马铃薯试管苗保存技术

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马铃薯种质资源保存试验

ｅｕｔｒｄｇｏｔｉｔｒａｄｉｕｔｍｉｔｂｒＴｅｌｔｅａｕｅｐｅｅｔｒｇｌｏｎｒｗｈｉｈｂｏ，ｎｄｃｉｎｏｃｏｕｅ．ｈｗｍｐｒｔｒｒｓｒａｉｎ（℃ ）ｎｄｉｅｇｏｈａａｎｉｎｏｆｒｏｅｖｏ４ａｄａｄｎｔｒｗｇｈｔ
ｏ１渗透调节剂甘露醇也能达到较好的保存效果；通过微型薯诱导保存得到试管薯的诱导率为１％～０．％５８％，但保存后期
易造成试管苗死亡。
关键词：马铃薯；种质资源；保存
ＰｒｓｒａｉｎｏｔｔｒｐａｍｅｅｖｔｆｏＰｏａｏＧｅｍｌｓ
ＫｙＷｏｄ：ｐｔｔ；ｅｒｌｓ；ｒｓｒａｉｎｅｒｓｏａｏｇｍｐａｍｐｅｅｖｔｏ
种质资源的搜集引进、鉴定、创新和利用一直
茎尖脱毒、组织培养技术逐渐将资源转育成试管苗保存，这种离体条件下的试管苗保存即避免田间病
虫害的侵袭，减少资源流失，又具有占用空间小，
为我国马铃薯育种者所重视【ｌ＿。我国拥有丰富的地方品种资源，具有独特的区域适应性，所以在引进国外资源的同时，也相当重视本国地方品种资源的筛选利用。近年来，随着马铃薯品种的逐渐增多，如
摘
要：通过低温保存，添加渗透调节剂及生长抑制剂和微型薯诱导的方法，对马铃薯种质资源试管苗的保存效
果进行了研究。结果表明，使用低温（℃）４保存和在ＭＳ培养基基础上添加浓度为５ｇ的生长抑制剂比久（。，可０ｍ・Ｂ）

马铃薯病毒试管苗保存技术及病毒侵染力的研究

摘要: 无菌条件下切取毒源马铃薯茎尖于M S 培养基中培养, 当毒源试管苗长至10 c m 时切取单节段扩繁。通过免疫电镜法、电镜负染法和 DA S2 筛选出的试管苗毒源经18 个月保存病毒仍存在, 将 EL IS A 法鉴定, 筛选出4 管纯毒源材料。毒源试管苗移至花盆中栽培, 试验管苗表现出马铃薯病毒 A (PVA ) 侵染症状, 用毒源马铃薯汁液接种的指示植物也表现典型 PVA 症状, 说明毒源试管苗保存的 PVA 具有侵染力。用试管苗保存马铃薯病毒, 可提高毒源保存效果。关键词: 马铃薯病毒; 保存技术; 侵染力
1 材料与方法
111 供试材料 ① 毒源植物与指示植物: 马铃薯 (S olanum tuberosum ) 、洋酸浆 ( P hy sa lis f lorid ana ) 、普通烟 (N ico 2
收稿日期: 2007- 0 5- 1 3 基金项目: 丽水市科技计划项目 ( 2004 30 5- 2) 作者简介: 夏更寿 ( 19 68- ) , 男, 浙江丽水人, 丽水学院讲师, 主要从事花卉、作物栽培生理研究。 3 联系作者, E 2 . com m ail: st ill242 5@ 1 63
以筛选出的4管纯毒源为材料继续培养室温下34个月转管1次连续培养18个月利用免疫电镜法和das2elisa法定期检测试管苗的pva保存效果结果表明培养13个月试管苗中病毒pva数量变化较明显培养318个月扬州大学学报农业与生命科学版第28卷pva数量较稳定
第28卷第4 期 2007年12月
扬州大学学报 (农业与生命科学版)
8
104
扬州大学学报 ( 农业与生命科学版)
第 28卷
醋栗番茄 (L y cop ersicon p i 马铃薯 A 6 (Solanum d em issum ×A qu ila 杂交) 、 tiana tabacum ) 、 m p inel lif olium )、锦灯果 ( P hy salis p ubescens ) 为本院保存。 ② 毒源及抗血清: 标准毒株 PVA 、 PVX 及 PV Y ( 阳性对照 ) 由黑龙江省农业科学院提供, 特异性抗血清及酶标抗体为美国 A gd ia 公司产品。 112 试验方法 1) 毒源马铃薯茎尖扦插及试管苗节段扩繁: 无菌条件下切取毒源马铃薯茎尖 016～ 1 10 cm , 自来水冲洗4～ 6 h, 011% 升汞 ( 或 75% 酒精 ) 消毒 2 m in, 将其扦插于含 M S 培养基的试管中培养。当毒源马铃薯茎尖长至 10 cm 时, 无菌条件切取单节段 (带大叶 ) 扩繁, 每管1～ 2节。毒源试管苗在温度 20～ 25 ℃、光照度2000 lx (每天光照14 h ) 条件下培养。 2) 病毒提取: 按徐平东等 [ 6] 方法提取, 略加改动。 3) 病毒检测: ① DA S 2EL ISA 法检测。按文献 [7 ] 的方法进行。 ② 电镜负染法检测。将具支持膜的铜网直接放在新提取病毒液滴上孵育 5 m in, 用滤纸吸干载网, 放入2% 磷钨酸 (pH 7 10) 中漂染 5 m in, 干燥后用 J EM 21200EX 透射电镜进行镜检, 以标准毒源 PVA 为阳性对照 [ 829]。 ③ 免疫电镜法检测。将具支持膜的铜网在抗血清液滴上孵育 30 m in, 用滤纸吸干后置于新提取病毒液滴上孵育 30 m in, 用 20滴 0101% 磷酸缓冲液冲洗载网, 滤纸吸干后在 2% 磷钨酸 (pH 710) 中漂染 15 m in, 干燥后镜检 , 以标准毒源 PVA 为阳性对照 [ 10 ]。

