅱ12 38(1/42)0 59(1/169) HPIV Ⅲ00 00(0/42)0 00(0/169)单纯真菌7100 00(7/7)4 14(7/169) 白假丝酵母菌571 43(5/7)2 96(5/169) 中间假丝酵母菌228 57(2/7)1 18(2/169)非典型病原体14100 00(14/14)8 28(14/169) 单纯肺炎支原体1071 43(10/14)4 73(10/169) 单纯肺炎衣原体428 57(4/14)3 55(4/169)混合感染47100 00(47/47)27 81(47/169) 细菌+支原体1634 04(16/47)9 47(16/169) 细菌+病毒1225 53(12/42)7 10(12/169) 病毒+支原体919 15(9/42)5 33(9/169) 病毒+病毒510 64(5/42)2 96(5/169) 细菌+病毒+支原体48 51(4/42)2 37(4/169)2 2 不同年龄患儿的病原学分布
结果显示,各年龄组患儿在细菌、病毒及支原体感染比较,差异有统计学意义(P<0 05);在真菌和混合感染比较,差异无统计学意义(P>0 05);单纯支原体和混合感染在3~7岁组检出率较高,见表2。

进一步分析发现0~3岁婴幼儿发生单纯细菌和病毒感染感染率最高,分别为84 74%和80 96%,高于其它年龄,差异有统计学意义(P<0 05);肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染多见婴儿,其年龄分布差异具有统计学意义(χ2=12 000、10 493,P<0 05);肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌感染在任何年龄均可发病,分布差异无统计学意义(χ2=0 587、5 185,P>0 05);各年龄组均以RSV病毒感染最常见,占比57 69%(45/78);<1岁的婴儿易感RSV和ADV病毒,具有明显年龄分布差异(χ2=17 074、7 562,P<0 05),见表3及表4。

2 3 不同季节病原学分布
如表5显示,单纯病毒感染具有明显的季节分布差异,冬、春季节发生率最高,与夏、秋季比较有统计学意义(P<0 05)。

RSV、ADV病毒感染在季节上有统计学意义(χ2=10 924、12 696,P<0 05),冬、春季高达66 18%(45/68),夏季最低为10 29%(7/68),其中以RSV病毒的季节分布差异最大,发生率最高的为冬季37 77%(17/45),发生率最低为夏季13 3%(6/45)。

细菌感染、支原体、真菌感染及混合感染随季节的不同,其感染率差异均无统计学意义(P>0 05)。

3 讨论
本研究的病原阳性率为85 35%,略高于安徽、湖南地区的相关报道[5-6]。

本研究以单纯细菌感染、单纯病毒感染、混合感染为主,而真菌感染、支原体感染和衣原体感染则较少,与我国一些地区报道儿童重症肺炎病原学总体分布情况相似[7]。

与本地区以往研究报道比较[8],细菌仍以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌为主,病毒仍以RSV、ADV病毒为主,但单纯细菌感染及细菌合并支原体混合感染率比例有所上升,分别为34 91%和9 47%,以往分别为28%和2 67%,混合感染以细菌合并支原体感染占比最高34 04%,其原因可能为纳入病例时期不同,抗菌药
 3期孙永烽等 198例小儿重症肺炎病原学分析
表2 不同年龄小儿重症肺炎患儿的病原学分布
Tab.2 Pathogenicdistributionofchildrenwithseverepneumoniaatdifferentages
 组别n细菌(n=59)病毒(n=42)支原体(n=10)衣原体(n=4)真菌(n=7)混合(n=47)<1岁8035 2712312
1~3岁3515(1) 7(1)3019
3~7岁37 7(1)(2) 4(1)(2)40121
7~15岁17 2(1)(2)(3) 4(1)(2)(3)2225
 χ211 248 7 6514 327-3 45919 263 P<0 01<0 01>0 05->0 05>0 05
注:“-”表示不适宜进行统计学分析;(1)与<1岁比较,P<0 01;(2)与1~3岁比较,P<0 01;(3)与3~7岁比较,P<0 01。

表3 不同年龄小儿重症肺炎患儿的细菌感染分布
Tab.3 ThedistributionofbacterialinfectioninchildrenwithseverepneumoniaatdifferentAges
年龄n肺炎链球菌
(n=25)
金黄色葡萄
球菌(n=9)
肺炎克雷伯
菌(n=19)
大肠埃希菌
(n=16)
鲍曼不动
杆菌(n=7)
铜绿假单
胞菌(n=5)
流感嗜血
杆菌(n=3)
嗜麦芽窄食单
胞菌(n=3)
<1岁32631082210
1~3岁1872 4(1) 1(1)1021
3~7岁2050 4(1)(2) 5(1)(2)2301
7~15岁1774 1(1)(2)(3)
2(1)(2)(3)2001
 χ2 0 587 5 18512 10 493----
 P>0 05>0 05<0 01<0 05----
注:“-”表示不适宜进行统计学分析;(1)与<1岁比较,P<0 05;(2)与1~3岁比较,P<0 05;(3)与3~7岁比较,P<0 05。

