莲品种SRAP指纹图谱的构建及遗传多样性分析
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对各材料各引物扩增情况做统计，有带记为 1，无 带记为 0，缺失记为 2。作矩阵图输入计算机，应用平均 距离法进行聚类分析并采用 NTSYS-pc（Version 2.1）软 件处理，建立聚类图。 2 结果
主要产区在 20 世纪初期广泛应用于生产的优异材料， 这些材料至今在莲育种中仍被研究者直接或者间接利 用。材料取自广昌县白莲科学研究所博览园内。这 40 份材料包括野生莲、全国各地传统品种、广昌县现栽培 品种和花莲品种，材料详细信息（见表 1）。
27 京广 2 号
是 诱变种（离子注入诱变） 江西广昌
引自泰国 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭
引自安徽 引自安徽 引自安徽
1.2 样品制备 采集莲幼嫩叶片置于塑料袋中（自封袋），再加入
变色硅胶，摇动使叶片与硅胶充分均匀地接触，一般来 说，硅胶与叶片质量比应为 10:1，以保证叶片在 12h 内 干燥，一旦发现硅胶从深蓝色变为粉红色，及时更换硅 胶，干燥的叶片材料在室温下保存即可。 1.3 DNA 的提取
28 星空牡丹
是
杂交种
江西广昌
29
古代莲
是
野生型
引自湖北武汉
30 中南海古莲 是
野生型
引自湖北武汉
31 泰国野生莲Ⅵ 是
野生型
引自泰国
32 普者黑白莲 是
野生型
引自湖北武汉
33
舞妃莲
是 杂交种（中美杂交） 引自北京
34 白洋淀红莲 是
野生型
引自江苏南京
表 1 实验材料
35
桌上莲
是
传统地方品种
引自北京
25 肇源野生莲 否
26
百叶莲
是
野生型 野生型 野生型 野生型 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 野生型 野生型 野生型 传统地方品种
引自安徽 引自安徽 引自安徽 引自安徽 引自浙江武义 引自浙江武义 引自福建建宁 引自福建建宁 引自北京 引自北京 引自北京 江西广昌
1.1 材料来源 本次试验的 40 份莲品种（材料）是来自国内外莲
是 诱变种（离子注入诱变） 江西广昌
4 泰国野生莲Ⅳ 是
野生型
引自泰国
40 建选 17 号 是
杂交种
引自福建建宁
5 泰国野生莲Ⅴ 否
6
寸三莲
是
7
芙蓉莲
是
8
白湘莲
是
9
红湘莲
是
10 岳阳野生莲 是
11 雪湖贡莲
否
12 南埂野莲
是
13
飘花莲
否
野生型 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种
野生型 野生型 野生型 野生型
试验研究
现代园艺
2013 年第 2 期
莲品种 SRAP 指纹图谱的构建及遗传多样性分析
欧阳冬梅 1 游永宁 2 刘 凰 1 徐金星 3 刘春华 3 邹东旺 1 杨良波 3 唐记平 1 胡中立 2 谢克强 1* （1 江西省广昌县白莲产业发展局 344900；2 武汉大学生命科学学院；3 江西省广昌县白莲科学研究所）
选取上述硅胶干燥的叶片 30mg，用液氮磨成粉
輥 輴 訛
2013 年第 2 期
现代园艺
试验研究
状，再用 DNA 提取试剂盒提取植物基因组 DNA。DNA 质量检测用 1%的琼脂糖凝胶进行，电泳缓冲液为 0.5×TBE，电压 100V，电泳 30min。 1.4 SRAP 分析
PCR 扩增反应总体积为 15μl，反应混合液中包 括 ：50ng/μl DNA 模 板 1μl，10 ×PCR buffer 1.5μl， 10mmol.L-1dNTPs，0.6μl, 10mmol.L-1 上 下 游 引 物 各 0.5μl，2U/μl Taq DNA 聚合酶 0.5μl，不足部分用无 菌水补足。
PCR 扩 增 反 应 程 序 如 下 ，95℃ 5min；95℃ 1min，35℃ 1min，72℃ 1min，5 个循环；95℃ 1min，50℃ 1min，72℃ 1min，35 个循环；72℃延伸 10min，温度降 到 4℃即完成扩增。
扩增产物加上 10μl 的上样缓冲液 94℃预变性 5min，采用 6%的变性聚丙烯酰胺凝胶，0.5×TBE 缓冲 液，65W 恒功率电泳 1.5h。银染检测电泳结果。 1.5 SRAP 数据处理