马铃薯种质资源保存

马铃薯种质资源保存1试管苗保存从田间种植的种质资源选择具有典型品种特性的健康植株（从形成壮苗到盛花期均可以取），取1、5～2、0cm有腋芽的茎段7～10个，用清水冲洗1～2h，然后置于超净工作台上，用1‰的升汞水溶液浸泡8～10min，若茎段较粗则增加至12min左右。

用灭菌的镊子将茎段分次取出，每次取出1～2个，在灭菌水中彻底清洗3～4次，放入普通的MS培养基中进行培养（特别注意每次从升汞中取茎段要用无菌的镊子）。

分次取出茎段可以使茎段在升汞中的处理时间有一个梯度，保证至少有1个已经成为无菌苗。

由于种质资源数量比较多，这样做就会大大降低工作量，提高工作效率。

将处理好的茎段放在组培苗生长间，补充光照。

保持生长间的温度在20～25℃。

无菌苗形成过程中，天天进行检查，发现污染苗后挑出并进行高压灭菌，以防备造成试管苗生长间的整体污染。

无菌苗形成后，在无菌条件下，将无菌苗继续在普通MS培养基上扩繁1次，每1～2个茎段放入含3%的甘露醇MS培养基的试管中进行保存，一般每1个资源至少要保存3管，这样取用非常方便。

控制种质资源保存库的温度在15～20℃，每周对资源库进熏蒸消毒1次，防止试管苗二次污染。

在这种条件下，每1代试管苗可以保存120～150d，在此期间，要定期检查试管苗的情况。

由于受到了甘露醇及继代过多或是环境因素的影响，有些资源早期就会玻璃化，一旦发生这种情况，应立即将玻璃化的试管苗转移到普通的MS培养基上，20～30d就可以形成新的试管苗继续保存。

2田间种植保存在马铃薯种质资源的保存过程中，田间种植与试管苗保存是相互结合、密不可分的，是一个循环往复的过程。

由于种质资源少则几百份，多则几千份，所以种质资源可以多点保存，也可以分期分批保存，每年种植一部分，试管保存一部分，来年可以反过来，这样可以经济合理地搭配人力和物力。

利用山梨醇长期保存马铃薯试管苗

马铃薯是茄科无性繁殖作物，传统方法以块茎方式保存，不仅耗费大量的人力、物力和财力，也容易造成人为的种质混杂和各种病害的不断侵染以及病毒的积累，使品种资源优势退化。植物生长调节剂作为马铃薯种质资源保存的添加剂受到广泛的关注，并且植物生长调节剂在各个领域均取得了不
ｍｅｄｉｕｍｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｔｒａｔｅｇｙｏｆｓｌｏｗｇｒｏｗｔｈ．ａｎｄｅｘｔｅｎｄｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｃｙｃｌｅｆｒＯｍ２－３ｍｏｎｔｈｓｔｏ１ｙｅａｒｂｙｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｏｒｂｉｔｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．ｔｈｅｒｅｂｙｐｒｏｖｉｄｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｕｐｐｏ￣ｆｏｒｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｌｅｔｓ讯ｖｉｔｒｏｏｎＩａｒｇｅｓｃａｌｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｕｓｅｏｆｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ４０ｇ／Ｌｓｏｒｂｉｔｏｌ。ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈ１０ ℃ ｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｃｏｕｌｄｅｘｔｅｎｄｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｃｙｃｌｅｔｏ１ｙｅａｒｆｏｒｓｏｍｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｔｅｓｔｅｄ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｒｅｄｕｃｉｎｇｃｏｓｔ，ａｎｄａｖｏｉｄｉｎｇｔｈｅ

