消减杂交

食品和化学毒物学63（2014）84-90
镉诱导基因姬松茸鉴定通过抑制性消减杂交
文章信息
關鍵詞：食用菌,姬松茸,鎘,基因表達,抑制性消減雜交
摘要:
镉（Cd）是最严重的环境污染物之一。

丝状真菌是非常有前途的有机体用于控制和减少重金属的由释放的量的人力和工业活动。

然而，参与镉积累和丝状宽容的分子机制真菌不完全理解。

姬松茸，可食用蘑菇的药用价值，表明高耐受性的重金属，尤其是镉。

调查的分子机制镉暴露后姬松茸的相关反应，我们构建了正向消减文库的代表了姬松茸镉诱导基因在 4 ppm的镉胁迫对使用抑制子牵引杂交结合镜面方向选择14天。

差异筛选允许我们确定39个基因表达上调，其中26都参与了代谢，蛋白质的命运，细胞运输，运输便利化和运输路线，电池救援，国防和毒力，转录和行动用绑定功能，和13种蛋白质的编码都假定蛋白质的功能尚不清楚。

电磁炉的镉暴露后六个月姬松茸基因用RT- qPCR的进一步证实。

分离出的cDNA在这项研究有助于我们参与的生化途径，partic - ipate在丝状真菌中，以镉暴露的应答基因的认识.
介绍食用担子菌姬松茸，普遍
被称为“Cogumelo做索尔”在巴西，日本，'Himematsutake'，或
“戎机歌”在中国，原产于巴西，和过气的小路tivated其药用用途多年在日本和中国广泛。

这种真菌被认为是一个最有价值的食用和
烹饪药用蘑菇品种及其生物技术
营养和药用价值也很高，有据可查
（Firenzuoli等，2008）。

多糖植物复合物的
姬松茸被认为是负责其免疫刺激
和抗肿瘤性质（Firenzuoli等人，2008; Biedron等。

2012）。

但是，重金属的积累（尤其是
镉）的姬松茸受到了关注，在过去增大而增大几
几十年来由于对食品安全的负面影响，马尔萨斯
潜在的威胁到消费者的健康。

的收获子实体
姬松茸能积累高浓度的镉，范围
从10毫克公斤1 到30毫克公斤1 干物质（卡拉克，2010年，孙等人，2012），阙比许多食用菌高得多品种包括双孢蘑菇，香菇，平菇平菇，黑木耳等。

因此，一些中国生态学家目前被认为是姬松茸作为一个潜在的镉mulator hyperaccu''''，阙可用于生态重金属污染土壤的修复….对植物耐受机制最近的研究表明，谷胱甘肽（GSH）和其相关的代谢酶，蛋白质和肽通过控制起到重金属耐受性的关键作用不同植物的生理过程，包括活性氧
簇（ROS）和甲基乙二醛（MG）解毒，重金属摄取，转运，螯合，和解毒（侯赛因等人，2012）。

虽然涉及到重金属的运输，车的相关特征研，以及诸如运输和重金属螯合分子
螯合剂是很好的候选积累和宽容，关于全球基因表达的信息仍然非常LIM资讯科技教育。

酿酒酵母是一个强大的模式生物研究重金属毒性的分子机制和耐受性真菌。

虽然许多研究结果在最近几年有改善了我们其中S.蜡，visiae和其他酵母菌应对重金属，分子洞察机制的理解成金属生物学的许多方面仍然不明（威索基和愚昧，2010）。

这些未知的机制包括如何将这些保护细胞免受重金属的毒性蛋白质调解宽容，怎么重金属激活转录因子
andsignaling蛋白质，以及如何将这些蛋白质，反过来，激活他们的基因/蛋白指标。

因此，进一步的调查，以查明负责镉积累和宽容的关键基因要了解所涉及的分子机制在丝状真菌Cd胁迫的响应。

此外，该关键基因有关镉耐受性是很好的候选改变镉在姬松茸的积累，通过遗传改良，对于有关镉食品安全的一个重要问题…..我们目前的研究目的是探讨增强表达致镉曝光和对焦真菌姬松茸的基因对负责Cd胁迫重新sponses关键基因的鉴定。