：利用 SRAP 标记对来自国内外莲主要产区在 20 世纪初期育出、并在莲育种中具有重要利用价值的莲属 40 份材料进行分 析，以了解这些材料的遗传多样性背景。11 对引物在 40 份材料中共扩增了 184 条条带，多态性条带 127 条，多态性频率为 69.0%， 表明莲属具有丰富的遗传多样性。聚类分析结果表明，莲属种质资源可分为 3 大类群，与传统意义上的形态学分类相一致。且 40 份 莲品种样品表现出很强的地域相似性，这说明来自同一个地域内的品种（材料）分化程度低，遗传多样性不丰富，极易造成品种单一 化。
编号 品种名称 是否结实
品种类型
来源
36 建德红花莲 是
传统地方品种 引自浙江建德
1 泰国野生莲Ⅰ 否
野生型
引自泰国
37
逸仙莲
是 杂交种（自然杂交） 引自江苏南京
2 泰国野生莲Ⅱ 否
野生型
引自泰国
38 太空莲 36 号 是 诱变种（空间诱变） 江西广昌
3 泰国野生莲Ⅲ 否
野生型
引自泰国
39 京广 1 号
：莲；SRAP；指纹图谱构建；遗传多样性分析
我国是莲的原产地之一，不仅栽培历史悠久，而且
续表 1 实验材料
分布广泛，莲又是最具特色，栽培面积最大，品种资源
编号 品种名称 是否结实
品种类型
来源
最丰富的水生经济作物[1]。迄今为止，中国拥有花莲品
Hale Waihona Puke 14 莲湖野莲否野生型
引自安徽
种资源 800 多个 [2]，藕莲品种和子莲品种资源分别数 十个。莲是常异花授粉植物，不同品种间的基因交流很 容易通过昆虫的授粉来完成，这就造成品种间遗传资 源的混合和品种内的遗传差异较大[3]。目前，我国莲同 种异名现象时有发生，同一地区品种单一化现象严重， 大大增加了栽培上的风险性，为了避免这一现象，本试 验选取了 40 份代表性品种（材料）进行 SRAP 遗传多 样性分析，以期明确它们的遗传背景，探讨全国各地主
. A要ll传统Ri型g品ht种s与广Re昌s县er现v有ed栽.培品种的关系，从而为
品种选育提供理论依据。 1 材料和方法
15
马当莲
否
16 山庙前野莲 否
17 青塘野莲
否
18 白湖野莲
否
19 处州白莲
是
20
土萱莲
是
21 白花建莲
是
22 红花建莲
是
23 黑龙江野生莲 否
24 泰宁大金湖莲 否
主要产区在 20 世纪初期广泛应用于生产的优异材料， 这些材料至今在莲育种中仍被研究者直接或者间接利 用。材料取自广昌县白莲科学研究所博览园内。这 40 份材料包括野生莲、全国各地传统品种、广昌县现栽培 品种和花莲品种，材料详细信息（见表 1）。
27 京广 2 号
是 诱变种（离子注入诱变） 江西广昌
引自泰国 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭 引自湖南湘潭
引自安徽 引自安徽 引自安徽
1.2 样品制备 采集莲幼嫩叶片置于塑料袋中（自封袋），再加入
变色硅胶，摇动使叶片与硅胶充分均匀地接触，一般来 说，硅胶与叶片质量比应为 10:1，以保证叶片在 12h 内 干燥，一旦发现硅胶从深蓝色变为粉红色，及时更换硅 胶，干燥的叶片材料在室温下保存即可。 1.3 DNA 的提取
28 星空牡丹
是
杂交种
江西广昌
29
古代莲
是
野生型
引自湖北武汉
30 中南海古莲 是
野生型
引自湖北武汉
31 泰国野生莲Ⅵ 是
野生型
引自泰国
32 普者黑白莲 是
野生型
引自湖北武汉
33
舞妃莲
是 杂交种（中美杂交） 引自北京
34 白洋淀红莲 是
野生型
引自江苏南京
表 1 实验材料
35
桌上莲
是
传统地方品种
引自北京
25 肇源野生莲 否
26
百叶莲
是
野生型 野生型 野生型 野生型 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 野生型 野生型 野生型 传统地方品种
引自安徽 引自安徽 引自安徽 引自安徽 引自浙江武义 引自浙江武义 引自福建建宁 引自福建建宁 引自北京 引自北京 引自北京 江西广昌
1.1 材料来源 本次试验的 40 份莲品种（材料）是来自国内外莲
是 诱变种（离子注入诱变） 江西广昌
4 泰国野生莲Ⅳ 是
野生型
引自泰国
40 建选 17 号 是
杂交种
引自福建建宁