马铃薯脱毒试管苗组织培养技术概述

化。马铃薯脱毒苗组织培养技术是防治病毒病的最酸(NAA)、多效唑(PP333)、赤霉素(GA3)、矮壮素
有效措施。
(CCC)与激动素(KT)等。不同的生长调节剂以及不
1 马铃薯组织培养技术原理
同的浓度配比对马铃薯脱毒试管苗的生长发育存在
马铃薯组织培养技术是运用植物体内病毒分布不同程度的影响。张梅，司怀军等研究表明，在培养
光照培养[8]。
需要从以下几方面着手。
2.3 马铃薯组培苗的继代增殖培养
首先，要培育与筛选好壮苗。合适的MS培养基
继代增殖培养是利用组织培养技术将脱毒试管有利于培育出健壮的组培苗。张丽芳等研究表明，在
料。选取较为幼嫩的侧芽及顶芽为外植体材料，将其原材料。通过这种方式能够避免因继代培养代数过
用解剖刀切下放入烧杯中，在烧杯口附上一层纱布，高所带来的问题。其次，以受病毒侵染的试管苗进行
用流动的自来水冲洗5～6h。之后，将这些芽上的叶继代培养时，所扩繁的组培苗均会感染病毒，无法获片及多余茎秆切除(切至0.6cm左右，使外植体材料取无毒植株[9]。因此，需要在继代培养过程中结合
的不均匀性原理，以病毒含量较少或者无毒的离体基中添加浓度为0.2～0.3mg/L的多效唑能够有利于
茎尖分生组织为材料，在无菌环境下进行组织培养壮苗的培育及提高脱毒试管苗的继代增殖系数，而获取脱毒试管苗的一种技术[1]。该技术相比于传统的当多效唑浓度为1～3mg/L时，则有助于马铃薯组培块茎繁殖，不仅能够有效地保留品种优势，延缓品种苗的长期保存[3-4]。祝红艺等发现在MS培养基中加入
能够得到充分消毒)。用75%酒精将这些材料浸泡 PCR病毒检测技术，严格筛选脱毒试管苗作为继代
30～45s，随即用无菌水冲洗3～4遍，再用0.1%升汞培养原材料，确保扩繁的组培苗健康无毒。

脱毒马铃薯试管苗壮苗及保苗技术研究

维普资讯
第ｌ５卷第２期
２００８年２月
现代农业科学
ＭｏｅｎＡｒｃｌｒｌｃｅｃｓｄｒｇｉｕｔａｉｎｅｕＳ
Ｖｏ．５Ｎｏ２１１．Ｆｂ２０ｅ．ｏ８
文章编号：０５４５２０）２００－２１０－６０（０８０－５００
中图分类号：６２２４￥３．０文献标识码：Ａ
Ｖｉｕ — ｒｅｐｔｔａｌｔｔｏｇＳｐｏｔａａｎａｎｓａｒｓ－ｆｅｏａｏＰｌｎｔｅｓＳｒｎｒｕｎｄＭｉｔｉ ห้องสมุดไป่ตู้ｎＡｄｑｔｐｐｙｏｅｄｉｇｈｅＥｎｇｎｅｉｇＲｅｅｒｈｅｕａｅＳｕｌｆＳｅｌｎｓｔｉｅｒｎｓａｃ
马铃薯在全世界１８个国家和地区都有栽培，４因病毒引
⑥ ８５ＨＮ３９０Ｎ３＋８Ｋ２Ｏ＋１５Ｓ４・Ｈ２Ｎ４Ｏ＋１５ＫＯ２５ＨＰ４２ＭｇＯ７２
起的种性退化是制约其发展的主要因素，过茎尖脱毒、通无病毒微型薯生产已建立良种繁育体系… 。但是在脱毒试管
脱毒马铃薯试管苗壮苗及保苗技术研究
胡万群
（安徽省六安市农业科学研究所，安徽六安２７０）３０９摘要：用８种不同组合配方的培养基，中薯４号进行茎段培养，出４２５ＨＮ＋１７ＫＯ采对得１．ＮＯ４５Ｎ
＋４．Ｋ２Ｏ２２５ＨＰ４＋１５ｇ０７２２ＭＳ４・ＨＯ＋ｌＯａＮ３２・Ｈ０＋Ｍ（机盐）＋Ｖｌ．ＯＣ（Ｏ）４２Ｓ无Ｂ１０＋Ｂ０５＋ＩＡ．Ａ．Ｂ０１

马铃薯试管苗保存技术实验室操作规程

摘要：对马铃薯试管苗构建、病毒检测、保存培养及保存方法等各个环节进行总结，以确保马铃薯资源实验室试管苗保存的安全性，降低或避免因保存方法的欠缺而带来资源的损失。关键词：马铃薯；技术规程；保存
中图分类号：￥５３２．０４３文献标志码：Ａ文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０３—００７５— ０１
３．８试管苗离体保存
将试管苗培养在有植物生长抑制剂的培养基内进行无菌
ＧＢ１８１３３－２０００《马铃薯脱毒种薯》；ＮＹ／Ｔ４０１－２０００《脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程》。
３术语和定义
种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一
部分有害病原菌，而对被消毒物体基本上无害的措施。
收稿日期：２０１２—０９—１７
基金项目：贵州省重大专项［编号：黔科合重大专项字（２００８）６００９］；贵州省科技创新平台建设项目（编号：黔科合院所创能［２０１０］
江苏农业科学
黄萍，马朝宏，颜
２０１３年第４ｌ卷第３期
一７５一
谦．马铃薯试管苗保存技术实验室操作规程［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（３）：７５— ７６
马铃薯试管苗保存技术实验室操作规程
黄萍，马朝宏，颜谦
（１．贵州省马铃薯研究所，贵州贵阳５５０００６；２．贵州省农业科学院科技开发处，贵州贵阳５５０００６）

