肠杆菌的培养实验报告

一、实验目的
1. 掌握肠杆菌的培养方法。

2. 熟悉肠杆菌的形态、染色和生化反应。

3. 了解肠杆菌的分离、鉴定和纯化方法。

二、实验原理
肠杆菌属于革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界、人和动物的肠道中。

在实验室中，可以通过培养、染色和生化反应等方法对肠杆菌进行分离、鉴定和纯化。

本实验主要采用普通琼脂培养基进行肠杆菌的培养，通过革兰氏染色观察其形态，通过生化反应进行鉴定。

三、实验材料
1. 肠杆菌菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）。

2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁琼脂培养基、营养肉汤培养基。

3. 试剂：革兰氏染色液、酚红指示剂、葡萄糖、乳糖、甘露醇、氯化钠、硝酸盐
还原剂、葡萄糖氧化酶、吲哚产生试剂、硫化氢产生试剂等。

4. 仪器：高压灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌操
作台等。

四、实验方法
1. 培养基制备
（1）普通琼脂培养基：称取琼脂粉15g，加入500ml蒸馏水，加热溶解后加入10g 氯化钠，调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。

（2）双糖铁琼脂培养基：称取琼脂粉15g，加入500ml蒸馏水，加热溶解后加入
10g氯化钠，调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。

（3）营养肉汤培养基：称取牛肉膏10g，蛋白胨5g，氯化钠5g，加入1000ml蒸
馏水，加热溶解后调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。

2. 肠杆菌培养
（1）将菌种接种于营养肉汤培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

（2）取培养好的菌液，用接种环取少量菌液，接种于普通琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

3. 革兰氏染色
（1）将培养好的菌落用无菌镊子挑取，置于载玻片上。

（2）滴加革兰氏染色液，染色时间为1-2分钟。

（3）水洗、干燥，观察菌落形态。

4. 生化反应
（1）将培养好的菌液接种于双糖铁琼脂培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

（2）观察菌落是否产生红色沉淀，判断葡萄糖和乳糖是否发酵。

（3）观察菌落是否产生硫化氢，判断硫化氢产生试剂是否阳性。

（4）观察菌落是否产生吲哚，判断吲哚产生试剂是否阳性。

五、实验结果
1. 革兰氏染色：菌落呈革兰氏阴性，为杆菌。

2. 生化反应：葡萄糖发酵、乳糖发酵、硫化氢产生、吲哚产生。

六、实验讨论
1. 肠杆菌在普通琼脂培养基上生长良好，表明该培养基适合肠杆菌的培养。

2. 革兰氏染色可以快速、简便地观察肠杆菌的形态，为鉴定提供依据。

3. 生化反应可以进一步鉴定肠杆菌的种类，为临床诊断提供参考。

4. 本实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

七、实验总结
通过本次实验，我们掌握了肠杆菌的培养方法、革兰氏染色和生化反应，了解了肠杆菌的分离、鉴定和纯化方法。

在实验过程中，我们应注重无菌操作，确保实验结果的准确性。

同时，加强对实验原理和方法的掌握，为今后从事相关领域的研究打下基础。