紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量
紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量
紫外光谱分析测定饮料中咖啡因的含量摘要咖啡因，一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力。
因此，目前咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神药品.现今含咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，随着可口可乐，百事可乐等碳酸饮料在全世界的风靡,各种可乐型饮料已成为人们在日常饮食中摄取大量咖啡因的一主要来源之一。
但大量咖啡因的摄取会严重影响人们的健康,因此各国对饮料中咖啡因的含量都做出了相应的限制与规定。
虽咖啡因具有提神醒脑刺激中枢神经的作用,但长期引用含大量咖啡因的饮料,易上瘾,为此，各国制订了咖啡因在饮料中相应的食品卫生标准。
美国，加拿大,阿根廷，日本,菲律宾规定饮料中咖啡因的含量不的超过200mg/L，南斯拉夫规定不得超过120mg/L，目前我国允许饮料中加入咖啡因并规定其含量不得150mg/kg。
为加强国家食品卫生监督管理，建立简便得咖啡因的检测标准十分必要。
关键词紫外分光光谱法;饮料；咖啡因；含量测定前言咖啡因又名生物碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1,3，7-三甲基黄嘌呤.白色，无臭味，一般成发亮针丝状或为粉末状的结晶。
熔点为234—238℃,178℃升华，能溶于乙醚，丙酮,氯仿,水，微溶于石油醚。
以往测定咖啡因含量时都采用容量法,因操作复杂不太理想。
实践证明本实验采用的方法简单快速准确，可用于可乐型饮料中咖啡因的测定。
本文采用紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量，该方法简便，稳定，准确，灵敏度高，同时也可巩固所学的知识。
紫外分光光度法是可乐型饮料，咖啡和茶叶以及其制成品中咖啡因含量测定的简便方法,其快速，准确。
其最低检出浓度：紫外法对可乐型饮料为3mg/L，对咖啡茶叶以及其固体制品为5mg/100g，对咖啡和茶叶的液体制品为5mg/L。
一紫外可见分光光度计的概述（一）分光光度法原理通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
紫外分光光度计测定咖啡因含量(育英)
二、样品预处理:
（1）将25mL可口可乐置于一100mL洁净、 干燥的烧杯中，于电炉上加热15min，以赶 尽可乐中二氧化碳。
（2）准确称取0.1g速溶咖啡，用20mL蒸馏 水煮15min，冷却后待用。
（3）准确称取0.1g茶叶，用20mL蒸馏水煮 沸10min，冷却后，取上层清液，转移到容 量瓶中;并按此步骤再重复一次。
将上述三种样品分别转移至50mL容量瓶中， 并定容至刻度。
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上述三份样品溶液分别进行干过滤（即 用干漏斗、干滤纸过滤），弃去前过滤 液，取后面的过滤液，上分光光度计测 定。
结果:
1、请写出标准曲线，相关性，及线性范 围；
2、算出样品中咖啡因含量（ug/ml或ug/g)
注意:
分光光度计最佳的读数范围:0.2~0.7； 样品中咖啡因含量比较高，根据实际情
一、咖啡因标准曲线绘制:
从无水乙醇为溶剂的咖啡因储备液( c = 500. 0μg/ mL) 中移取适量标准品于6个50 mL 容 量瓶中用水定容,得到浓度
为2. 00 ,4. 00 ,6. 00 ,8. 00 ,10. 00 ,12.00μg/ mL 的系列标准溶液. 在紫外分光光度计上测其 在273 nm处的吸光度A ,得标准曲线
咖啡因的含量是可可类食品,饮料和茶叶的一个 重要品质指标,测定它的含量一直受到分析工作 者的广泛关注.
实验原理
咖啡因在273nm处有最大光值,因此选择 273nm作为咖啡因的检测波长.
由于273nm在紫外光范围内,因此要使用 紫外分光光度计,并且要使用石英比色皿.
实验目的:
学会使用紫外分光光度计; 学会三种样品的预处理;
紫外分光光度计测定咖啡因 含量
咖啡因又称咖啡碱,化学名为1 ,3 ,7 - 三甲基 苯嘌呤. 咖啡因是可可类食品及饮料,茶叶中含 有的嘌呤类生物碱,它溶于水、醇、氯仿、二氯 甲烷等溶剂.
