HPLC法测定复方薄荷水杨酸酊中水杨酸的含量

HPLC法测定复方薄荷水杨酸酊中水杨酸的含量
彭敏;汤艳群;梁惠明
【摘要】Objective: To establish an HPLC method to determine salicylic
acid in compound mint and salicylic acid tincture. Methods: A C18 column (150mm×4.6mm,5μm) was used, the column temperature was set at 25℃,the mobile phase was consisted by 0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate(adjusted to pH 3.2 with phosphoric acid)-methanol(58:42),and flow rate was 1.0 ml/min, the detection was conducted at wavelength of 234 nm. Results: The calibration curves were linear in the range of
12.228~28.532μg/ml (r=0.999 9)for salicylic acid.The average recovery of salicylic acid was 100.6% with RSD of 0.39%. Conclusion: This proposed method appeared to be simple , rapid and accurate , and can be used to control the product quality .%目的：建立HPLC法测定复方薄荷水杨酸酊中水
杨酸的含量。

方法：采用C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），以
0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH 至3.2）-甲醇（58：42）为流动相，柱温25℃，流速为1.0mL/min ，检测波长为234nm，进样量为20μl。

结果：水杨酸在12.228～28.532μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，r=0.9999，平均
回收率为100.6%（RSD=0.39%）。

结论：该方法操作简便，准确度和精密度高，适用于该制剂的质量控制。

【期刊名称】《甘肃医药》
【年(卷),期】2015(000)001
【总页数】3页(P9-11)
【关键词】复方薄荷水杨酸酊;水杨酸;高效液相色谱法
【作者】彭敏;汤艳群;梁惠明
【作者单位】529000 广东江门，江门市药品检验所化学室;529000 广东江门，江门市药品检验所生测室;529000 广东江门，江门市药品检验所化学室
【正文语种】中文
复方薄荷水杨酸酊是由水杨酸、薄荷脑、液化苯酚等组成的复方制剂，可以消炎止痒，用于皮肤病瘙痒。

原标准未对水杨酸含量进行控制。

为了对该制剂进行有效的质量监控，本文建立高效液相色谱法来测定复方薄荷水杨酸酊中的水杨酸。

1.1 仪器与试剂日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪，包括LC-20AT高压泵，SPD-M20A紫外检测器，SIL-20A自动进样器；METTLER TOLEDO电子天平。

水杨酸对照品，中国食品药品检定研究院，批号为100106-201104，含量为99.9%。

甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。

复方薄荷水杨酸酊（130608，130710，130805）。

1.2 方法
1.2.1 色谱条件。

色谱柱：Venusil MP-C18色谱柱（150×4.6mm，5μm），柱温：25℃，流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.2）-甲醇（58：42），流速：1.0ml/min，检测波长：234nm，进样量：20μl。

1.2.2 溶液的配制。

①对照品溶液：精密称取水杨酸对照品10mg，置100ml量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

精密量取对照品储备液5ml置25m l量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。

②供试品溶液：精密量取本品1mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。

精密量取上述溶液5m l，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

③空白对照
溶液：按处方组成，将除去水杨酸的其他组分，按供试品溶液方法配制作为空白对照溶液。

2.1 专属性试验取空白溶剂（即流动相）、空白对照溶液与对照品溶液、供试
品溶液分别进样，表明辅料及其他组分对测定组分无干扰。

结果见图1。

2.2 线性关系精密量取对照品储备液
3.0、
4.0、
5.0、
6.0、
7.0ml分别置25ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

按上述色谱条件分别进样，测定峰面积。

以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，回归方程：A=52255C-29366，
r=0.9999。

结果表明：水杨酸在12.228～28.532μg/ml范围内与峰面积线性关
系良好。

2.3 精密度试验取对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，RSD为0.31%，表明精密度良好。

2.4 稳定性试验取同一供试品溶液，于室温下放置，分别在0，2，4，6，8，10，12，24小时测定峰面积，RSD为0.31%。

表明本品在24h内稳定性良好。

2.5 重复性试验选择同一批号的复方薄荷水杨酸酊，按照“2.2.2”平行制备6
份供试品溶液，按上法测定，记录峰面积，6次测定结果的RSD为0.5%，表明该方法重复性良好，适合含量测定的要求。