我们使用基于抑制设备消减杂交法（SSH）结合镜实现这一目标方向选择（MOS）。

这项技术使我们能够确定具体很少表达镉诱导性基因（Diatchenko 等人，1996; Rebrikov等人，2000）。

我们还通过cDNA微阵列作为杂交的反向Northern blot分析而达到消灭假阳性克隆，并提高选择效率的一种形式。

Addi-倚重，诱导姬松茸镉基因暴露后为通过实时逆转录聚合酶进一步证实链反应（RT-qPCR的）.
2材料和方法
2.1。

真菌物质和Cd处理
从三明真菌学院报，土特，福建，中国获得姬松茸AB002的应变。

该菌株通常生长在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）的媒体与0.5％（W / V）胰蛋白胨，转移到新的培养基中每3个月。

建立了两个疗程：姬松茸培养中存在镉（测试样品）和真菌在无镉（驱动程序示例）的培养。

氯化镉2 加入到培养液中的4 ppm的终浓度。

经过14天的治疗时，CD-处理的和未处理姬松茸菌丝收获，请立即在液氮中冷冻，并保存于？80？C，直到使用。

2.2。

RNA提取和SSH/马鞍山总RNA，姬松茸菌丝体两种治疗下提取（测试司机样品）用Trizol ？试剂（Gibco公司，德国）根据制造商的指示。

对于每个治疗，RNA的混合物中从在分离至少有三个独立的文化。

RQ1无RNA酶的DNA酶（Promega公司，麦迪逊，威斯康星州，美国）被用于除去DNA污染的RNA样品中。

mRNA的是ISO-lated使用的Oligotex mRNA的Mini试剂盒（Qiagen公司，德国）。

在第一个杂交化，测试样品进行杂交，在测试仪的比率超出司机：DRI-VER1:30在68？加热8小时。

在第二次杂交，1 LL驱动混合物（1 LL 杂交缓冲液中，1 LL驱动器，以及2 LL水）杂交与所述第一在68杂交液？过夜。

然后进行PCR扩增用PCR引物1（5 0 - CTAATACGACTCACTA TAGGGC-3 0 ），其次是巢式PCR 引物1（5 0 - TCGAGCGGCCGCCCGGGCAGGT-3 0 ）和引物2R（5 0 - AGCGTGGTCGCGGCCGAGGT-3 0 ），以扩增差异表达cDNA的那对应姬松茸的基因在人群镉暴露的差异表达。

在MOS技术被用来消除假阳性克隆从下面的Rebrikov等人的方法SSH文库。

（2000年）。

产品MOS管被克隆到的pMD19-T载体（宝，大连，中国），然后根据Inoue等人利用结扎反应重刑转化为ultracompetent JM109大肠杆菌细胞。

（1990）。

超过1500个阳性克隆，随机选择并转移至384孔板中，并培养在旋转摇床（2000转/分），在37？下6小时.
2.3。

消减杂交效率测试
为了评估抑制性消减杂交消减效率过程中，使用PCR-选择cDNA的执行减法运算效率测试减法试剂盒（BD Biosciences公司Clontech，美国）按照生产商的
说明。

持家基因，甘油醛-3 - 磷酸脱氢酶（GAPDH）从姬松茸通过根据使用的PCR引物克隆Kreuzinger等。

（1996）。

的引物组，然后在该实验中使用到的AM-GAPDH化了，其被选择作为阴性对照为减法效率测试。

将GAPDH的部分cDNA的核苷酸序列在GenBank 联合国德保藏号KF650659.
2.4。

cDNA微阵列和反向Northern blot分析
的cDNA阵列和反向Northern印迹分析，根据执行Li等人。

（2013年）。

在姬松茸GAPDH 基因作为内标
2.5。

的消减cDNA文库和序列注释测序
通过反向Northern印迹获得的阳性克隆进行测序使用自动DNA测序仪（ABI377，应用生物系统公司，福斯特城，CA，USA）在海基康生物技术（上海，中国）。