饮料中咖啡因的测定
饮料中咖啡因的测定
相关背景：2013年7月19日，国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布了GB/T 29602-2013《固体饮料》，该标准于2014年2月1日起正式实施。
标准的出台填补了国内饮料标准体系中的固体饮料标准的空白，将进一步规范固体饮料的生产及市场，有利于国家质量监督机构对固体饮料产品的监管。
饮料中咖啡因的测定是可乐型饮料、咖啡、茶叶、及其制成品必检的成分之一。
依据标准：中华人民共和国国卫生部和中国国家标准化管理委员会发布《GB/T 5009.139-2003 饮料中咖啡因的测定第一法紫外可见分光光度法》
检测方法简介：
咖啡因的三氯甲烷溶液在276.5nm（10mm光程比色杯）波长下有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而可以进行定量。
1、可乐型饮料：脱气后移入分液漏斗，加入相关处理溶液进行萃取，得到咖啡因萃取
液，备用。
2、咖啡、茶叶及其固体试样：粉碎成低于30目的均匀试样，加入沸水浸泡，浸出液
进一步处理后萃取得到咖啡因萃取液，备用。
3、咖啡或茶叶的液体试样：加入醋酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液前处理后萃取得到咖啡
因萃取液，备用。
赛默飞世尔科技有限公司（ThermoFisher）的紫外可见分光光度计产品完全能够满足上述检测需要，并且可以为客户提供方法建立的工作，以方便有此需求的客户快速使用仪器，达到单位检测要求。
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紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量样品前处理方法探讨
紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量样品前处理方法探讨谷苗苗;王尉嘉;王迪;周爱东【摘要】探讨了使用紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量过程中样品经有机溶剂萃取后,由于离心分离或静置不充分而产生吸光度增加的原因.通过实验验证萃取后离心(静置)步骤的必要性,比较了干燥、离心、静置和静置后离心4种前处理方法的相对误差,结果表明:离心分离可以减少水滴散射带来的误差,快速达到静置的效果并且节约时间,离心分离是最佳的样品前处理方式.【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】3页(P42-44)【关键词】紫外分光光度法;咖啡因;离心分离;样品前处理【作者】谷苗苗;王尉嘉;王迪;周爱东【作者单位】南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学化学化工学院,江苏南京 210093【正文语种】中文【中图分类】G642.0;TS275咖啡因(C8H10N4O2)是从茶叶、咖啡果中提炼出来的一种甲基黄嘌呤的生物碱。
它是一种中枢神经兴奋剂,适量食用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经等作用,临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏,但是大剂量或长期使用有损人体健康[1]。
在通常的饮料如咖啡、茶和可乐以及头痛药、止疼药中都发现有咖啡因的存在[2]。
目前饮料中咖啡因的检测方法有:紫外分光光度法[3]、气相色谱法[4]、气相色谱-质谱仪联用[5]、高效液相色谱法[6]、毛细管胶束电动色谱法[7]、二阶导数光谱法[8-9]、咖啡因离子选择性电极[10]、氮蒽橙法[11]、HPLC-ES-MS法[12]等。
为培养学生创新意识和科学研究能力[13],我校在仪器分析实验教学中引入设计实验环节。
在设计实验中发现:采用紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量时,同种可乐用三氯甲烷萃取后随静置时间的增加,吸光度值明显减小而后趋于稳定。
F SP YL 饮料 咖啡因的测定 紫外分光光度法
FSPYL019 饮料咖啡因的测定紫外分光光度法F_SP＿YL_019饮料—咖啡因的测定—紫外分光光度法1 范围本方法采用紫外分光光度法测定饮料中咖啡因的含量。
本方法适用于可乐型饮料、咖啡、茶叶及其制成品中的咖啡因含量的测定，结果以咖啡因计。
本方法仪器检出限为0.2μg／mL，方法检出限可乐型饮料为3 mg/L，咖啡、茶叶及其固体制成品为5mg/100g，咖啡或茶叶的液体制品为5 mg／L，测定值保留一位小数。
2 原理用三氯甲烷萃取试样中的咖啡因，此溶液在波长276.5nm处有最大吸收，其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比，从而可进行定量。
3试剂3.1 无水硫酸钠。
3.2 三氯甲烷：使用前重新蒸馏。
3.3 高锰酸钾溶液，15g/L称取1.5 g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。
3.4 亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液称取10g无水亚硫酸钠(Na2SO3)，用水溶解并稀释至100mL。
另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至100mL,然后二者均匀混合。
3.5 磷酸，15+85吸取15 mL磷酸置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
3.6 氢氧化钠溶液，200g/L称取20g氢氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。
3.7 乙酸锌溶液，200g/L称取20g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H20]，加入3mL冰乙酸，用水溶解并稀释至100mL。
3.8 亚铁氰化钾溶液，100g/L称取l0 g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H20]用水溶解并稀释至100mL。
3.9 咖啡因标准品：含量98.0％以上。
3.10 咖啡因标准储备液，0.5mg/mL根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成1mL相当于0.5 mg咖啡因的溶液，置于冰箱中保存。
4 仪器紫外分光光度计。
5 操作步骤5.1 标准曲线的绘制从咖啡因标准储备液（0.5mg/mL）中，用重蒸三氯甲烷配制成浓度分别为0、5、10、15、20µg／mL 的标准系列，以0µg／mL作参比管，调节零点，用1 cm比色杯于276.5 nm下测量吸光度，作吸光度－咖啡因浓度的标准曲线或求出直线回归方程。
紫外光谱法测定饮料中的咖啡因含量
化学研究 CH EM ICA L R ESEA RCH
中国科技核心期刊 hx y j@ henu. edu. cn
紫外光谱法测定饮料中的咖啡因含量
孙延春, 张 英
( 四川理工学院 化学与制药工程系, 四川 自贡 643000)
摘 要: 建立了一种测定饮 料中咖啡因含量的紫外光谱 分析法. 采 用三氯甲 烷为萃 取剂, 控制 三氯甲烷 与饮料
准确称取咖啡因标准样品 0. 050 0 g 于 250 m L 容量瓶中, 用三氯甲烷定容得质量浓度为 200 mg/ L 的 储备液. 配成 2 mg / L 、5 m g/ L 、10 mg / L 、15 mg/ L、20 mg / L 、25 mg/ L、30 m g/ L 、35 mg / L 、40 m g/ L 、50 mg/ L 的系列标准溶液, 以三氯甲烷作参比溶液, 分别测定其在 276 nm 处的吸光度值, 绘制标准曲线. 1. 2. 2 样品分析
的体积比为 8 B 1, 经充 分振荡后离心分离, 取清液在 276 nm 处测定紫外吸收光谱, 能够满 意地测定 市售饮料中
的咖啡因浓度. 分析结果的相对标 准偏差小于 4% ; 在饮料中加入不同浓度的咖啡因标准溶液, 回收率在94. 0%
~ 112. 0% 之间.