2.6 回收率试验取上述不含水杨酸的空白对照溶液，加入对照品储备液适量，
使得混合溶液的浓度分别为标示量的80%、100%、120%。

进样，在上述色谱条件下测定水杨酸的含量并计算回收率。

结果见表1。

水杨酸平均回收率100.59%，RSD为0.39%。

结果表明回收率良好。

2.7 样品含量测定取上述方法测定3个批次的供试品，按外标法计算各组分的
含量。

见表2。

复方薄荷水杨酸酊含有水杨酸、薄荷脑、液化苯酚等多种成分。

《中国药典》2010版二部收载的测定水杨酸的方法为中和滴定法，用氢氧化钠滴定液进行滴定。

复方薄荷水杨酸酊中的液化苯酚呈弱酸性，也可以和氢氧化钠滴定液反应，会对水杨酸的测定产生干扰，所以无法用滴定法对水杨酸进行定量。

将水杨酸和苯酚在紫外-可见分光光度仪下进行波长扫描，水杨酸在298nm和
230nm处有最大吸收，在这两个波长处，苯酚也有吸收，所以难以用紫外-可见分光光度法对水杨酸进行快速简便的测定。

本实验采用高效液相色谱法对复方薄荷水杨酸酊中的水杨酸进行含量测定。

波长选用234nm。

苯酚在210nm和270nm处有最大吸收。

虽然水杨酸在230nm处有最大吸收，但是在这个波长处苯酚的吸收较大，不利于测定。

我们在220～
240nm波长段对二者进行考察，发现在234nm处，水杨酸的吸收虽然有所下降，但是苯酚的下降程度更大，二者的吸光度差别最大，而且在此波长处，水杨酸的峰形较好，与其他峰的分离度也较理想，所以选择这个波长作为测定波长。

实验中曾选择不同比例的甲醇-水做流动相［1］，发现水杨酸峰拖尾严重，与杂
质峰的分离度不理想。

后将水相改用磷酸盐缓冲液，根据理论塔板数、保留时间以及与其它峰的分离情况，选择0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.2）-甲醇（58：42）为最佳流动相。

水杨酸因其具有消炎止痒等功能［2］，所以常用在治疗皮肤类疾病的外用制剂中。

但是高浓度水杨酸会引起皮肤过敏、刺痛等不良反应［3］，严重的还会产生水杨酸中毒效应。

复方薄荷水杨酸酊的标准中目前没有对水杨酸的含量进行控制。

考虑到用药的安全性，本实验对该制剂中的水杨酸进行监控，有利于保证产品的质量。

经过方法学考察，表明本文方法具有良好的线性、精密度、稳定性和准确度，为复方薄荷水杨酸酊中水杨酸的质量控制提供了依据。

【Abstr act】Objective:To establish an HPLC method to determine salicylic acid in compound mint and salicylic acid tincture. M ethods:A C18 col umn
（150mm×4.6mm，5μm）was used，the column temperature was set at 25℃，the mobile phase was consisted by 0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate（adjusted to pH 3.2 with phosphoric acid）-methanol（58：42），and flow rate was 1.0 m l/min，the detection was conducted at wavelength of 234 nm.Results:The calibration curves were linear in the range of 12.228～28.532μg/m l（r=0.999 9）for salicylic acid.The average recovery of salicylic acid was 100.6%with RSD of 0.39%.Conclusion:This proposed method appeared to be simple，rapid and accurate，and can be used to control the product quality.
【相关文献】
［1］李自明，闵敏，贺国芳.高效液相色谱法测定复方水杨酸散中水杨酸的含量［J］.医药导报，2010，29（10）：1352-1353.
［2］朱亚丽.复方水杨酸洗剂药效学研究［J］.中国药业，2012，21（11）：7-8.
［3］张银志，田秀梅，余雯静，等.化妆品中致敏成分及其检测方法研究进展［J］.日用化学工业，2011，41（4）：294-296.。