马铃薯的贮藏与保鲜技术

马铃薯的贮藏与保鲜技术
马铃薯是一种常见的主食蔬菜，其贮藏与保鲜技术对于延长其保质期和减少损耗非常重要。

以下是几种常见的马铃薯贮藏与保鲜技术：
1. 温度控制：马铃薯的贮藏温度应控制在4-10摄氏度之间。

较低的温度会导致马铃薯变甜，较高的温度则容易腐烂。

因此，选择合适的存储温度对于马铃薯的保鲜非常重要。

2. 湿度控制：马铃薯的贮藏环境湿度应保持在85-90%之间。

过高或过低的湿度都可能导致马铃薯腐烂或干燥。

可以利用湿度控制设备来维持适宜的湿度。

3. 防潮防霉：为了防止马铃薯潮湿和霉变，可以在储存容器或储藏室中放置干燥剂，吸收空气中的湿气。

同时，定期检查和清除已经腐烂或发霉的马铃薯，以防止蔓延。

4. 避光贮存：将马铃薯保存在黑暗的地方可以减少薯苗发芽和绿色素积聚。

暗处也能减少马铃薯表面的褐变。

5. 启动贮藏：将新鲜的马铃薯进行一段时间的"启动贮藏"，即
在较高的温度下存放一段时间，然后再调整至较低的贮藏温度。

这有助于马铃薯的成熟和抗病能力的提高。

总的来说，通过控制温度、湿度和避光等因素，以及定期检查和清除腐烂的马铃薯，可以有效延长马铃薯的保质期，减少损耗，并确保其质量和口感。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是世界上重要的粮食作物之一，广泛种植于全球各地。

目前马铃薯种植中存在一个重要问题，就是马铃薯的毒素含量较高。

马铃薯中的毒素主要来自于马铃薯根茎中的龙葵碱成分，长期摄入会对人体健康造成一定的危害。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术的研究和应用，对于提高马铃薯生产的安全和质量具有重要的意义。

一、马铃薯脱毒试管苗快繁技术的意义马铃薯脱毒试管苗快繁技术是利用植物组织培养技术，将健康的母株马铃薯组织培养在营养基上，通过细胞分裂和组织再生的方式，快速繁衍大量健康的马铃薯试管苗。

这项技术对于解决马铃薯繁殖过程中的病虫害传播、品种保存、疫病侵染和生产质量的提高都具有非常积极的意义。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术可以有效地防止病虫害的传播。

传统方式繁殖的马铃薯苗地下茎或种子上易携带病菌，一旦植入下一代土壤中，会进一步传播疾病。

而试管苗快繁技术可以通过无菌培养的方式，快速繁殖大量无病繁殖的健康马铃薯试管苗，有效地避免了这一现象的发生。

该技术可以用作品种保存和资源库的建设。

通过马铃薯脱毒试管苗技术，可以将母株的遗传物质以及优良品种进行保存和繁殖，确保了马铃薯种质资源的多样性和稳定性，为马铃薯品种的改良和繁衍提供了重要的物质基础。

马铃薯脱毒试管苗技术还可以提高生产的质量和效率。

传统的马铃薯繁殖方式往往需要较长的时间，且容易受到疾病和气候等环境因素的影响，生产效率较低。

但是通过试管苗快繁技术，可以快速地繁殖大量高质量的马铃薯试管苗，提高了生产效率和质量，对于整个马铃薯产业的发展具有重要的意义。

二、马铃薯脱毒试管苗快繁技术的关键技术马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一项复杂的技术，其成功应用需要掌握一系列关键技术。

以下是该技术的关键技术要点：1. 母株选择母株的选择是马铃薯脱毒试管苗快繁技术的第一步。

选择健康、无病毒的母株进行组织培养，是保证繁殖出的试管苗质量的基础。

只有健康的母株才能够保证繁殖出的试管苗也是健康的。

脱毒马铃薯种质资源保存新方法

马铃薯种质资源的保存主要有3种方式：块茎保存、田间保存和试管苗保存（卞春松等，2011）。

由于试管苗保存法具有保存成本低、节约空间等优点，目前世界上许多国家都采用此法保存马铃薯种质资源（杨小琴等，2016）。

试管苗保存法又可以分为一般（常温）保存法和缓慢（低温）保存法（张小川等，2017），一般保存法是试管苗在20～24 ℃常温下不断继代培养保存资源，缓慢保存法则是通过调节培养基成分和培养环境来延缓试管苗生长或停止生长保存资源。

一般保存法的缺点是需要定期转苗继代培养，通常2～3个月转苗1次（齐恩芳等，2015），不仅需要较多的人力、物力、财力，而且多次操作会增加污染几率；缓慢保存法则对保存条件要求较高，需要一定的低温设施设备和投入资金，也提高了一般实验室对马铃薯种质资源保存的门槛。

