蛋白冻干 实验流程

蛋白冻干实验流程
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蛋白质冻干实验流程。

1. 样品制备。

将蛋白质溶液转移到冻干瓶或小瓶中，控制填充量以避免冻结膨胀引起瓶盖变形。

对于液体样品，可以加入冷冻保护剂（如甘油、蔗糖或海藻糖）以防止样品在冻结过程中结晶。

2. 预冻结。

将冻干瓶或小瓶置于超低温冰箱中（-80℃或更低）进行预冻结，持续数小时或过夜，直到样品完全冻结。

预冻结可以使样品形成小冰晶并均匀分布，有利于后续的升华干燥。

3. 初步干燥（升华干燥）。

将预冻结的样品转移到冻干机中。

将样品室温度保持在低温（通常为-40℃至-50℃）以防止样品融化。

抽真空至一定压力（通常为0.1-1.0mbar）以使冰晶直接升华成水蒸气。

升华干燥持续数小时或数天，直到样品中大部分水分被去除。

4. 二次干燥（解吸干燥）。

升华干燥完成后，将样品室温度缓慢升高（通常为10-50℃）。

保持低真空（通常为5-10mbar）以去除样品中吸附的水分。

解吸干燥持续数小时或数天，直到样品达到预定的干燥程度。

5. 封盖和回温。

解吸干燥完成后，填充惰性气体（如氮气）或使用导电塑料帽封盖样品。

将样品缓慢回温至室温。

封盖和回温过程可以防止样品重新吸收水分。

6. 质量控制。

对冻干后的样品进行质量控制，包括水分含量、收率和稳定性。

水分含量可以通过卡尔·费休滴定法或失重法测定。

收率可以通过冻干前后的样品重量差异计算。

稳定性可以通过监测样品在存储期间的物理或化学变化（如变色、结块）来评估。

注意事项。

样品填充量应控制在瓶子容积的1/3至1/2范围内，以避免冻结膨胀。

预冻结过程应缓慢进行，以防止样品开裂。

升华干燥和解吸干燥的温度和真空度应根据样品的性质进行调整。

冻干过程应避免光照，以免样品降解。

冻干后的样品应妥善密封和储存，以防止吸收水分。