关键词: 饮料; 咖啡因; 紫外光谱; 测定
咖啡因 ( 1, 3, 7- 三甲基黄嘌呤) 是一种生物碱, 为弱碱性化合物, 无色针状晶体, 无臭、味苦[ 1] . 在通常的 饮料如咖啡、茶和可乐饮料[ 2] , 以及头痛药、止痛药中都发现有咖啡因的存在[ 3] . 适量食用咖啡因有驱除疲 劳、兴奋神经等作用, 临床上用于神经衰弱、伤风、偏头痛等疾病的治疗, 但长期大量摄取咖啡因有损人体的 健康, 如咖啡因自身的毒性, 可引发心脏病, 对人体骨骼状况及钙平衡产生不利影响等[ 4] . 饮料已成为我们 日常生活中不可缺少的摄取水分和营养的产品, 咖啡因的含量是饮料的一个重要品质指标, 因此测定饮料中 咖啡因的含量一直备受研究人员关注. 测定咖啡因的方法有很多, 如气相色谱法[ 5] 、高效液相色谱法[ 6] 、薄 层色谱法[ 7] 、毛细管电泳[ 8] 及紫外分光光度法等[ 9- 10] . 本实验采用三氯甲烷作为萃取剂, 将混合液充分振荡 后离心分离, 可取得较理想的萃取效果.
紫外光谱法测定饮料中的咖啡因含量
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ａ ｆ ｉ ｅ ｉ ｅ ｅ ａ ｅ ｙ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆ ｃ ｆ ｅ ｎ ｎ ｂ ｖ ｒ ｇ ｓ ｂ
第 ２ ２卷 第 １期
２１ ０ １年 １月
化
学 研
究
中 国科 技 核 心 期 刊
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Hale Waihona Puke ＲＥＳＥＡ ＲＣＨ 紫 外 光 谱 法 测 定 饮 料 中 的 咖 啡 因 含 量
孙延春， 英 张
（ 川理工学院 化学与制药工程系 ， 四 四川 自贡 ６ ３ ０ ） ４ ００
ｕ ｔ ａｖ ｏ ｅ ｐｅ ｔ ｏ ｌｒ ｉ ｌ ｔ ｓ ｃ ｒ ｐｈｏ ｏｍ ｅ ｒ ｔ ｔｙ
ＳＵ Ｎ ａ — ｈｕｎ， ＺＨ Ａ Ｎ Ｇ ｉ Ｙ ｎｃ Ｙ ｎｇ
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紫外分光光度法测定功能性饮料中的咖啡因含量
国家有关规定，功能性饮料中咖啡因的含量不能高于 150mg/ kg，因此咖啡因的含量是功能性饮料中一个关键的配料 [4]，有 效测定其含量很重要，这对人们在选择饮料的时候有很好的
借鉴意义。 1 实验材料与方法 1.1 实验试剂
经实验证明，波长 273nm，样品处理的温度为 30℃，处 理时间为 15min 时吸光度最大。 2.2 标准曲线
取 8 支 50mL 已 编 号 的 容 量 瓶 准 确 移 取 0mL、0.50mL、 1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、3.50mL 的标准 储备液，加入乙酸乙酯溶液，然后定容，摇匀备用。其中 1 号 容量瓶中的溶液作空白。用 UV 法在 273nm 波长下测 A。然 后做标准曲线，计算出线性回归方程。如图 1 所示。
咖啡因标准品、乙酸乙酯、生石灰、活性炭。 1.2 样品处理
分别取适量四种市售功能性饮料，放入超声波清洗器中
进行脱气脱色。然后加入定量的乙酸乙酯进行萃取，之后离心，
取上层清液定容。 1.3 样品测定
吸取样品滤液于 50mL 容量瓶中，加入乙酸乙酯定容，摇 匀。在最大吸收波长下分别测定 4 个样品的吸光度，每个样品 做 3 次平行实验 3 次取平均值。 2 结果与分析 2.1 实验条件的确定
样品 1
样品 2
样品 3
体积（mL）
7.036 0
Key words ：UV spectrophotometric ；caffeine ；functional beverage ；ethyl acetate ；extraction
近年来，人们越来越喜爱能够去除疲劳、提神醒脑的功 能性饮料，其中大多数都含有咖啡因 [1]。功能性饮料中不仅
紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量(最新整理)
白色，无臭味，一般成发亮针丝状或为粉末状的结晶。
熔点为银、铁等元素的测定，已有比较满意的方法了。
4准确度高对于一般的分光光度法来说，其浓度测量的相对误差在1 – 3%范围内，如采用示差分光度法测量，则误差往往可减少到千分之几。
5适用浓度范围广可从常量（1-50%）(尤其是使用示差法)到恒量（10-6-10-8%）（经预富集后）6分析成本低、操作简便、快递（三）紫外可见分光光度法的应用1、有机化合物定性鉴定的一般方法2、有机化合物结构的测定（1）共轭体系的判断（2）分子骨架的推定（3）构型、构象的测定（4）互变异构体的测定（5）标准光谱的应用3、氢键强度与摩尔质量的测定（1）氢键强度的测定（2）摩尔质量的测定4、定量分析5、在轻工、化工产品中的应用（1）洗涤制品、化妆品中表面活性剂分析（2）木素化学结构研究及木素含量测定（3）食品中添加剂及维生素分析二紫外分光光度法测饮料中咖啡因含量（一）实验药品及仪器1 药品本实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水。
(1) 无水硫酸钠(2) 三氯甲烷使用前重新蒸馏(3)1.5(m/v)高锰酸钾溶液：称取1.5g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。
(4) 亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取1Og无水亚硫酸钠，用水溶解并稀释至1OOmL，另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至1OOmL，然后一者均匀混合。
(5) 15%(v／v)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于1OOmL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