笔者采用保存脱毒马铃薯试管薯的方式进行种质资源保存，即经过3～4个月让马铃薯试管苗在试管中自然结成试管薯，此时对试管薯不做任何处理，继续于培养室试管中保存，直至试管薯度过休眠期开始萌芽；再从试管中移出欲萌芽的试管薯，在新的培养基中进行新一轮培养，继续保存培养试管薯，整个过程可简化为脱毒试管苗→试管薯→试管苗→试管薯→微型薯。

通过2 a （年）多的试验探索，发现试管薯保存法和试管苗一般保存法最终的保存效果相同，且试管薯保存法操作更简单，试管苗一般保存法1 a （年）需转苗5次，试管薯保存法1 a （年）转苗1次即可，节约了保存成本，可节省电量50%，对大规模马铃薯种质资源的试管苗保存库来说操作性更好；并且以试管薯方式保存的资源一旦需要组培快繁，则其继代培养更健壮；若进行土壤移栽种植，相比试管苗不仅成活率高、出苗壮，而且结薯产量高、个数多。

据笔者了解，目前试管薯保存法尚未在马铃薯种质资源保存中规模化应用，是一种保存马铃薯种质资源的新方法。

1　试验具体操作步骤1.1　试管苗培育　马铃薯脱毒试管苗由山东省农业科学院蔬菜花卉研究所提供，4个品种分别为鲁引1号、H2013-1、H2013-3、H2013-8。

马铃薯保存操作规程

分，即可剥离。 4.1.2 培养条件剥离的茎尖放入配好的培养基中，温度 20℃±2℃，黑暗处理 10 d 后，进行光照，光照强度 2 000 lx，光照时间 14 h/d。 4.2 利用植物生长延缓剂保存脱毒试管苗 4.2.1 利用甘露醇保存马铃薯脱毒试管苗（1）培养基配置：培养基采用 MS 培养基，添加 20 g/L 甘露醇、30 g/L 蔗糖、0.5 % 琼脂，用 NaOH 调节 pH 至 5.8～6.0。每个培养瓶分装 50 ml，121℃高温高压灭菌 20 min 备用。（2）培养条件：温度 20℃ ± 2℃，光照强度 2 000 lx，光照时间 14 h/d。（3）保存时间：保存时间为 3～9 个月。 4.2.2 利用聚乙二醇保存马铃薯脱毒试管苗（1）培养基配置：培养基采用 MS 培养基，添加 40 g/L 聚乙二醇（PEG 6 000）、30 g/L 蔗糖、0.5% 琼脂，用 NaOH 调节 pH 至 5.8～6.0。每个培养瓶分装 50 ml， 121℃高温高压灭菌 20 min 备用。（2）培养条件：培养温度 20℃ ± 2℃，光照强度 2000 lx，光照时间 14 h/d。（3）保存时间：保存时间为 90 d。 4.2.3 利用山梨醇长期保存马铃薯脱毒试管苗（1）培养基配置：培养基采用 MS 培养基，添加 40 g/L 山梨醇、30 g/L 蔗糖、0.5%琼脂，用 NaOH 调节 pH 至 5.8～6.0。每个培养瓶分装 50 ml，121 ℃高温高压灭菌 20 min 备用。（2）培养条件：培养条件为 10℃，光照强度 2 000 lx，光照时间 14 h/d。（3）保存时间：保存时间为 1 年。 4.2.4 利用矮壮素保存马铃薯脱毒试管苗（1）培养基配置：培养基采用 MS 培养基，添加 1 200 mg/L 矮壮素（CCC）、30 g/L 蔗糖、0.5 %琼脂，用 NaOH 调节 pH 至 5.8～6.0。每个培养瓶分装 50 ml，121℃高温高压灭菌 20 min 备用。（2）培养条件：温度 25℃，湿度 80%，光照强度 2 500 lx 条件下培养，光照时间 14 h/d。（3）保存时间：保存时间为 300 d。 4.2.5 利用多效唑保存马铃薯脱毒试管苗（1）培养基配置：培养基采用 MS 培养基，添加 4.8 mg/L 多效唑（PP333）、30 g/L 蔗糖、0.5 % 琼脂，用 NaOH 调节 pH 至 5.8～6.0。每个培养瓶分装 50 ml，121 ℃高温高压灭菌 20 min 备用。（2）培养条件：温度 20℃ ± 2℃，光照强度 2 000 lx，光照时间 14 h/d。（3）保存时间：保存时间为 2 个月。

一种马铃薯试管苗限制生长保存方法[发明专利]

专利名称：一种马铃薯试管苗限制生长保存方法专利类型：发明专利
发明人：张金梅,陈晓玲,辛霞,卢新雄,尹广鹍,何娟娟申请号：CN202111091451.7
申请日：20210917
公开号：CN113841612B
公开日：
20220617
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及离体试管苗保存技术领域，公开了一种马铃薯试管苗限制生长保存方法，包括以下步骤：(1)组织培养：将马铃薯无菌试管苗在培养温度20～25℃、光照强度3000～4000lx、光周期为光照16h/黑暗8h的条件下，接入培养基中分别培养1周；(2)低温锻炼：选择步骤(1)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，培养温度和光照时间为20℃光照8h、4℃黑暗16h的条件下低温锻炼1～2周；(3)限制生长：选择步骤(2)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，在4℃无光照的条件下保存；该保存方法基于组织培养技术，马铃薯试管苗的保存期可达2年，形成低维护、低消耗、更长久的适于马铃薯中长期保存的技术。

