牛性控冻精分离环节要素浅析
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4. 通 过 打 点 判 定 Drop delay袁 这 里 首 先 要 注 意 打点时使用的 Beads 久置会有粘连袁因此使用前 必 须 摇 匀 袁 其 次 主 控 柜 上 的 分 选 方 式 要 选 择 为 Sing 1毅袁这样是为了 Drop delay 的 精 准性 更强 遥 最后 将 混匀 的 Beads 放 入上 样系 统 袁 先 做 32 滴 判 定 袁目 的 是为了找到液流要断未断的 那 个 位置 袁 因为 这 32 滴是连续的袁因此判定完成以后一定要在主控柜上 使用复位键进行复位遥 然后再做 10 滴对其进行验 证袁如果均为 10 滴表 明 Drop delay 判 定准 确 无误 袁 出 现 9 滴 可 能 是 Beads 未 完 全 混 匀 发 生 粘 连 或 是 液流分散导致某一滴发生溅射袁 出现 9 滴以下袁液 流分散情况又不太严重的话袁 则表明 32 滴判定不 准确袁未能找到要断未断的那个位置袁需要重新进 行判定遥
更强遥 这些光信号通过光电倍增管转化成电信号传 输给处理系统袁经处理系统的判断后袁不同的精子 带上了不同的电荷遥 当它们经过偏转电场时袁由于 异性相吸的电磁原理袁X尧Y 精子将被导入不同的精 子收集容器中袁从而完成 X尧Y 精子的分离遥
由于精子分离的速度与准确率是决定冻精产 量与品质的关键因素袁因此在分离操作过程中需要 特别注意以下几个要素院
技术交流
牛性控冻精分离环节要素浅析
唐 椿 1,2 祖智富 1,2 李倩倩 1,2 曾凡桂 1,2 郁明霞 1,2 渊1 光明牧业有限公司 2 上海奶牛育种中心有限公司 上海 201408冤
摘 要院 根据牛的精液 X尧Y 染色体 DNA 含量的不同袁 将其进行分离并分装冷冻的冻精被称为性控冻精遥 合理使用性控冻精既能增加生产效益袁 同时也能改良种群品种袁 是目前奶牛生产繁育性别控制的首选途 径遥 而分离过程作为性控冻精生产中技术性较强的一个环节尤其重要袁本文主要对精液分离操作环节的一 些注意事项进行了简要的分析阐述袁以期对性控冻精分离生产过程起到一定的指导作用遥 关键词院性控冻精曰流式细胞分离仪曰分离曰Drop delay
2 图像调节 此处的图像是指主控柜上打点平面示波器上 所显示的 X尧Y 精子的分离图像遥 图像越清楚表明 流式细胞分离仪对此时上机精液的分离效果越好袁 分离产品的速度及准确率就会更高袁而想要获得清 晰稳定的图像主要是通过调节分离仪上的三组镜 片来完成遥 中 间 一 组 镜 片 的 主 要 作 用 分 别 是 调 节 TIP 头 位置尧控制中间液流位置尧调节激光的聚散袁其中控 制 TIP 头位置的旋钮在 Drop delay 查找完毕以后一 定不能再触动袁否则产品的分离准确率将会受到严 重影响遥 另一组是 Laser-Focusing 定位器上的镜片袁 这组镜片的作用是院1.调节焦距袁起到聚焦作用曰2. 把激光的点光源变成平行的线光源袁以便于激光切 割液流遥 这条线光源的特点是光线不均匀袁中间强袁 两边弱袁因此调节此组镜片的要领为尽量让中间光 线最强处与含 X尧Y 精子的液流相交遥 第三 组 为 FAF 聚 焦镜 袁其 作 用 是 采 集 尧聚 焦 激 光 照 射 到 液 滴 上后所产生的荧光信号袁再通过光电倍增管将荧光 信号转化为电信号遥 通过调节以上这三组镜片上的 9 个旋钮即可 达到调节分离图像的目的遥 我们在调节中需注意以 下几个方面院 1.保持镜片清洁袁如果镜片太脏将会出现图形 模糊的现象遥 2. 镜片中间有一根细挡板袁 其作用是挡住激 光袁保留荧光遥 但在分离过程中袁由于激光长期照 射袁挡板表面会出现灼烧痕迹袁造成激光漫反射袁影 响荧光信号收集遥 3. 调节图像时应尽量把图形调到示波器的右 上 方 袁 以 降 低 主 控 柜 上 SAF尧FAF 的 数 值 遥 因 为 SAF尧FAF 的数值越大袁表明分离图像被放大的倍数 越大袁图像的聚焦度也就越差袁最终导致图像模糊袁 并且容易发生图像不稳定袁上下飘动的结果遥 4.TIP 头需 要保 持 清洁 及 畅 通 遥 TIP 头 如 若 堵 塞袁重则无法分离袁轻则影响分离效果遥 好的分离图 像为两条完全分开的直线袁 上面一条表示 X 精子袁 下面一条表示 Y 精子遥 当 TIP 不畅通时袁会出现分 离效果不好或出现勾状袁从上往下勾袁则表示 X 精 子进入 Y 精子中袁那么分离速度会降低袁如果从下