(6) 20%(m／V)氢氧化钠溶液：称取20g氧氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。
(7) 20%(m/V)醋酸锌溶液：称取20g醋酸锌[Zn (C~COO)：．2H20]加入3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
(8) 10%(m／V)亚铁氰化钾溶液：称取10g亚铁氰化钾。
[K4Fe (CN)6·3H2O]用水溶解并稀释至100mL。
(9）咖啡因标准品：含量98 0%以上。
离心萃取-紫外光度法快速测定茶饮料中的咖啡因
离心萃取-紫外光度法快速测定茶饮料中的咖啡因作者：信建豪来源：《湖北农业科学》2012年第04期摘要：建立以三氯甲烷为提取剂，以离心萃取为提取方法，以２７６ｎｍ为检测波长的茶饮料中咖啡因的检测方法。
结果表明，吸光度Ａ与咖啡因浓度Ｃ在５．３２４～１６．９４0 ｍｇ／Ｌ呈现良好的线性关系，相关系数为０．９９９５，回收率为９７．６％～９９．４％。
该方法测定快速、准确度高，适用于茶饮料中咖啡因的测定。
关键词：离心萃取；快速测定；咖啡因；茶饮料。
中图分类号：Ｏ６５６．３３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）04－0810-03茶饮料是当今的流行饮料，也是现代人摄入咖啡因的一个重要途径。
咖啡因又名咖啡碱（化学名称为１，３，７－三甲基－２，６二氧嘌呤），属于生物碱，是决定茶滋味、颜色的主体成分［１］，也是茶饮料的重要品质指标。
咖啡因不仅作用于大脑皮层，还能直接兴奋延髓，引起阵发性惊厥和骨骼震颤，进而损害肝、胃、肾等重要内脏器官，诱发呼吸道炎症、妇女乳腺瘤等疾病，甚至导致下一代智能低下，肢体畸形［２］，大量或长期摄取咖啡因有损人体的健康。
建立茶饮料中的咖啡因的快速分析方法，对保障对于快速评价茶饮料质量具有重要意义。
目前测定饮料中咖啡因的方法有很多种，常用的方法主要有碘量法、重量法、比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱法［３，４］、气相色谱法、气相－质谱联用［５，６］、近红外法［７］等。
本研究通过建立离心萃取－紫外光度法测定茶饮料中的咖啡因，为快速准确评价茶饮料中的咖啡因提供了技术参考。
１材料与方法１．１试剂与仪器咖啡因标准品购于中国药品生物制品检定所，三种不同品牌茶饮料样品购于当地华联超市，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
咖啡因储备液：精密称取咖啡因标准品１２．１ｍｇ，以三氯甲烷定容于１００ｍＬ干燥容量瓶中，备用。
ＫＱ－３００Ｖ超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司），ＴＬ８０－１型医用离心机（姜堰市天力医疗器械有限公司）、ＴＵ１８１０型紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色谱仪（日本岛津株式会社）。
非酒精饮料中的咖啡因化学分析方法
非酒精饮料中的咖啡因化学分析方法咖啡因是一种天然存在于咖啡、茶、可可和一些软饮料中的生物碱。
它是一种心理兴奋剂，能够刺激中枢神经系统和呼吸系统。
咖啡因也具有一定的医疗和药理作用，在非酒精饮料中的含量监测和分析对于食品安全和质量控制非常重要。
咖啡因在非酒精饮料中的分析方法主要可以分为以下几种：1.色谱法：色谱法是目前应用最广泛的分析方法之一、常见的色谱方法有气相色谱法和液相色谱法。
气相色谱法主要用于分析气体样品中的咖啡因，而液相色谱法适用于液体样品中咖啡因的分析。
这两种方法都需要对样品进行前处理，如提取和浓缩，然后使用色谱仪进行分离和检测。
色谱方法具有高分辨率、高灵敏度和高选择性的优点，能够准确测定非酒精饮料中的咖啡因含量。
2.光谱法：光谱法主要包括紫外-可见光谱法和红外光谱法。
紫外-可见光谱法是通过测定咖啡因分子所吸收的能量来确定其浓度。
红外光谱法则是通过测定咖啡因分子的振动和转动能量来确定其浓度。
这两种方法都具有快速、简便和非破坏性的优点，但相对于色谱法来说，灵敏度和分辨率较低。
3.电化学法：电化学法是通过测量咖啡因溶液中电流或电势的变化来确定其浓度。
常见的电化学方法有伏安法、电导率法和电化学生物传感器法。
这些方法具有高灵敏度、快速响应和便于携带的特点，适用于现场检测和快速分析。
此外，还有其他一些方法可用于非酒精饮料中咖啡因的分析，如质谱法、核磁共振法和荧光光谱法。
这些方法都具有各自的优缺点和适用范围，可以根据不同的分析需求选择合适的方法进行分析。
总之，对于非酒精饮料中的咖啡因化学分析方法而言，选择适当的分析方法对于准确测定咖啡因含量和保证食品安全至关重要。
同时，需要考虑到分析方法的灵敏度、选择性、简便性和成本等因素，以满足实际应用的需求。
饮料中咖啡因的测定作业指导书(紫外分光光谱法)
饮料中咖啡因的测定作业指导书1.目的判断咖啡饮料、茶饮料生产结束后CIP冲洗水中是否存在咖啡因残留及饮料中咖啡因含量的测定。
2.适用范围适用于公司CIP冲洗水、咖啡及茶饮料中咖啡因含量的测定。
3.职责3.1品控员负责检验。
3.2 QC主任、QA主任负责监督本文件的有效执行。
4.定义无5.程序5.1 仪器与试剂5.1.1 仪器紫外分光光度计、250ml分液漏斗、100ml容量瓶、1cm比色皿、25ml具塞试管、分析天平（精确到0.1mg）、电子天平（精确到0.01g）。
5.1.2 试剂无水硫酸钠（AR）、三氯甲烷（AR,使用前重新蒸馏）、咖啡因（≥98%）；15g/L高锰酸钾：称取1.5g高锰酸钾（AR），用水溶解并稀释至100ml。
亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取10g无水亚硫酸钠（AR），用水溶解并稀释至100ml；另称取10g硫氰酸钾（AR），用水溶解并稀释至100ml，然后二者均匀混合。
15%磷酸：吸取15ml磷酸（AR）置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。
