HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系

HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物化学、药学、环境科学等领域。

在HPLC实验中，缓冲盐体系可以起到调节溶液pH值和维持离子强度稳定的作用，从而优化分离效果和保护色谱柱。

以下是一些常见的HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系。

1.磷酸盐缓冲体系：磷酸盐缓冲体系是HPLC实验中最常用的缓冲盐体系之一、磷酸盐缓冲体系可以提供广泛的pH范围（2-8之间），同时磷酸盐还具有对许多生物分子和有机分子的良好溶解性。

常见的磷酸盐缓冲液有二氢磷酸盐（pH2-3）、三氢磷酸盐（pH6-8）和磷酸盐缓冲液（pH2-8）。

磷酸盐缓冲体系在酸性和碱性条件下都能保持相对稳定的离子强度，使得色谱实验结果更加稳定可靠。

2.醋酸盐缓冲体系：醋酸盐缓冲体系主要由醋酸或乙酸和醋酸钠组成，可以在中性和酸性条件下提供稳定的pH值。

醋酸盐缓冲体系对酸敏感的样品非常适用，因为其pH范围（4-6之间）适合大多数生物分子的分析。

3.磺酸盐缓冲体系：磺酸盐缓冲体系主要由有机磺酸盐和无机磺酸盐混合而成。

磺酸盐缓冲液可以在酸性和碱性条件下提供稳定的pH值，适用于许多分析。

磺酸盐缓冲液在药物研究和分析中经常使用，特别是在分析天然产物和药物衍生物时。

4.磷酸氢盐/磷酸二氢盐混合缓冲体系：磷酸氢盐/磷酸二氢盐混合缓冲体系可以在酸性和中性条件下提供稳定的pH值。

该缓冲盐体系常用于酸敏感化合物的分离和分析，尤其在药学研究中广泛应用。

总之，选择适当的缓冲盐体系是HPLC实验成功的关键之一、在选择缓冲盐体系时，需要考虑样品的特性、分离条件和目标分析物的pH值范围。

此外，还应注意选择高纯度的缓冲盐、准备新鲜的缓冲液，以保证实验结果的准确性和重复性。

HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系

否
否
传统的低PH值缓冲体系，UV透光度很好
7
磷酸盐2
7.2
6.2〜8.2
否
否
当PH值超过7时，降低操作温度/缓冲盐浓度以及使用保护住可以将色谱柱寿命最长化
8
磷酸盐3
12.3
11.3〜13.3
否
否
当PH值超过7时，降低操作温度/缓冲盐浓度以及使用保护住可以延长色谱柱寿叩
9
4-甲基吗啡啉
〜8.4
7.4〜9.4
15
Glycine甘氨酸
2.4,9.8
8.8〜10.8
否
否
两性离子缓冲液，比使用硼酸盐对柱子的损伤更小些
16
1-甲基哌啶
10.2
9.3〜11.3
是
是
通常使用1〜10mM浓度
17
CAPS
10.4
9.5〜11.5
否
否
两性离子缓冲液，同乙腈互溶，通常使用浓度为1〜10mM气味小
18
三乙胺（乙酸盐）
10.7
常规实验建议使用的缓冲盐体系
序号
缓冲盐/流动相改性剂
pKa
缓冲范围
挥发性？（土PH单位）
是否MS
兼容？
备注
1
TFA
0.3
-
是
是
离子对试剂，能够一直MS信号，通常使用的浓度范围为0.02〜0.01%
2
乙酸
4.76
-
是
是
同乙酸铵一起使用具有较大的缓冲能力，通常使用的浓度范围0.1〜1.0%
3
甲酸
3.75
-
是
是
同甲酸铵一起使用具有较大的缓冲能力，通常使用的浓度范围0.1〜1.0%

hplc用磷酸盐缓冲液流动相

hplc用磷酸盐缓冲液流动相
HPLC（高效液相色谱）是一种分离和分析化合物的技术，是现代化学分析中的重要方法之一。

在HPLC中，流动相是非常重要的组成部分，它决定了分离效果和灵敏度。

磷酸盐缓冲液是HPLC中常用的一种流动相。

磷酸盐缓冲液是一种适用于中性和碱性物质的缓冲液。

它可以调节溶液的pH值，使其保持在稳定的范围内。

在HPLC中，磷酸盐缓冲液通常用于分离中性和碱性物质。

磷酸盐缓冲液的制备方法如下：
1. 准备0.1M的磷酸二氢钾（KH2PO4）和0.1M的磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液。