原cDNA序列由Chromas2.30（Technely-sium，Tewantin的，澳大利亚昆士兰州）或通过目测最初修剪载体，引物，和适配器。

短序列超过100个碱基，模糊的序列被丢弃。

修整后的cDNA SE-quences 代表的SSH/ MOS库，然后进行同源性分析使用基本局部比对搜索工具（BLAST）×算法在全国生物技术信息中心（NCBI）网站（http://blast.ncbi.nlm.nih。

GOV/ Blast.cgi）。

唯一的推导从减法文库的氨基酸序列枝条值<10-4 被认为是代表已知基因或有偏相似于已知基因。

MIPS的数据库（http://mips.helmholtz-muenchen。

德/ PROJ/ funcatDB）是用于定义功能类别的评价序列。

连续序列被使用的程序获得ContigExpress 软件（矢量NTI提前9.1.0，Invitrogen公司）。

所有的表达序列标签（个EST）序列，登录号在GenBank dbEST 中JZ494732-JZ494770。

2.6. Gene transcription analysis through RT-qPCR
RT-qPCR的用在姬松茸尽头应该用针戳穿使用和不使用镉评估和比较基因表达。

合成的cDNA使用上面所描述的在SSH文库构建使用相同的真菌材料。

所有实验wereperformed 一式三份用RNA从至少三个不同的培养物，它也被用于在''2.2 RNA提取andSSH/ MOS''描述的SSH文库中分离。

具体的引物组用于RT-qPCR的设计与寡7软件（MBI，USA）。

将cDNA稀释，并使用7500快速实时PCR系统（Applied Biosystems）和SYBR预混料前的T aq™（宝，大连放大，中国）。

相对标准曲线选择相对确定的方法数量靶mRNA。

扩增效率为标准曲线中计算得到通过使用StepOne软件V2.1（Applied Biosystems公司）。

标准曲线使用稀释系列的pMD19-T载体进行了计算个别个Unigenes 含有靶基因。

在镉处理过的木耳与那些在未经处理的真菌相比，基因的相对表达水平进行了测定基于与参考基因GAPDH的比较。

因此，放大的靶基因进行归一化与参照基因的扩增来正确的放大变化。

在RT-qPCR的分析中使用的引物组是如表2所示。

3。

结果
用减法的SSH结合MOS允许的高效和差异表达的转录快速克隆。

使用SSH和MOS管的组合，我们构建了正向消减库代表的增强表达的基因
图。

1。

该cDNA消减文库的效率测试。

减法效率通过分析目前在这两个GAPDH cDNA 的产品量确定消减cDNA和未消减cDNA，其周期18，23，28和33。

泳道M，分子标记（GeneRulerTM100 bp的DNA梯状条带加号），泳道1-4表示，消减样品在18，23，28和33周期分别为泳道5-8代表未消减样品在18，23，28和33周期，分别为。