申请人：中国农业科学院作物科学研究所
地址：100000 北京市海淀区中关村南大街12号
国籍：CN
代理机构：北京中恒高博知识产权代理有限公司
代理人：张秋云
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RAPD法在马铃薯试管苗低温保存后的遗传稳定性分析中的研究

记技术分析了其遗传稳定性。通过对１０２条随机引物进行筛选检测，发现马铃薯试管苗低温保存的过程中没有发生遗传物质的
改变，在遗传性状上表现相对稳定，明显的变异条带。无
关键词：马铃薯试管苗；低温保存；遗传稳定性；ＡＤＲＰ
中图分类号：５２￥３
摘要：马铃薯试管苗加入矮壮素（ｃ）０于４Ｃｃｃ６０ｍ￣低温保存１０ｄ恢复生长后接种于不加任何激素的Ｍ培养基上，５，Ｓ在
２％的组培室进行恢复培养３，４Ｏｄ长到３ｅｍ左右时，利用ＲＤ（ａｄｍａｐｉｅｏｙｒｈｃＤＡ，ＡＰＲｎｏｍｌｄｐｌｐｉＮ随机扩增的多态性ＤＡ）ｉｆｍｏＮ标
（ｏｎｃｓ）Ｓｌａａ作物。目前大规模保存马铃薯种质比ａｅ较有效的方法是利用试管苗低温保存。持材料低保温保存前后遗传的相对稳定性是资源保存的基本要求之一。然而植物离体低温保存过程中会发生
体细胞无性系变异，而且有些变异是可以遗传的，故对保存过程中的遗传稳定性进行研究并寻求降低遗传变异的途径是很有必要的［ＲＰ（ａｄｍ２ＡＤＲｎｏ１。
文献标识码：Ａ
文章编号：０６００（０００—０５０１０ —６Ｘ２１）９００— ２
ＧｅｅｉｔｂｌｙＡｎｌｓｓｏｔｔｌｎｌｔｔｙｐｅｅＶｔｎｂＰＤｎｔｃＳａｉｔａｙｉｆＰｏａｏＰａｔｓｗｉｈＣｒＯｒｓｒａｉｙＩｉｅ０

马铃薯克新一号试管苗与试管薯保存技术试验

马铃薯克新一号试管苗与试管薯保存技术试验作者：陈英，刘江娜，张爱萍来源：《新疆农垦科技》 2014年第9期陈英，刘江娜，张爱萍*（兵团第六师农科所，新疆五家渠831300）摘要：本文在每年更换1次新的培养基的条件下，通过对试管苗和试管薯保存中进行的低温处理和生长抑制剂使用，最大限度减少繁殖的代数，达到了有效延长被储存材料的存活率的目的。

关键词：马铃薯克新一号；试管苗；试管薯；资源保护与实生种子繁殖作物不同，马铃薯依靠块茎繁殖，其资源的利用具有特殊性。

由于感染的马铃薯材料很难长期保存，因此，无毒苗在基因资源使用、种质保存及国内、国际间的交流具有重要的作用[1]。

马铃薯种资资源的搜集、引进、鉴定创新和利用一直被马铃薯育种者所重视[2]，但我国马铃薯资源过去采用“春播-秋收-冬窖藏”的田间保存方式，这种方式不仅需要消耗大量的人力、物力、财力，还受到各种灾害和人为因素的制约，导致资源混杂、遗失。

实践证明，利用生物技术通过茎尖培养，将马铃薯资源转育成试管苗和试管薯保存，这种离体培养保存技术可避免田间病虫害的侵袭和资源流失，可从根本上解决马铃薯退化的问题，具有占用空间小、成本低、体积小、重量轻、易贮藏和运输及种植方便等优点，在马铃薯脱毒苗繁殖、种质保存、种子交换等方面具有重要意义[3]。

单纯用试管苗，保存2年后会出现明显的退化，剪切7代以上苗的生长势会明显降低，且细菌污染严重，较难剔除，采用试管苗、试管薯、块茎3种保存方式相结合，是马铃薯种资资源保存行之有效的方式。

本试验通过对试管苗、试管薯保存过程中低温处理和生长抑制剂的使用，在每年更换1次培养基的条件下，以提高储存材料的存活率[6]。

保存的两头用试管苗，中间用试管薯，以最大限度减少繁殖代数，达到长时间保存马铃薯种质资源的目的。

1材料与方法1.1材料选用马铃薯克新一号种薯，高温与茎尖脱毒相结合，采用PCR方法和酶联双抗体夹心法（ELISA）对主要病毒病和类病毒病（PSTV）进行检测，对不带病毒的试管苗根据需要扩繁2次，从中取出1/2数量的试管苗用液体培养方法壮苗20d，再转到诱导培养基中诱导结薯。