2. 将KH2PO4和Na2HPO4溶液混合，用NaOH或HCl调节pH值至所需范围内。

3. 最后用纯水调节溶液的体积至所需的浓度。

在使用磷酸盐缓冲液作为HPLC流动相时，需要注意以下几点：
1. pH值的选择：磷酸盐缓冲液可以在不同的pH范围内使用。

在选择pH值时，需要考虑待分离物质的性质和分离效果。

2. 流速的选择：流速对分离效果和灵敏度有着很大的影响。

一般来说，流速越慢，分离效果越好，但灵敏度会降低。

3. 溶剂的选择：通常情况下，磷酸盐缓冲液需要与有机溶剂混合使用。

常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈等。

4. 温度的控制：温度对于分离效果和灵敏度也有很大的影响。

一般来说，温度越高，流动相的粘度越低，流速越快，但分离效果会降低。

总之，磷酸盐缓冲液是一种常用的HPLC流动相，在HPLC
分析中起到了重要的作用。

在使用时需要注意上述几点，以获得最佳的分离效果和灵敏度。

液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa 或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如和缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK 值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa为，缓冲范围为~。

（2）碱性化合物，在高pH条件下才能得到其非离子形态，但这对色谱柱不利。

液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。

HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系解读

常规实验建议使用的缓冲盐体系序号缓冲盐/流动相改性剂pKa缓冲范围挥发性？（±PH单位）是否MS兼容？备注1 TFA 0.3 - 是是离子对试剂，能够一直MS信号，通常使用的浓度范围为0.02～0.01%2 乙酸 4.76 - 是是同乙酸铵一起使用具有较大的缓冲能力，通常使用的浓度范围0.1～1.0%3 甲酸 3.75 - 是是同甲酸铵一起使用具有较大的缓冲能力，通常使用的浓度范围0.1～1.0%4 乙酸盐（铵盐）4.763.76～5.76是是通常使用1～10mM浓度，注意钾盐和钠盐是非挥发性的5 甲酸盐（铵盐）3.753.75～4.75是是通常使用1～10mM浓度，注意钾盐和钠盐是非挥发性的6 磷酸盐1 2.15 1.15～3.15否否传统的低PH值缓冲体系，UV透光度很好7 磷酸盐2 7.2 6.2～8.2否否当PH值超过7时，降低操作温度/缓冲盐浓度以及使用保护住可以将色谱柱寿命最长化8 磷酸盐3 12.3 11.3～13.3否否当PH值超过7时，降低操作温度/缓冲盐浓度以及使用保护住可以延长色谱柱寿命9 4-甲基吗啡啉～8.47.4～9.4是是通常使用浓度为10mM或更少10 氨水9.2 8.2～10.2是是通常使用浓度为5～10mM（用于MS工作时保持离子源温度超过150℃）。

用氨水或乙酸调节PH值。

在PH=10时具有很好的缓冲能力。

碳酸氢铵10.3（HCO3-）8.2～11.3是是9.2（NH4+）说明：使用碳酸氢铵而非碳酸铵11 乙酸铵9.28.2～10.2是是通常使用1～10mM浓度12 甲酸铵9.28.2～10.2是是通常使用1～10mM浓度13 硼酸 9.28.2～10.2否否降低温度、减少浓度并使用保护柱来延长柱寿命14CAPSO （3-环己氨基-2-羟基丙磺酸）9.78.7～10.7否否两性离子缓冲液，同乙腈互溶，通常使用浓度为1～10mM ，气味小15Glycine 甘氨酸 2.4,9.88.8～10.8否否两性离子缓冲液，比使用硼酸盐对柱子的损伤更小些161-甲基哌啶 10.29.3～11.3是是通常使用1～10mM浓度17 CAPS10.49.5～11.5否否两性离子缓冲液，同乙腈互溶，通常使用浓度为1～10mM ，气味小18 三乙胺（乙酸盐）10.79.7～11.7是是通常使用浓度为0.1～1.0% 。

液相流动相缓冲盐选择讲解学习

液相流动相缓冲盐选择下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa 或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa 为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。

液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。

液相流动相缓冲盐选择

液相流动相缓冲盐选择 The manuscript was revised on the evening of 2021下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa 或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如和缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

液相流动相缓冲盐选择(一类特选)