在数字图中左侧显示的kb（KB）的DNA大小标记。

真菌姬松茸诱导镉暴露。

减法的效率通过管
家基因的PCR扩增进行评价，GAPDH 。

我们观察到一个显着的降低放大减去的cDNA相对于未消减的cDNA （图1），由此表明该看家基因转录是有效的的抑制性消减杂交过程中减去。

这结果证实了消减杂交效率和表现一个高质量的cDNA消减文库构造。

超过1500个阳性克隆，随机选取从在SSH/ MOS cDNA文库，并进行反向Northern 杂交分析（图2）。

反向Northern blot分析表明，近80％的克隆发出的弱阳性信号或无信号都没有。

因此，只有326个克隆呈强阳性在反向杂交分析信号进行选择和测序。

326表达序列标签（EST）组装产生39单件（290-719碱基对）（表1）。

39个EST序列
被质疑反对使用在NCBI蛋白质数据库在BLASTX算法。

在39个EST序列，36个翻译的氨基酸序列提出的E-值<10？4（92.3％），只有三个提交E值>10？4（7.7％）。

高达25的36 EST序列的与E值<10？4显示显著的相似性已知基因和其他11个未知功能蛋白（假设蛋白）。

此外，这三个翻译的氨基酸序列中与E值>10的EST序列的？4，两个匹配的假设蛋白质和一个匹配的一个已知的基因。

显示功能分析该上调镉的存在下，26真菌基因可能参与代谢（克隆ID：AB1-14），蛋白质的命运（AB15-16），细胞运输，交通便利，运输路线（AB17-18），细胞救援，国防和毒力（AB19-24），转录（AB25），并配有约束力的功能或辅助因子的蛋白质要求（AB26），其他13真菌基因编码的蛋白质具有未知功能（AB27-39）（表1）。

为了证实这些基因在响应中的表达增强镉暴露，六姬松茸基因被选中，成绩单各基因的水平通过RT-qPCR的进一步研究。

相对的六个基因的转录水平进行标准化的组成表示GAPDH基因和归一化到对照培养通过使用2？DCT方法。

标准曲线为90％和115％之间表现出扩增效率所有六个基因评估。

> 90％的扩增效率通常所需的最佳结果。

如该图所示。

3，所有六个增强表达基因的上调姬松茸响应镉暴露。

有15倍的增加在该基因的转录对于谷胱甘肽过氧化物酶（的Ab2）码，3倍的基因的编码磷脂酶D /核酸酶（AB6）和5 - 倍的基因的那代码乙醇脱氢酶（AB3）和半胱氨酸蛋白酶（AB15）
4 。

讨论
重金属的毒性可能是由氧化应激引起的，受损DNA修复，抑制酶的功能，和功能
调节细胞增殖，细胞周期蛋白的破坏进展，细胞凋亡和细胞分化（威索基和陶马什，2010）。

在本研究中，我们发现39上调下面的镉暴露从姬松茸的基因，它们分布在不同的功能类别。

这一结果表明，镉应激激活一系列复杂的分子机制，如通过明林等显示。

（2005）对印度芥菜和张等。

（2011 ）大米，其中一些上调的基因是、镉胁迫下隔离。

在十四代谢相关基因姬松茸诱导镉暴露，这是参与抗氧化防御，葡萄糖代谢，稳定的DNA ，生产黑色素和脱乙酰壳多糖，脂质信号传导，谷氨酸合成，等等。

此外，一些相关基因到蛋白质降解，蛋白质转运，细胞运输，细胞解毒和前mRNA剪接的途径是也Cd胁迫下被激活。

这些修改过的表达酶强调多种细胞和生理方面抑制或镉暴露打乱。

重金属胁迫不约而同地诱导氧化应激和抗氧化防御系统，这是由自由基的
清除的分子，如抗坏血酸（ASA）和谷胱甘肽（GSH）和涉及它们的合成和还原的酶
（侯赛因等人，2012）。

在大量近期研究植物表明，谷胱甘肽本身及其相关代谢酶-
特别是谷胱甘肽S -转移酶（GST ），谷胱甘肽过氧化物酶（GPX ）等蛋白质和肽在重型起到了举足轻重的作用金属耐受性。

GPX和GST ，像所有其他抗氧化酶，功能，以防止镉的毒性，并提供第一防御镉的任何金属硫蛋白诱导前行合成时（Sidhu等，1993; 。

岜沙和拉尼，2003 ;SPIAZZI等，2013 ）。

GPX催化GSH和氧化产生谷胱甘肽（GSSG ）和GST负责标记矢车菊-3 - 糖苷与三肽谷胱甘肽，使其成为确认运输到液泡和基因表达
高度诱发重金属如镉（马尔斯和Walbot ，1997）。