200g/L氢氧化钠：称取20g氢氧化钠（AR）、用水溶解，冷却后稀释至100ml。
200g/L醋酸锌：称取20g醋酸锌（AR）加入3ml冰乙酸（AR），加水溶解并稀释至100ml。
100g/L亚铁氰化钾：称取10g亚铁氰化钾（AR），用水溶解并稀释至100ml.咖啡因标准储备液：根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成每ml相于0.5mg咖啡因的溶液，置于冰箱中保存。
5.2 试样处理5.2.1在100ml容量瓶中准确移入10-20ml均匀试样，加入2ml200g/L醋酸锌溶液，摇匀，加入2ml100g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，用水定容至100ml，摇匀，静置沉淀，过滤,滤液备用。
5.2.2取滤液5-20ml加入到250ml分液漏斗中，再加入5ml15g/L高锰酸钾溶液，摇匀，静置5min，再加入混合溶液10ml，摇匀，再加入50ml重蒸三氯甲烷，振摇100次，静置分层，用100ml容量瓶收集三氯甲烷；水层再加入40ml重蒸三氯甲烷，振摇100次，静置分层，再用100ml容量瓶（第一次已收集）收集三氯甲烷，用重蒸三氯甲烷定容至100ml，摇匀，备用。
紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量样品前处理方法探讨
紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量样品前处理方法探讨谷苗苗;王尉嘉;王迪;周爱东
【期刊名称】《实验技术与管理》
【年(卷),期】2015(032)006
【摘要】探讨了使用紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量过程中样品经有机溶剂萃取后,由于离心分离或静置不充分而产生吸光度增加的原因.通过实验验证萃取后离心(静置)步骤的必要性,比较了干燥、离心、静置和静置后离心4种前处理方法的相对误差,结果表明:离心分离可以减少水滴散射带来的误差,快速达到静置的效果并且节约时间,离心分离是最佳的样品前处理方式.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】谷苗苗;王尉嘉;王迪;周爱东
【作者单位】南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学金陵学院化学与生命科学学院,江苏南京 210089;南京大学化学化工学院,江苏南京 210093
【正文语种】中文
【中图分类】G642.0;TS275
【相关文献】
1.紫外分光光度法法测定可乐中咖啡因的含量 [J], 武开业;周昌利;雷林
2.紫外分光光度法测定饮品中咖啡因的含量 [J], 展惠英;
3.紫外分光光度法测可乐中咖啡因的含量 [J], 刘清华
4.紫外分光光度法测定饮料制品中的咖啡因含量 [J], 张薇
5.紫外分光光度法测定可乐中咖啡因的含量 [J], 武开业
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紫外分光光度法测定可乐中咖啡因的含量
2.1 方法的精密度尧线性关系和检出限 配制浓度为 0尧5尧10尧15尧20 ug/mL 的咖啡因三氯甲烷标准溶液袁
以 0 ug/mL 标准溶液作参比袁每个浓度在 276.5nm 波长下测定 6 次吸 光度值袁RSD 在 0.19%耀1.85%之间. 分别测定不同浓度的咖啡因标准 溶液的吸光度值袁 咖啡因浓度在 0耀30 ug/mL 范围内与吸光度值呈良 好线性关系袁线性回归方程为 Y越0.456 X-0.0019,相关系数为 0.9998袁 方法检出限为 3ug/mL遥 2.2 实际样品测定
2 结果与讨论
方法的相对标准偏差为渊RSD冤在 0.25%耀2.03%之间袁同时做回收 率实验袁加标回收率为 97.5%耀101.3%遥
3 小结
通过对实际样品的测定袁本方法可以快速尧准确地测定可乐饮料 中的咖啡因袁 可满足食品安全中对可乐饮料中咖啡因含量检测的要 求遥
揖参考文献铱 咱1暂Maurice H, Andre de K. J. Chrom atogr. A[J].2007,1154(1):3-25. 咱2暂Eiji U., Harumi O., Isao S., Hiroshi M. J.. AOAC. Int.[J].2003, 86(6):1241-1251. 咱3暂Pang G. F., Liu Y. M., Fan C. L., Zhang J. J. , Cao Y. Z., Li X. M., Li Z. Y., Wu Y. P., Guo T. T.. Anal. Bioanal. Chem[J].2006,384:1366-1408. 咱4暂Darinka S., Lucija Z. J.. Chrom atogr. A[J].2003, 1015(1): 185-198. 咱5暂Ji Sujuan, Liu Changjiang, Sato Motoaki, Li Dongxiu, Li Junqi. PTCA Part B: Chem. Anal[J].2006, 42(11): 914-917.纪淑娟,刘长江,佐藤元昭,李冬秀,李俊奇.理 化检验:化学分册[J].2006,42(11):914-917. 咱6暂Zhang H., Chen Z. L., Yang G. S., Wang W. Z., Li X. Q., Li R. J., Wu Y. J.. Food Chem istry[J].2008, 108(1):322-328. 咱7暂Sheng Xuan, Chen Changjun, Ding Zhenhua, et al. Chinese Journal of Analys is Laboratory[J], 2006, 25(7): 75.盛旋,陈昌骏,丁振华,等.分析试验室[J].2006,25(7):75.
紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量
紫外光谱分析测定饮料中咖啡因的含量一实验目的1 熟悉分光光度计的操作2 掌握分光光度计的使用方法二实验原理咖啡因又名生物碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1,3,7—三甲基黄嘌呤。
紫外分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
三实验仪器和试剂1 仪器紫外分光光度计2 试剂本实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水。
(1) 无水硫酸钠(2) 三氯甲烷使用前重新蒸馏(3)1.5(m/v)高锰酸钾溶液：称取1.5g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。
(4) 亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取1Og无水亚硫酸钠，用水溶解并稀释至1OOmL，另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至1OOmL，然后一者均匀混合。
(5) 15%(v／v)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于1OOmL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
(6) 20%(m／V)氢氧化钠溶液：称取20g氧氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。
(7) 20%(m/V)醋酸锌溶液：称取20g醋酸锌[Zn (C~COO)：．2H20]加入3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
(8) 10%(m／V)亚铁氰化钾溶液：称取10g亚铁氰化钾。
[K4Fe (CN)6·3H2O]用水溶解并稀释至100mL。
(9）咖啡因标准品：含量98 0%以上。
(10) 咖啡因标准储备液：根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成每mL相当于0.5mg咖啡液，置于冰箱中保存。
四实验内容1 样品的处理在250mL的分液漏斗中，准确移入l0.0mL经超声脱气后的均匀可乐型饮料试样，加入1.5%高锰酸钾溶液5mL，摇匀，静置于5min，加入混合溶液10mL，摇匀，加入30mL重蒸三氯甲烷。
振摇100镒，静止分层，收集三氯甲烷。
水层再加入10mL重蒸三氯甲烷，振摇100次，静置分层。
合并二次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，摇匀，备用。
可乐饮料中咖啡因含量的测定
可乐饮料中咖啡因含量的测定武思齐【摘要】为检测可乐饮料中咖啡因含量,采用紫外分光光度法,通过配制不同浓度的咖啡因标准溶液,进行紫外光谱扫描,测定咖啡因的最适波长为276.4.将不同浓度的咖啡因标准品在276.4nm波长处测定其吸光值,绘制标准曲线,得出线性回归方程为y=0.0486x-0.0076,相关系数R2 =0.9971.再对可乐饮料样品进行检测,结果表明:相对偏差在0.1％-0.2％之间,实验操作简单,快速.【期刊名称】《贵阳学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(009)004【总页数】3页(P54-56)【关键词】咖啡因;紫外分光光度法;可乐饮料;准确度;精密度【作者】武思齐【作者单位】贵阳学院生物与环境工程学院,贵州贵阳550005【正文语种】中文【中图分类】Q93-3311 前言咖啡因，又名咖啡碱，在食品饮料等生产工业中被普遍使用，具有提神醒脑、减少疲劳感、增强大脑皮质兴奋程度的作用。
但长期或大量摄取咖啡因对人体的健康有损，如咖啡因自身的毒性，会引起心脏病等;特别是妇女和儿童更加需要在医生的指导下服用咖啡因［1］－［2］。
在众多可乐型饮料中大多含有咖啡因，且含量不一，同时各国对可乐饮料中咖啡因的含量也都做了不同的规定。
设计一种简便、有效、经济、快速、容易推广的分析方法用于测定可乐饮料中咖啡因的含量非常重要。
本文运用紫外分光光度法测定可乐饮料中咖啡因含量，为可乐饮料中咖啡因含量的快速测定提供一定的参考。
2 实验材料与方法2．1 实验材料可口可乐(瓶装)，可口可乐(罐装)，百事可乐(瓶装)，百事可乐(灌装)，无咖啡因儿童可乐。
2．2 实验仪器表1 实验仪器Tab．1 The experimental instrument主要实验仪器和设备生产厂家UV－2550紫外分光光度计日本岛津公司80－1离心沉降机姜堰市新康医疗器械有限公司ALB－224型电子分析天平赛多利斯科学仪器有限公司医用注射器常州市双马医疗器材有限公司2．3 实验试剂表2 实验试剂Tab．2 Experimental reagents主要试剂生产厂家咖啡因标准品上海梅香实业有限公司三氯甲烷东营市隆兴化工有限责任公司2．4 咖啡因标准品测定［3］－［4］2．4．1咖啡因标准溶液的配制精确称取0．0500g咖啡因标准品于100ml容量瓶中，以三氯甲烷为溶剂，配制成100ml咖啡因溶液，即500mg/L的标准品溶液。
紫外分光光度法测可乐中咖啡因的含量
紫外分光光度法测可乐中咖啡因的含量
刘清华
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2013(040)019
【摘要】目的:用紫外分光光度法测定可乐中咖啡因的含量,建立测定可乐中咖啡因的含量的紫外分光光度法的最佳工作条件.方法:采用离心的方法提取样品中的咖啡因,用紫外分光光度法在276 nm处测含量.结果:咖啡因浓度在5～50 μg/mL范围内与紫外吸收有较好的线性关系(y=0.0489x-0.0084,R2=0.9991).可口可乐中咖啡因的含量为93.5 μg/mL,回收率为99.1％,RSD％为0.94％；百事可乐中咖啡因的含量为101.0μg/mL,[回收率为100.4％,RSD％为0.64％.结论:此方法准确、简单、快速,适合可乐中咖啡因的含量测定.