下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。

HPLC常规实验建议使用的缓冲盐体系

9.2
8.2～10.2
是
是
通常使用1～10mM浓度
12
甲酸铵
9.2
8.2～10.2
是
是
通常使用1～10mM浓度
13
硼酸
9.2
8.2～10.2
否
否
降低温度、减少浓度并使用保护柱来延长柱寿命
14
CAPSO（3-环己氨基-2-羟基丙磺酸）
9.7
8.7～10.7
否
否
两性离子缓冲液，同乙腈互溶，通常使用浓度为1～10mM，气味小
是
是
通常使用浓度为10mM或更少
10
氨水
9.2
8.2～10.2
是
是
通常使用浓度为5～10mM（用于MS工作时保持离子源温度超过150℃）。用氨水或乙酸调节PH值。在PH=10时具有很好的缓冲能力。
碳酸氢铵
10.3（HCO3-）
8.2～11.3
是
是
9.2（NH4+）
说明：使用碳酸氢铵而非碳酸铵
11
乙酸铵
-
是
是
同甲酸铵一起使用具有较大的缓冲能力，通常使用的浓度范围0.1～1.0%
4
乙酸盐（铵盐）
4.76
3.76～5.76
是
是
通常使用1～10mM浓度，注意钾盐和钠盐是非挥发性的
5
甲酸盐（铵盐）
3.75
3.75～4.75
是
是
通常使用1～10mM浓度，注意钾盐和钠盐是非挥发性的
6
磷酸盐1
2.15
1.15～3.15
常规实验建议使用的缓冲盐体系
序号
缓冲盐/流动相改性剂
pKa
缓冲范围

液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了A g i l e n t和网上查到的一些资料：
一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很
酸不行的时候再考虑使用缓冲盐，缓冲盐的选择原则是：简单、稳定、缓冲能力强、配制简单，需要调pH值时要有相应的酸或碱。

常用的缓冲盐是磷酸盐，主要是钾盐和钠盐，还有醋酸盐，常用的盐浓度在10~20mM左右（根据实际情况，有时可以选择更低或更高浓度，建议最高浓度不超过50mM）。

下表是Waters提供的一个资料，常规实验室建议使用的缓冲盐体系。

液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。

高效液相流动相缓冲盐选择

下面内容综合了Agilent 与网上查到得一些资料:一般来说,反相HPLC 得流动相包括有机相与水相,有机相常用得为色谱甲醇与乙腈,不太常用得还有四氢呋喃与异丙醇。

甲醇有其性价比得优势,但就是甲醇活性高,可能与某些样品发生反应,而且甲醇在低波长下有紫外吸收,会降低分析方法得灵敏度;乙腈虽然价格很高,毒性比甲醇大,但就是洗脱能力比甲醇强,很少与样品发生反应,用作流动相系统压力要比甲醇低很多,且截止波长比甲醇低20nm,增加了检测出在低波长下才有吸收得杂质得可能性,所以我们一般倾向于多用乙腈,少用甲醇。

但就是当样品峰形不好或者分离不好时,更换溶剂就是一个很好得选择,因为不同得溶剂可提供不同得选择性。

在反相色谱中,流动相中水相得pH 与离子强度在开发对条件微小变化不敏感得耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物,典型样品得保留随pH 改变而明显变化,因此控制pH 对于保留与选择性得稳定非常重要,通常在pH2~4得条件下,保留时间对pH 得微小改变稳定性最高,因此建议将这一pH 范围作为大多数样品方法开发得起始pH,包括碱性化合物与一般得弱酸。

考虑到重现性,所用得pH 应高于或低于待分析物pKa 或pKb 上下一个pH 单位。

当待分析物pKa 或pKb 未知时,应测试一种以上流动相pH(如pH2、0与pH6、5缓冲盐溶液),可提供最好结果。

对流动相得优化主要体现在水相上。

流动相pH 值对色谱分离得影响有多钟方式,根据待分析物得结构性质,pH 可能影响选择性、峰形与保留。

如果就是非极性较强或中性得化合物,pH 对分离度与保留得影响一般不明显。

如果就是可离子化得化合物,如酸或碱,保留因子与选择性随pH 改变非常明显。

(1) 酸性分析物,应选择低pH 缓冲液流动相,以防止分析物离子化。

了解分析物得pKa,才能有效得选择流动相pH 。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK 值±1 pH 单位,使流动相得优化具有一定得灵活性。

高效液相流动相缓冲盐选择

高效液相流动相缓冲盐选择Final revision by standardization team on December 10, 2020.下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH 单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如和缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。

液相流动相缓冲盐选择精编版

液相流动相缓冲盐选择精编版MQS system office room 【MQS16H-TTMS2A-MQSS8Q8-MQSH16898】下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。

甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。

但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。

在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。

对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。

当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如和缓冲盐溶液），可提供最好结果。

对流动相的优化主要体现在水相上。

流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。

如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。

如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。

（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。

了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。

缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。