5 泰国野生莲Ⅴ 否
6
寸三莲
是
7
芙蓉莲
是
8
白湘莲
是
9
红湘莲
是
10 岳阳野生莲 是
11 雪湖贡莲
否
12 南埂野莲
是
13
飘花莲
否
野生型 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种 传统地方品种
野生型 野生型 野生型 野生型
试验研究
现代园艺
2013 年第 2 期
莲品种 SRAP 指纹图谱的构建及遗传多样性分析
欧阳冬梅 1 游永宁 2 刘 凰 1 徐金星 3 刘春华 3 邹东旺 1 杨良波 3 唐记平 1 胡中立 2 谢克强 1* （1 江西省广昌县白莲产业发展局 344900；2 武汉大学生命科学学院；3 江西省广昌县白莲科学研究所）
选取上述硅胶干燥的叶片 30mg，用液氮磨成粉
輥 輴 訛
2013 年第 2 期
现代园艺
试验研究
状，再用 DNA 提取试剂盒提取植物基因组 DNA。DNA 质量检测用 1%的琼脂糖凝胶进行，电泳缓冲液为 0.5×TBE，电压 100V，电泳 30min。 1.4 SRAP 分析
PCR 扩增反应总体积为 15μl，反应混合液中包 括 ：50ng/μl DNA 模 板 1μl，10 ×PCR buffer 1.5μl， 10mmol.L-1dNTPs，0.6μl, 10mmol.L-1 上 下 游 引 物 各 0.5μl，2U/μl Taq DNA 聚合酶 0.5μl，不足部分用无 菌水补足。
PCR 扩 增 反 应 程 序 如 下 ，95℃ 5min；95℃ 1min，35℃ 1min，72℃ 1min，5 个循环；95℃ 1min，50℃ 1min，72℃ 1min，35 个循环；72℃延伸 10min，温度降 到 4℃即完成扩增。
扩增产物加上 10μl 的上样缓冲液 94℃预变性 5min，采用 6%的变性聚丙烯酰胺凝胶，0.5×TBE 缓冲 液，65W 恒功率电泳 1.5h。银染检测电泳结果。 1.5 SRAP 数据处理
：利用 SRAP 标记对来自国内外莲主要产区在 20 世纪初期育出、并在莲育种中具有重要利用价值的莲属 40 份材料进行分 析，以了解这些材料的遗传多样性背景。11 对引物在 40 份材料中共扩增了 184 条条带，多态性条带 127 条，多态性频率为 69.0%， 表明莲属具有丰富的遗传多样性。聚类分析结果表明，莲属种质资源可分为 3 大类群，与传统意义上的形态学分类相一致。且 40 份 莲品种样品表现出很强的地域相似性，这说明来自同一个地域内的品种（材料）分化程度低，遗传多样性不丰富，极易造成品种单一 化。
编号 品种名称 是否结实
品种类型
来源
36 建德红花莲 是
传统地方品种 引自浙江建德
1 泰国野生莲Ⅰ 否
野生型
引自泰国
37
逸仙莲
是 杂交种（自然杂交） 引自江苏南京
2 泰国野生莲Ⅱ 否
野生型
引自泰国
38 太空莲 36 号 是 诱变种（空间诱变） 江西广昌
3 泰国野生莲Ⅲ 否
野生型
引自泰国
39 京广 1 号
：莲；SRAP；指纹图谱构建；遗传多样性分析
我国是莲的原产地之一，不仅栽培历史悠久，而且
续表 1 实验材料
分布广泛，莲又是最具特色，栽培面积最大，品种资源
编号 品种名称 是否结实
品种类型
来源
最丰富的水生经济作物[1]。迄今为止，中国拥有花莲品
Hale Waihona Puke 14 莲湖野莲否野生型
引自安徽
种资源 800 多个 [2]，藕莲品种和子莲品种资源分别数 十个。莲是常异花授粉植物，不同品种间的基因交流很 容易通过昆虫的授粉来完成，这就造成品种间遗传资 源的混合和品种内的遗传差异较大[3]。目前，我国莲同 种异名现象时有发生，同一地区品种单一化现象严重， 大大增加了栽培上的风险性，为了避免这一现象，本试 验选取了 40 份代表性品种（材料）进行 SRAP 遗传多 样性分析，以期明确它们的遗传背景，探讨全国各地主
. A要ll传统Ri型g品ht种s与广Re昌s县er现v有ed栽.培品种的关系，从而为
品种选育提供理论依据。 1 材料和方法
15
马当莲
否
16 山庙前野莲 否
17 青塘野莲
否
18 白湖野莲
否
19 处州白莲
是
20
土萱莲
是
21 白花建莲
是
22 红花建莲
是
23 黑龙江野生莲 否
24 泰宁大金湖莲 否