3.液流调节袁当偏转电场通电后袁由于电磁原 理袁从 TIP 流下 的 液流 会变 成 3 股 袁它 们 分别 是 院X 精子尧Y 精子及废液遥 只有通过对频率尧振幅尧相位 的调整使之成为 3 股不分叉的液流袁才能保证不同 的液流进入不同的收集器内遥 反之不光无法正常收 集袁液流还会流到偏转电场内的电极板上袁造成电 极板损坏及操作人员被电的危险遥
高效尧简便尧低成本尧易掌握的精液分离方法是 生产性控冻精的必备条件遥
迄今为止袁现有的精液分离方法中流式细胞分 离法是目前唯一一种相对准确的分离方法袁也是唯 一一种可以大量进行冻精生chest33342 对精子进行染色袁由于精子 DNA 含量 的不同袁 牛的 X尧Y 精子 DNA 含量差异为 3.8%袁因 此结合的荧光染料量也各不相同遥 染色后的精液通 过流式细胞分离仪的上样系统袁形成单个精子排列 的液柱袁再通过 TIP 头的高频震荡形成单个精子的 液滴遥 当每个液滴与激光光束相交时袁X 精子由于 结合的荧光染料更多袁因此它被激光激发的光信号
1 Drop delay 的准确判定 Drop delay 是 指 流 式 细 胞 分 离 仪 识 别 X尧Y 精 子并对其进行加电的这段延迟时间遥 Drop delay 的 准确判定是保证分离准确度的主要因素遥 其判定步 骤可以分为以下几步院
70
叶奶牛曳 2019 年 06 期
技术交流
1.首先将 TIP 头位置调整到与液滴照相监视器 上缘刚好相交的位置袁 这样是为了保证 Drop delay 数据的准确及随后分离图像的顺利调节遥
2.分离图像调节袁这样做的目的是提前定位图 像遥 因为如果图像出现带有勾状或是分散不聚拢的 情况袁打点平面示波器中的 Drop delay 也 会 对应 出 现带勾 或是分散袁那么在电脑的 Drop delay 界面 中 被框选的区域就会相应扩大袁从而把周围一些杂质 信号框选进去导致 Drop delay 判定困难遥
更强遥 这些光信号通过光电倍增管转化成电信号传 输给处理系统袁经处理系统的判断后袁不同的精子 带上了不同的电荷遥 当它们经过偏转电场时袁由于 异性相吸的电磁原理袁X尧Y 精子将被导入不同的精 子收集容器中袁从而完成 X尧Y 精子的分离遥
由于精子分离的速度与准确率是决定冻精产 量与品质的关键因素袁因此在分离操作过程中需要 特别注意以下几个要素院
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牛性控冻精分离环节要素浅析
唐 椿 1,2 祖智富 1,2 李倩倩 1,2 曾凡桂 1,2 郁明霞 1,2 渊1 光明牧业有限公司 2 上海奶牛育种中心有限公司 上海 201408冤
摘 要院 根据牛的精液 X尧Y 染色体 DNA 含量的不同袁 将其进行分离并分装冷冻的冻精被称为性控冻精遥 合理使用性控冻精既能增加生产效益袁 同时也能改良种群品种袁 是目前奶牛生产繁育性别控制的首选途 径遥 而分离过程作为性控冻精生产中技术性较强的一个环节尤其重要袁本文主要对精液分离操作环节的一 些注意事项进行了简要的分析阐述袁以期对性控冻精分离生产过程起到一定的指导作用遥 关键词院性控冻精曰流式细胞分离仪曰分离曰Drop delay