在本研究中，我们观察到两个基因。

图。

2。

从消减文库阳性克隆用反向Northern印迹实验差异筛选。

杂交进行了利用DIG标记从驱动程序和测试样本获得的cDNA探针。

（一）代表真菌培养在无镉和（B）测试样品代表木耳驱动器样品在镉的存在下培养。

表1
通过鉴定镉诱导真菌姬松茸抑制消减cDNA文库的cDNA的编码可能的蛋白质。

表2
用于基因表达评估和消减文库验证寡核苷酸姬松茸通过RT-qPCR的接触镉。

在姬松茸编码GPX （的Ab2 ）和GST （AB13 ）诱导镉曝光，如图利丘克等。

（2005）在他们的转录分析植物对镉和铅。

另外，GST / GPX表达增强的转基因烟草的生长应激期间苗，这可能是由氧化引起的谷胱甘肽池（罗哈斯等人，1997）。

这些研究表明，GPX 和GST下镉暴露的原因表达增加抗氧化剂谷胱甘肽，这被认为是一个通用的耗尽毒性机制的金属螯合植物和真菌。

一基因，该基因编码一种膜结合蛋白在类花生酸和谷胱甘肽代谢（MAPEG ）（AB8 ）是从确定的目前SSH文库。

MAPEG是一种普遍的家族膜相关的蛋白质，在高度分散的功能类花生酸和谷胱甘肽代谢。

的三名成员家庭是细胞保护参展谷胱甘肽S-转移酶和过氧化物酶活性（JAKOBSSON等，1999）。

因此，我们推测MAPEG 的姬松茸表达增加可具有抗氧化性能。

NADPH醌还原酶[或NADPH ：醌氧化还原酶（NQO ）]是一个重要的因素细胞抗氧化防御系统，它代表了一种广泛分布式FAD依赖性的黄素蛋白与多重保护功能（STOEHR等，2012）。

的表达增加在中镉暴露姬松茸NQO基因（AB11 ）是一致的由Elbekai和El -卡迪（2008年），其结果表明，镉在转录水平通过NQO诱导表达不稳定的蛋白介导的途径。

我们推测镉暴露可能引发的ROS积累姬松茸，因此，基因如GPX ，GST ，MAPEG和NQO是由镉上调stresswould有助于消除活性氧的姬松茸菌丝体细胞并且可有助于从镉毒性真菌细胞的保护。

葡萄糖磷酸（PGM ）催化的相互转换葡萄糖-1 - 磷酸和葡萄糖-6 - 磷酸和起着关键性糖原（Ray和Roscelli的合成与分解的作用，1964）。

在长牡蛎PGM mRNA的表达主要是上调响应污染物应力的第一阶段（唐基等人，2006）。

我们目前的研究表明，表达
编码PGM基因（AB1 ）于姬松茸在激活响应Cd胁迫。

类似的结果，观察镉处理拟南芥幼苗（Liu等人，2012）。

上调铂族金属基因Cd和污染物的暴露表明，镉激活需要利用葡萄糖的生化途径作为非生物胁迫下的碳和能量来源。

I类谷氨酰胺酰胺转移酶样蛋白（GAT1 ），所涉及的关键酶谷氨酸合成谷氨酰胺，属于一个家族的其中拟南芥有30个潜在的成员，有些是的未知函数（朱和克兰兹，2012）。

GAT1在大米激活在高温下（埃尔- Kereamy等，2012）。

增加GAT1表达（AB5 ）在镉暴露表明，在姬松茸增强谷氨酰胺代谢参与其CD宽容。

醇脱氢酶（ADHS ）和芳基醇脱氢酶（AADS ）属于氧化还原酶家族。

ADH催化
对NAD （P）H依赖性降低的各种内源性的和异生物质的羰基化合物和起着重要的作用
在参与类固醇，维生素，脂质许多生理过程过氧化产物，脂肪酸，乙醇和其他代谢过程（Reid 和Fewson ，1994）。

然而，很少有人知道关于AAD及其在分子公差参与重金属。

AAD 可能参与氧化应激反应及其在酿酒酵母中的表达诱导铬酸盐曝光（Pereira等人，2008 ）。

在ADH基因表达的变化是植物对重金属污染的第一反应，如由陆王（1998）显示，在小麦ADH表达45小时内激活。

然而，我们目前的研究表明，ADH （AB3 ）和AAD （AB10 ）的姬松茸进行14 d后诱导镉曝光，这表明，氧化还原酶，如ADH和AAD ，可能涉及的重金属耐受期间的后期阶段。