【总页数】3页(P158-159,167)
【作者】刘清华
【作者单位】中国刑警学院分析化学,辽宁沈阳110035
【正文语种】中文
【中图分类】O65
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2.紫外分光光度法测定可乐中咖啡因含量样品前处理方法探讨 [J], 谷苗苗;王尉嘉;王迪;周爱东
3.紫外分光光度法测定饮品中咖啡因的含量 [J], 展惠英;
4.紫外分光光度法测定饮料制品中的咖啡因含量 [J], 张薇
5.紫外分光光度法测定可乐中咖啡因的含量 [J], 武开业
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紫外光谱分析测定饮料中咖啡因的含量摘要咖啡因，一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力。
因此，目前咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神药品。
现今含咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，随着可口可乐，百事可乐等碳酸饮料在全世界的风靡，各种可乐型饮料已成为人们在日常饮食中摄取大量咖啡因的一主要来源之一。
但大量咖啡因的摄取会严重影响人们的健康，因此各国对饮料中咖啡因的含量都做出了相应的限制与规定。
虽咖啡因具有提神醒脑刺激中枢神经的作用，但长期引用含大量咖啡因的饮料，易上瘾，为此，各国制订了咖啡因在饮料中相应的食品卫生标准。
美国，加拿大，阿根廷，日本，菲律宾规定饮料中咖啡因的含量不的超过200mg/L,南斯拉夫规定不得超过120mg/L，目前我国允许饮料中加入咖啡因并规定其含量不得150mg/kg。
为加强国家食品卫生监督管理，建立简便得咖啡因的检测标准十分必要。
关键词紫外分光光谱法；饮料；咖啡因；含量测定前言咖啡因又名生物碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1,3,7—三甲基黄嘌呤。
白色，无臭味，一般成发亮针丝状或为粉末状的结晶。
熔点为234—238℃,178℃升华，能溶于乙醚，丙酮，氯仿，水，微溶于石油醚。
以往测定咖啡因含量时都采用容量法，因操作复杂不太理想。
实践证明本实验采用的方法简单快速准确，可用于可乐型饮料中咖啡因的测定。
本文采用紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量，该方法简便，稳定，准确，灵敏度高，同时也可巩固所学的知识。
紫外分光光度法是可乐型饮料，咖啡和茶叶以及其制成品中咖啡因含量测定的简便方法，其快速，准确。
其最低检出浓度：紫外法对可乐型饮料为3mg/L，对咖啡茶叶以及其固体制品为5mg/100g，对咖啡和茶叶的液体制品为5mg/L。
一紫外可见分光光度计的概述（一）分光光度法原理通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。
如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。
利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。
用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。
它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。
上述的紫外光区与可见光区是常用的。
但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。
当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为:根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律:A=abc式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm^3)，a为吸光系数。
其中吸光系数与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。
溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。
由上式可知，当固定溶液层厚度l和吸光系数时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。
在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长，然后以此波长的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲线。
在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可确定出相应的浓度。
这便是分光光度法测量浓度的基本原理。
（二）分光光度仪构成紫外-可见分光光度计由5个部件组成：1辐射源必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。
2单色器它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。
3试样容器，又称吸收池供盛放试液进行吸光度测量之用，分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。
容器的光程一般为0.5～10厘米。
4检测器，又称光电转换器常用的有光电管或光电倍增管，后者较前者更灵敏，特别适用于检测较弱的辐射。
近年来还使用光导摄像管或光电二极管矩阵作检测器，具有快速扫描的特点。
5显示装置这部分装置发展较快。
较高级的光度计，常备有微处理机、荧光屏显示和记录仪等，可将图谱、数据和操作条件都显示出来。
（三）紫外可见分光光度计特点1应用广泛由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。
到目前为止，几乎化学元素周期元素表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