表4 不同年龄小儿重症肺炎患儿的病毒感染分布
Tab.4 Thedistributionofviralinfectioninchildrenwithseverepneumoniaatdifferentages
 年龄nRSV(n=45)ADV(n=23)IVA(n=5)IVB(n=2)PIV(n=3)
<1岁352010311
1~3岁21 15(1) 6(1)000
3~7岁14 7(1)(2) 5(1)(2)101
7~15岁8 3(1)(2)(3) 2(1)(2)(3)111
 χ2 17 074 7 562 5 061--
 P<0 01<0 05>0 05--
注:“-”表示不适宜进行统计学分析;(1)与<1岁比较,P<0 05;(2)与1~3岁比较,P<0 05;(3)与3~7岁比较,P<0 05。

表5 不同季节小儿重症肺炎患儿的病原学分布
Tab.5 Pathogenicdistributionofchildrenwithseverepneumoniaindifferentseasons
 季节n细菌(n=59)病毒(n=42)支原体(n=10)衣原体(n=4)真菌(n=7)混合(n=47)春49151441312夏3414 3(1)21113秋3314 6(1)(2)10111冬5316 19(1)(2)(3)32211χ2 14 715 15 467 4 218 3 041 2 907 11 728P>0 05<0 01>0 05- >0 05>0 05注:“-”表示不适宜进行统计学分析;(1)与春季比较,P<0 01;(2)与夏季比较,P<0 01;(3)与秋季比较,P<0 01。

物的广泛应用或广谱抗菌药物的滥用,进而引起细菌病原体谱的变化和耐药菌株数目的增多。

近年来,随着支原体感染率逐年升高,重症肺炎支原体肺炎(MPP)病例也显著增加,机体免疫功能、混合感染及对大环内酯类抗生素的耐药可能参与重症MPP的发生发展[9],国外报道非典型病原体为当地儿童肺炎感染主要病原[10],这可能是本研究中支原体混合感染占比高的原因,因此临床中需警惕
贵州医科大学学报 45卷 
多种病原感染的可能。

本研究还发现单纯细菌阳性率为34 91%,细菌是主要病原,与国内一些研究结果一致[11]。

丁林等[12]研究者报道小儿重症肺炎检出的病原菌中以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌及流感嗜血杆菌为主,本研究与上述研究结果截然不同,检出单纯细菌感染59例,致病菌以革兰阴性杆菌为主,主要有肺炎克雷伯菌(6 87%)、大肠埃希菌(4 58%)、鲍曼不动杆菌(3 82%)及铜绿假单胞菌(3 36%)等,革兰阳性菌以肺炎链球菌(8 55%)和金黄色葡萄球菌(7 79%)为主,与叶继锋等[13]报道一致,提示可能与地域病原流行特点等因素有关。

单纯病毒阳性率为24 85%,单纯支原体检出率为4 73%,分别与陈水文等[14]和陈玉等[15]的报道一致。

从年龄分布来看,<1岁和1~3岁婴幼儿的细菌与病毒感染率更高,其中<1岁的婴儿其细菌与病毒感染率最高(分别为36 7%和44 8%),细菌以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为主,肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌感染在任何年龄均可发病,病毒则以RSV病毒最为常见。

原因可能为年龄较小的幼儿其免疫系统发育不成熟、非特异性免疫功能相对较差,同时本组纳入的病例平均年龄小、病程相对长,大多数患儿院外使用过抗生素。

本研究中肺炎链球菌感染在单纯细菌感染中占22 03%,是小儿重症肺炎的主要感染病原菌,与国内报道一致[16]。

3~7岁在单纯支原体感染高(占40%),与国内报道的结果相接近[17]。

从季节分布来看,单纯病毒感染在冬、春季发生率最高,分别为45 2%和33 3%,以呼吸道合胞病毒为主(为57 6%),与同类研究相比存在一定差异,安建荣[18]对长春市的小儿重症肺炎病原学分布进行了调查,发现小儿重症肺炎以秋季、冬季发生率较高,而夏季的发生率最低,但在病毒分布方面则与本研究相接近,以RSV、ADV病毒为主。

究其原因,可能与地区气候特点有关,本地位于西南部高原地区,属于亚热带湿润性季风气候,在冬春季节时气候潮湿而多数引起小儿重症肺炎的病毒均耐寒不耐热,在冬、春季的存活时间长,进而更易引起感染[19-21]。

综上所述,本次收集的小儿重症肺炎多发生在婴幼儿,病原以细菌为主,肺炎链球菌感染占首位,其次为肺炎克雷伯菌,混合感染不容忽视。

病毒感染检出率以<1岁婴儿及冬春季最高,肺炎支原体检出率以3~7岁年龄组最高,临床应引起重视。

了解其特点,对于临床早期准确判断病原学、针对性选择用药及提高治疗效果具有重要的意义。

但由于本研究样本有限、研究时间短,结果可能会有偏倚,有待以后在工作中通过大样本和多中心数据进一步分析。

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(2020-01-12收稿,2020-02-23修回)
中文编辑:严 征;英文编辑:
冉海勇(上接第349页)
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(2020-01-20收稿,2020-02-28修回)
中文编辑:吴昌学;英文编辑:张启芳
 3期姚念廷等 VPS13A基因突变致舞蹈病-棘红细胞增多症的诊断及家系研究。

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