马铃薯种质离体保存技术

马铃薯种质离体保存技术岳新丽;湛润生;帅媛媛;陈云【摘要】Restricting conservation is a main method of plant germplasm in vitro preservation.Internode slow growth conservation of potato cultivar 'Jinshu 16' was studied in this experiment.The results showed that MS + IAA 0.5 mg/L + KT 0.1 mg/L plus 90 g/L sucrose gave best results at room temperature,while MS + sucrose 30 g/L + IAA 0.5 mg/L+ KT 0.1 mg/L supplemented with Paelobutrazol(PP333) 1.0 mg/L at room temperature and 0.5 mg/L at low temperature(4℃) performed well.Potato regen erated plantlets were the same as the normal subculture plantlets in morphology,when the plantlets were transferred to subculture medium at room temperature after preserved in vitro.%以马铃薯‘晋薯16号’为试验材料,以节间作为外植体,进行了种质资源缓慢生长保存研究。

结果表明,以MS＋IAA 0.5 mg/L＋KT 0.1 mg/L为基本培养基,通过调节蔗糖浓度进行马铃薯种质离体保存,在常温条件下最佳蔗糖浓度为90 g/L;以MS＋蔗糖30 g/L＋IAA 0.5 mg/L＋KT 0.1 mg/L为基本培养基,通过调节多效唑（PP33）3浓度进行马铃薯种质离体保存,在常温条件下最佳PP333浓度为1.0 mg/L,在低温4℃条件下最佳PP333浓度为0.5 mg/L。

马铃薯种质试管苗保存

马铃薯种质试管苗保存
周明德
【期刊名称】《作物品种资源》
【年(卷),期】1989(000)003
【摘要】本文陈述了温度、光照条件以及培养基中加入甘露醇、B9,甲基丁二酸对马铃薯种质试管苗保存存活率的影响。

同时比较了不同试管封口材料对存活率的效应。

结果表明,在温度为10℃、光照强度为500—1000Lx、每天光照8小时的保存条件下,培养基中加入甘露醇或B9、甲基丁二酸,用铝箔封口可以延长试管苗保存时间。

保存11个月后,培养基中加有甘露醇的试管苗存活率为90-100%,加甲基丁二酸的存活率为70—80%以上。

【总页数】2页(P42-43)
【作者】周明德
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】S532.032
【相关文献】
1.茶种质资源室内保存技术研究:茶树茎切段试管苗保存技术 [J], 王立
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4.梨试管苗种质资源保存的研究 [J], 汤燕姗
5.嘧啶醇对马铃薯种质试管苗保存遗传稳定性的影响 [J], 柳寒;谢婷婷;徐君;柳俊
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马铃薯茎尖剥离与试管苗培养技术

马铃薯茎尖剥离与试管苗培养技术摘要：在无菌环境下对马铃薯茎尖进行剥离，并分步接种到特定的培养基上，在25 ℃±2 ℃的温度、1 000lx～4 000lx的光照条件下培养，并经病毒鉴定后可生产出健康的马铃薯脱毒试管苗。

对试管苗进一步切段繁殖，可生产大量的脱毒苗。

关键词：马铃薯；茎尖脱毒；试管苗；培养技术马铃薯在种植过程中易感染病毒，当条件适合时，就会在植株体内增殖、转运和积累于所结的薯块中，并且世代传递，逐年加重。

造成植株生长势明显变差，块茎变小，产量不断下降，品质逐年变劣，食用性和商品性受到严重影响，品种失去了原有的优良种性，这就是马铃薯的退化现象。

马铃薯病毒的增殖与植株正常代谢极为密切，目前尚未发现既能杀死病毒又不损伤植株的药剂，因此，病毒危害一度成为马铃薯的不治之症。

茎尖组织培养无病毒植株技术的迅速发展，为解决马铃薯病毒危害提供了有效途径。

利用组织培养技术生产健康无病毒种薯，成为目前生产中解决马铃薯退化最先进的技术措施之一。

在马铃薯植株体内，病毒的分布极不均匀，其中茎尖部分带病毒最少或不带病毒，并且越靠近尖端，病毒浓度越低。

根据这一特性，在无菌条件下借助解剖镜剥离茎尖分生组织，并接种到装有特定培养基的试管（或三角瓶）内进行培养，经病毒鉴定后可获得脱毒小苗。

对脱毒苗进一步切段繁殖，当达到所需数量时，通过基质栽培可生产大量的脱毒种薯。

种植经过脱毒的种薯，其产量、质量以及抗逆性都有很大程度的提高，因此，组织培养技术成为提高马铃薯生产力的一个重要手段。

下面将马铃薯茎尖剥离与试管苗培养技术介绍如下：1茎尖剥离1.1材料的选取与消毒供培养用的茎尖最好取自活跃生长的芽，顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高。

材料的选取。

最好是在马铃薯生长季节选择具有原品种特征特性的单株，收获后对入选的块茎用0.50~1mg/kg的赤霉素浸种20min，然后置于温室内的砂床上或种在无菌的盆土中育芽。