甲基化酶是催化的转移转移甲基从捐赠者到甲基化底物（博克和凯勒，2004）。

著名的甲基化组蛋白包括和精氨酸甲基转移酶，它参与调节基因表达的真核生物中，部分通过
变形染色质结构（莫问，2001）。

S-腺苷-L-甲硫氨酸的依赖甲基（SAM-转移酶）可能参与在DNA，RNA，蛋白质，细胞signalingpathways，和蛋白质的合成（Clarke和班菲尔德，2001）的稳定。

该三甲基化酶表达增加，包括硫醇甲基转移酶1（AB4），精氨酸甲基（AB12），和SAM-转移酶（AB14）从后镉暴露姬松茸确定提示异常甲基化的毒性作用可能镉，如图所示由泷口等人。

（2003），其中延长镉暴露导致的DNA甲基化和增强的DNA 甲基转移酶活性。

图。

3。

姬松茸基因表达的镉（测试）相对于该真菌在无镉（驱动器）的培养存在下培养。

X轴给出了靶基因和Y轴的基因表达对应于目标基因相对于校准器的表达水平，由归一化GAPDH内对照。

该评估基因可能控制（一）谷胱甘肽过氧化物酶（的Ab2），磷酶D/核酸酶（AB6），半胱氨酸蛋白酶（AB15），（B）酒精脱氢酶（AB3），内质网受体（AB16），细胞色素P450（AB19）。

数据代表至少三个独立获得的结果的实验。

误差棒代表SE（N> 3）。

星号表示镉处理的真菌和控制值是显著差异（P<0.05）。

酪氨酸酶是黑色素生产的限速酶并且它是必需的色素沉着。

真菌黑色素细胞增强
金属下生存的压力，因为他们拥有几个metalbinding网站（艾森曼和卡萨德沃尔，2012 ;阿普特等人，2013 ）。

因此，在Cdtreated增加的酪氨酸酶表达（AB9 ）姬松茸可能涉及增加的黑色素生成螯合镉离子的细胞。

A基因（AB7 ）相似对糖酯酶家族4 （CE4 ）双色蜡蘑蛋白质和金针菇的甲壳素脱乙酰酶被确定在目前的SSH文库。

作为一个CE4蛋白，甲壳素脱乙酰酶催化的N-脱乙酰壳多糖以形成脱乙酰壳多糖，聚合物β- （1,4）- 连接的D -葡糖胺残基，并且它参与生物攻击和防御系统（Tsigos等，2000 ; 。

Zhao等人，2010）。

几丁质脱乙酰酶已被建议是一个金属酶和其催化能力得到增强在锌的存在下钙和钴（Zhao 等，2010）。

作为一个生物聚合物，壳聚糖是一个很好的吸附剂用于去除各种阴离子和阳离子染料，以及作为重金属离子（万Ngah等，2010）。

诱导几丁质镉胁迫下脱乙酰基酶基因的表达表明，姬松茸产生高量的壳聚糖吸附镉增加其耐受性以Cd胁迫。

磷脂酶催化磷脂水解的初始步骤中，力，因此，在脂质信号传导至关重要。

磷脂酶D （PLD）在调节各种细胞过程植物如脱落酸信号传导，细胞程序性死亡，生物和非生物胁迫等（Singh等，2012）。

许多调查结果已经建立了应力信令之间的连接和活性氧的产生，这是由PLD介导的，并建议PLD调节ROS介导的细胞死亡，积极并最终导致细胞的保护（Zhang等，2003）。

因此，增加在姬松茸（AB6）PLD的表达响应Cd胁迫表明镉诱导的ROS的积聚和PLD 与活性氧的功能进行调解程序性细胞死亡，并最终增强CD容限。

半胱氨酸蛋白酶参与存储的降解蛋白质，蛋白质在响应非生物的营业额及生物胁迫和程序性细胞死亡随行过敏性反应，病原体攻击，管状细胞元素分化和器官的衰老（Grudkowska和Zagdan '斯卡，2004年）。