2 图像调节 此处的图像是指主控柜上打点平面示波器上 所显示的 X尧Y 精子的分离图像遥 图像越清楚表明 流式细胞分离仪对此时上机精液的分离效果越好袁 分离产品的速度及准确率就会更高袁而想要获得清 晰稳定的图像主要是通过调节分离仪上的三组镜 片来完成遥 中 间 一 组 镜 片 的 主 要 作 用 分 别 是 调 节 TIP 头 位置尧控制中间液流位置尧调节激光的聚散袁其中控 制 TIP 头位置的旋钮在 Drop delay 查找完毕以后一 定不能再触动袁否则产品的分离准确率将会受到严 重影响遥 另一组是 Laser-Focusing 定位器上的镜片袁 这组镜片的作用是院1.调节焦距袁起到聚焦作用曰2. 把激光的点光源变成平行的线光源袁以便于激光切 割液流遥 这条线光源的特点是光线不均匀袁中间强袁 两边弱袁因此调节此组镜片的要领为尽量让中间光 线最强处与含 X尧Y 精子的液流相交遥 第三 组 为 FAF 聚 焦镜 袁其 作 用 是 采 集 尧聚 焦 激 光 照 射 到 液 滴 上后所产生的荧光信号袁再通过光电倍增管将荧光 信号转化为电信号遥 通过调节以上这三组镜片上的 9 个旋钮即可 达到调节分离图像的目的遥 我们在调节中需注意以 下几个方面院 1.保持镜片清洁袁如果镜片太脏将会出现图形 模糊的现象遥 2. 镜片中间有一根细挡板袁 其作用是挡住激 光袁保留荧光遥 但在分离过程中袁由于激光长期照 射袁挡板表面会出现灼烧痕迹袁造成激光漫反射袁影 响荧光信号收集遥 3. 调节图像时应尽量把图形调到示波器的右 上 方 袁 以 降 低 主 控 柜 上 SAF尧FAF 的 数 值 遥 因 为 SAF尧FAF 的数值越大袁表明分离图像被放大的倍数 越大袁图像的聚焦度也就越差袁最终导致图像模糊袁 并且容易发生图像不稳定袁上下飘动的结果遥 4.TIP 头需 要保 持 清洁 及 畅 通 遥 TIP 头 如 若 堵 塞袁重则无法分离袁轻则影响分离效果遥 好的分离图 像为两条完全分开的直线袁 上面一条表示 X 精子袁 下面一条表示 Y 精子遥 当 TIP 不畅通时袁会出现分 离效果不好或出现勾状袁从上往下勾袁则表示 X 精 子进入 Y 精子中袁那么分离速度会降低袁如果从下
3.液流调节袁当偏转电场通电后袁由于电磁原 理袁从 TIP 流下 的 液流 会变 成 3 股 袁它 们 分别 是 院X 精子尧Y 精子及废液遥 只有通过对频率尧振幅尧相位 的调整使之成为 3 股不分叉的液流袁才能保证不同 的液流进入不同的收集器内遥 反之不光无法正常收 集袁液流还会流到偏转电场内的电极板上袁造成电 极板损坏及操作人员被电的危险遥
高效尧简便尧低成本尧易掌握的精液分离方法是 生产性控冻精的必备条件遥
迄今为止袁现有的精液分离方法中流式细胞分 离法是目前唯一一种相对准确的分离方法袁也是唯 一一种可以大量进行冻精生chest33342 对精子进行染色袁由于精子 DNA 含量 的不同袁 牛的 X尧Y 精子 DNA 含量差异为 3.8%袁因 此结合的荧光染料量也各不相同遥 染色后的精液通 过流式细胞分离仪的上样系统袁形成单个精子排列 的液柱袁再通过 TIP 头的高频震荡形成单个精子的 液滴遥 当每个液滴与激光光束相交时袁X 精子由于 结合的荧光染料更多袁因此它被激光激发的光信号
1 Drop delay 的准确判定 Drop delay 是 指 流 式 细 胞 分 离 仪 识 别 X尧Y 精 子并对其进行加电的这段延迟时间遥 Drop delay 的 准确判定是保证分离准确度的主要因素遥 其判定步 骤可以分为以下几步院
70
叶奶牛曳 2019 年 06 期
技术交流
1.首先将 TIP 头位置调整到与液滴照相监视器 上缘刚好相交的位置袁 这样是为了保证 Drop delay 数据的准确及随后分离图像的顺利调节遥
2.分离图像调节袁这样做的目的是提前定位图 像遥 因为如果图像出现带有勾状或是分散不聚拢的 情况袁打点平面示波器中的 Drop delay 也 会 对应 出 现带勾 或是分散袁那么在电脑的 Drop delay 界面 中 被框选的区域就会相应扩大袁从而把周围一些杂质 信号框选进去导致 Drop delay 判定困难遥