2灵敏度高由于相应学科发展，使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展，从而对元素测定的灵敏度大大提高一步。
特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。
相对于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和准确度一致公认是比较高的。
不但在实际工作中光度法被广泛采用，在标准参考物质的研制中，它更受重视，很多光度分析法已制定为标准方法。
3选择好目前已有些元素只有利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定，如钴、铀、铜、镍、银、铁等元素的测定，已有比较满意的方法了。
4准确度高对于一般的分光光度法来说，其浓度测量的相对误差在1 –3%范围内，如采用示差分光度法测量，则误差往往可减少到千分之几。
5适用浓度范围广可从常量（1-50%）(尤其是使用示差法)到恒量（10-6-10-8%）（经预富集后）6分析成本低、操作简便、快递（三）紫外可见分光光度法的应用1、有机化合物定性鉴定的一般方法2、有机化合物结构的测定（1）共轭体系的判断（2）分子骨架的推定（3）构型、构象的测定（4）互变异构体的测定（5）标准光谱的应用3、氢键强度与摩尔质量的测定（1）氢键强度的测定（2）摩尔质量的测定4、定量分析5、在轻工、化工产品中的应用（1）洗涤制品、化妆品中表面活性剂分析（2）木素化学结构研究及木素含量测定（3）食品中添加剂及维生素分析二紫外分光光度法测饮料中咖啡因含量（一）实验药品及仪器1 药品本实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水。
(1) 无水硫酸钠(2) 三氯甲烷使用前重新蒸馏(3)1.5(m/v)高锰酸钾溶液：称取1.5g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。
(4) 亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取1Og无水亚硫酸钠，用水溶解并稀释至1OOmL，另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至1OOmL，然后一者均匀混合。
(5) 15%(v／v)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于1OOmL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
(6) 20%(m／V)氢氧化钠溶液：称取20g氧氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。
(7) 20%(m/V)醋酸锌溶液：称取20g醋酸锌[Zn (C~COO)：．2H20]加入3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
(8) 10%(m／V)亚铁氰化钾溶液：称取10g亚铁氰化钾。
[K4Fe (CN)6·3H2O]用水溶解并稀释至100mL。
(9）咖啡因标准品：含量98 0%以上。
(10) 咖啡因标准储备液：根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成每mL相当于0.5mg咖啡液，置于冰箱中保存。
2 仪器紫外分光光度计（二）实验分析步骤1 样品的处理在250mL的分液漏斗中，准确移入l0.0mL经超声脱气后的均匀可乐型饮料试样，加入1.5%高锰酸钾溶液5mL，摇匀，静置于5min，加入混合溶液10mL，摇匀，加入30mL重蒸三氯甲烷。
振摇100镒，静止分层，收集三氯甲烷。
水层再加入10mL重蒸三氯甲烷，振摇100次，静置分层。
合并二次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，摇匀，备用。
2标准曲线的绘制从0 5mg/mL的咖啡因标准储备tfit中，用重蒸三氯甲烷配制成浓度分别为2.00，4.00，6.00，8.00，10.0，12.00，14.00ug/mL的标准系列，以0ug/mL作对比管，调节零点，用1cm 比色杯于276.5nm下测量吸光度A，得出吸光度-咖啡因浓度的标准曲线。
3 样品的测定在25mL巨塞试管中，加入5g无水硫酸钠，倒入20mL样品的三氯甲烷制备液，摇匀，静置。
将澄清的三氯甲烷用1cm比色杯于276.5nm处测其吸光度，根据标准曲线求出样品的吸光度相当于咖啡因的浓度。
测定时用重蒸三氯甲烷作试剂空白。
（三） 实验结果计算样品中咖啡因含量（mg/L ）=10001000V100c -c 0⨯⨯）（c ：样品吸光度相当于咖啡因浓度（ug/L ） c 0 ：试剂空白吸光度相当于咖啡因浓度（ug/L ）,本实验c 0=0ug/LV : 样品的体积（mL ）（四）实验条件的选择1 吸收曲线如图，咖啡因在276.5nm 处有最大吸收峰。
2 pH 的影响pH 值在1~10范围内，对萃取效果，没有明显地差异，其吸光度稳定。
说明pH 在1~10范围内，对咖啡因没有影响，但萃取咖啡因的最佳pH 范围为6.0~10.0；在pH6.0以下时，当剧烈摇动是，易乳化，分层慢，在pH6.0~10,0没有以上现象。
3萃取时间萃取时间的长短对对吸光度值无明显的影响，故选定摇荡时间为1min 。
4提取溶剂的使用量提取剂三氯甲烷使用量在18mL 以上均可提取完全，但为适应各种可乐型饮料，将提取剂的量定为50mL 。
(五)结果与讨论1 标准曲线观察咖啡因的标准曲线可知，随咖啡因含量的增加，其在最大吸收波长处的吸光度值也随之增加，呈现良好的线性关系。
2溶剂的选择准确移取三份1.0mL200mg/L咖啡因水溶液于三只10mL试管中，分别加入二氯甲烷，三氯甲烷，乙酸乙酯8.0mL，充分震荡，萃取后离心分离，取清液在250~300nm波长范围内扫描。
比较咖啡因在不同溶剂中的紫外吸收光谱，可看出三氯甲烷作溶剂时，吸收光度最大，最大吸收峰位于276nm。
由此可知，三氯甲烷做萃取剂最好。
通过实验得出：用紫外光谱分析法测定市售饮料中咖啡因的含量，有快速，准确，溶剂消耗少等特点。