在姬松茸的半胱氨酸蛋白酶的表达（AB15 ）为由Cd胁迫，这是支持类似的研究上调在拟南芥和衣藻藻。

（科瓦利丘克，2005;臼井
等人，2007）。

这些研究表明，半胱氨酸蛋白酶是响应于非生物胁迫激活，并可能参与了
异常或无功能的降解的维护蛋白质。

Sec62 ，内质网（ER）受体是一部分蛋白质易位装置在ER的膜。

Sec62参与的翻译后易位蛋白质进入内质网（Greiner等人，2011）。

很少有研究关注非生物胁迫下的Sec62基因。

然而，我们目前的研究表明，镉激活姬松茸Sec62基因表达（AB16 ），这反过来又意味着增加的转蛋白质进入内质网参与Cd的耐受性。

该Gpr1/Fun34/YaaH跨膜蛋白（AB17 ），以及作为滞留在内质网1 （RER1 ）跨膜蛋白（AB18 ）从本镉处理被确定姬松茸。

在Fun34家庭的功能是未知的，虽然
有研究显示，一些成员参与inammonia分泌，醋酸摄取，并在适应醋酸（Gentsch和巴特，2005）。

ACPA ，这个家庭中的一员菌丝真菌构巢曲霉也可能参与在乙酸适应，吸收，和/或分解代谢（Robellet等人，2008）。

RER1蛋白参与ER膜蛋白的检索从早期的Golgi 区室，并在检索多聚体复合物的未组装的亚基。

C端酵母的Rer1p用coatomer复杂的相互作用（Sato等人，2001年，2003年）。

该信号应该由该检索系统的认可。

基因编码Fun34跨膜的表达增加蛋白质和RER1跨膜蛋白在姬松茸建议他们可能参与了重金属镉细胞转运在质膜和解毒。

细胞色素P450基因家族参与生产多样的代谢物，以及起着适应关键作用对特定的生态和/或营养龛通过修改潜在的有害环境的化学物质（Park等，2008）。

在真菌中，P450酶促成的探索和适应不同的生态位，如退化环境毒物（Hlavica ，2012）繁多。

许多
研究表明，镉暴露引起的过表达的细胞色素P450基因（思迈达等人，2004 ; 。

Cui等人，2007;Zhang等，2011 ; 。

卡萨诺瓦等人，2013 ）。

在本研究中，我们确定了细胞色素P450家族的六个不同的构件（AB19 - 24）在镉暴露姬松茸。

因此，增加细胞色素P450的表达可能参与了细胞解毒过程，这表明该防御机制真菌是由镉的毒性激活。

前体mRNA 剪接因子31 （Prp31 ）是U4/U6小核核糖核蛋白的组成部分是直接参与mRNA前体复合物拼接途径（Weidenhammer等人，1996）。

增加在中镉暴露（AB25 ）姬松茸Prp31基因表达和在烟草盐分胁迫条件下（Li等，2009）表明该前体mRNA剪接途径可能参与非生物压力。

总之，虽然我们目前的研究没有描述的在基因所有可能的镉引起的变化的详尽调查
在姬松茸的表达，我们发现了一些新的镉响应基因和可能的途径先前未确认。

网络多种机制是精细举办镉积累和宽容无论是在植物或真菌。

这些新的Cdresponsive 在我们的研究中发现的基因值得深入功能分析，在未来，这将澄清他们的参与在过程中Cd胁迫并启用耐受机制的在改变的丝状金属积累量使用真菌。

5。

利益冲突
作者宣称，有没有利益冲突
致谢
这项工作是由自然科学基金资助浙江省.中国（批准号：Y3110048）的项目浙江食用菌创新团队建设省，中国（批准号：2009R50029），联合项目上，estry科技，浙江省和中国林业科学院（批准号：2011SY06）的，科学的项目和浙江省科学技术科技计划
司，中国（批准号：2011F20014），以及项目创新团队建设和人才培养上的森林
浙江省，中国（批准号：食品研究2012bF20012）。