管理中应注意浇水时要直接浇在土壤中，切忌浇在叶片上，以防止水分感染茎尖。

马铃薯保存操作规程

马铃薯保存操作规程
李润;刘绍文;王伟;李艳;郭蓓蓓;王燕;肖勇
【期刊名称】《农业科技通讯》
【年(卷),期】2015(0)7
【摘要】总结马铃薯脱毒茎尖、脱毒试管苗、块茎等保存的方法,提高其保存的成功率,降低或避免因保存方法的不当而造成马铃薯品种资源的损失.
【总页数】3页(P260-262)
【作者】李润;刘绍文;王伟;李艳;郭蓓蓓;王燕;肖勇
【作者单位】四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000;四川省凉山州西昌农业科学研究所西昌615000
【正文语种】中文
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3.造血干细胞低温保存与复温操作规程（讨论稿）
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种
理
（米）（）（米）（米）（米）（）厘片厘厘厘每
从表３看出，低温对试管苗的生长发育影响很大，导致试管苗在外部形态上的变化，随着Ｂ浓度
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２不同品种脱毒马铃薯试管苗生长比较．
、
材料和方法
１验材料．试
表２不同品种试管苗生长调查（０天）３
品种处理苗长叶片数茎长茎粗根长（米）（）（米）（米）（米）厘片厘厘厘
脱毒马铃薯陇薯３号和甘农１试管苗。号
对马铃薯试管苗的生长有较大影响，以陇薯３号为
例，在低温下生长的苗，苗高、长、长较常温下其茎根生长的短，片、系数目相对较少，茎粗却比常叶根而
快，不利于非转接时期试管苗的保存。物生长延缓植剂Ｂ对促进马铃薯试管苗缩短节间、增加茎粗、９抑制徒长、进壮苗、长保存时间有重要作用。在低促延温下培养，可使试管苗生长缓慢以延长继代的间隔时间，少转接次数，到保存效果。本试验通过不减达同浓度的Ｂ和不同温度培养试管苗的比较试验，９获得较好的保存方案。
温度处理苗长叶片数茎长茎粗根长根数
（米）（）（米）（米）（米）（）厘片厘厘厘条
表３对Ｂ脱毒马铃薯试管苗低温生长的影响（０９１天）
品处苗长叶片敷茎长茎粗枉长根敷备注
ＡＢｃＤＥ
６５３３２４
Ⅲ
８８６５４
① 在无菌条件下将茎段接种于不同的培养基
中。每个处理接种１０瓶，每瓶２个茎段。 ② 低温培养在人工气候箱里，逐步降温至９Ｃ，￣常温培养温度为２ａ，照时间１５Ｉ光＝２小时／，强天光２００勒克斯。０ ③ 接种后观察根、、茎芽的生长状况，查苗长、调叶片数、茎长、粗、长、数等，茎根根茎长和茎粗以第３
农，但茎１号较粗两黻１号长％粗以甘农他们壮。此时，品种均有部分苗发出侧芽。３低温下Ｂ对脱毒马铃薯试管苗的影响．９
１温度对马铃薯试管苗的影响．表１温度对马铃薯试管苗的影响（陇薯３号）３）（０天
地膜试验：试验安排在喀拉布根乡克孜勒库木
村。试验面积１３４米３。地膜试验采取对比排列，重
复３次，以不铺膜为对照（Ｋ）Ｃ。
１％Ｆ值，表示差异显著；当区组间（变量）大自由度＝
２机误（变量），小自由度：２时，求得Ｆ值为２５４，４．５
２处理．
Ａ：（Ｋ；ＭＳＢ０毫克／；：＋９４ＭＳＣ）Ｂ：＋９２升ＣＭＳＢ０毫克／；ＭＳＢ０毫克／；Ｍ＋９８升Ｄ：＋９６升Ｅ：ＳＢ０毫克／
升。
３试验方法．
陇薯
号
甘农
号
Ａ口
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石３号
地膜试验
表３地膜试验变量分析
一
、
材料与方法
由表３可知，当处理间（量）大变自由度＝，１机误（变量）小自由度＝２时，％Ｆ值：８１１５１．，％Ｆ值：５９．，８４求得Ｆ值为３８８１，于５９１．大８％Ｆ值，也大于
３
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Ｊ
８６３４３ ∞ ５５
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温下的大；时常温培养的试管苗因生长速度快，同对培养基的消耗也较大，０天开始萎蔫死亡，低温保６而存苗可达１５天。说明在低温下生长的马铃薯试管４
苗生长速度比常温培养的速度慢，可以延长试管苗
的保存时间，到壮苗的作用。起
３４３４４４
３５３．
两个品种中，陇薯３号在接种第３天就长出根，
节为统一测量部位。
二、果与分析结
腋芽也随之萌发，甘农１号在第５天才长根。由表％ ∞ 而
２可见，３第０天时，薯３号的苗长、和根均比甘陇茎
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马铃薯试管苗保存技木
脱毒马铃薯试管苗在光照２００勒克斯，温度０２ ± ａ的条件下，养２５２Ｉ＝培５天就到瓶口，长速度较生由表１知，其它条件一致情况下，同温度可在不