生物化学实验-- 酵母RNA的提取及
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。
1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。
b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。
c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。
d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。
e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。
f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。
g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。
h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。
i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。
2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。
b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。
c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。
这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。
根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。
酵母RNA的提取及RNA含量的测定(紫外吸收法)
生物化学实验报告题目：酵母RNA的提取及RNA含量的测定（紫外吸收法）姓名：学号：班级：时间：一、实验目的：1.掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2.掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
3.熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理：1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
2.核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。
测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。
该法操作简便，迅速，并对被测样品无损，用量也少。
三、实验器材：pH试纸，电子天平，试管1.5cm×15cm（×10），三角瓶200mL（×1），烧杯100mL（×1），量筒50mL（×1）、10mL（×1），吸管，离心机4000r/min，容量瓶100mL（×1），紫外分光光度计。
四、实验试剂：标准RNA溶液（100μg/mL），0.2%NaOH，酸性乙醇（500mL95%乙醇+5mLHCl），95%乙醇，无水乙醇，干酵母粉（市售）。
五、实验步骤：1.称取4g干酵母粉，放入200mL三角瓶中，加入40mL 0.2%NaOH溶液，沸水浴30min后冷水冷却，4000r/min离心15min。
留上清液加入95%酸性乙醇40mL，边加边搅拌，静置5~10min，再4000r/min离心5min，保留沉淀，在每次用10mL 95%乙醇洗涤沉淀，3000r/min离心5min，洗涤两次，再用无水乙醇100mL洗涤两次，每次3000r/min离心5min，收集到沉淀1.36g于滤纸上保存备用。
2.取0.2112gRNA样品，加入2mL 0.2%NaOH溶液和1mL水，溶解呈糊状。
再加40~50mL水，溶解，调pH为7，定容至100mL。
酵母RNA的提取和含量测定
酵母RNA的提取和含量测定一、实验原理1、RNA的提取工业上提取RNA通常选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法，这两种方法提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，工艺较简单。
酵母细胞富含核酸，且核酸主要为RNA，含量为干菌体的2.7%-10%，而DNA 含量较少，仅为0.3%-0.5%，故常用酵母作提取RNA的原料。
稀碱法是用NaOH使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和。
偏酸性条件下RNA进入水相，而蛋白质和菌体沉淀。
除去蛋白质和菌体的溶液用乙醇沉淀RNA 或调pH至等电点（2.5）附近使RNA沉淀。
2、RNA含量的测定（苔黑酚法）RNA与浓盐酸共热时，即发生降解。
分子中的核糖转变为α-呋喃甲醛（糠醛），后者在氯化铁催化下与苔黑酚（3,5-二羟甲基苯）作用生成绿色复合物，可在670nm下用比色法测定含量。
在RNA浓度为10~100μg/mL范围内，产物浓度与吸光度呈线性关系。
本法特异性较差，凡属戊糖均有此反应。
某些己糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与苔黑酚反应，产生显色复合物。
微量DNA无影响，较多DNA存在时，亦有干扰作用。
可以利用RNA和DNA显色复合物的最大吸光吸收不同，且在不同时间显示最大色度加以区分。
反应2min后，DNA在600nm呈现最大光吸收，而RNA在反应15min后，在670nm呈现最大光吸收。
二、实验器材1、仪器：电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、离心机、烧杯若干、量筒(10mL、50mL)、pH试纸（1~14）、5mL吸管；试管*8、紫外分光光度计、水浴锅。
2、试剂：市售干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、乙酸（A.R）、95%乙醇、无水乙醚（A.R）；标准RNA溶液（100μg/mL）、苔黑酚-三氯化铁试剂。
三、操作记录1、RNA的提取称取8.05g干酵母粉于100mL烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40mL，沸水浴加热30min，加热过程中经常搅拌冷却，加入乙酸数滴，使提取液呈微酸性（pH5~6），离心10~15min（4000r/min）。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
酶的特异性及影响酶活性的因素
滴瓶、滴管与细口瓶 生 物 化 学 实 验
1、提出滴头，排出空气。 2、伸入液面下，吸取液体。 3、按量排出液体。 4、将剩余液体排出，放松手指，将滴 头自然放入滴瓶内
Exit
生命科学学院
蛋白质的提取、分离纯化及定量
离心机
生 物 化 学 实 验
⑴将字心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
反应，产生显色复合物。
⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的粗提取：
二、水解RNA
三、RNA组分鉴定
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的提取 1.7g酵母悬浮于0.2％ 氢氧化钠溶液70ml中。
生命科学学院
Exit
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
酵母RNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论 • 参考文献
01 实验准备
实验材料
01
02
03
04
新鲜酵母样品
确保酵母样品新鲜且无污染， 以保证RNA提取的质量。
无菌水
用于清洗实验器具和稀释提取 液。
离心管和离心机
用于离心分离酵母细胞和上清 液。
滤纸和过滤器
用于过滤上清液和去除杂质。
价值的信息。
05 参考文献
参考文献
01
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02
[请在此处插入参考文献2]
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03
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破碎条件优化
为了获得最佳的破碎效果，可能 需要优化破碎条件，如破碎时间 、破碎次数、破碎温度等。
沉淀与洗涤
沉淀
在破碎后的酵母细胞液中加入适量的沉淀剂，如异丙醇或乙醇，使RNA沉淀下 来。
洗涤
将沉淀物洗涤干净，去除杂质和残留的沉淀剂。洗涤过程中需注意洗涤液的更 换和洗涤次数。
RNA的提取与纯化
提取RNA
将沉淀物溶解在适量的缓冲液中，通过离心或过滤的方法将 RNA从细胞残渣中分离出来。
纯化RNA
去除提取液中的蛋白质、DNA等杂质，获得纯度较高的RNA 。纯化方法包括凝胶电泳、离心机分离、酶解等方法。
03 结果分析
RNA浓度测定
总结词：准确测量
详细描述：使用紫外分光光度计测定提取的RNA溶液的吸光度，根据标准曲线计 算RNA浓度。
实验结果可重复
通过实验操作，成功从酵母细胞中提 取出RNA，且质量较高，无明显杂质。
实验三酵母RNA的提取、测定
实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。
因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。
由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。
工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。
稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。
稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。
浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。
离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。
加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。
2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。
待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。
随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。
调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
酵母RNA的提取及鉴定
操作方法
一、RNA提取
1.将5g酵母粉悬浮于30m1 0.04mol/L氢氧化钠溶 液 ，研磨均匀 ； 2.悬浮液转移至锥形瓶中，在沸水浴上加热30分钟， 冷却后离心(3000rpm,l5min)； 3.将上清液缓缓倾入15m1酸性乙醇溶液中（一边搅 拌 ），离心； 4. 95％乙醇悬浮沉淀，离心； 5.乙醚悬浮沉淀 ，布氏漏斗中抽滤（用乙醚冲洗2-3 次），至沉淀抽干，即得RNA粗制品。
4.磷酸 取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml，在水浴中加热， 观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
二、组分鉴定
1.取部分提取的核酸到试管中，加入1.5M硫酸10m1，在沸水浴中加 热10分钟制成水解液。
2.嘌呤碱 取水解液1ml加入过量浓氨水，然后缓慢加入约1m1 0.1M 硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
3.核糖 取一支试管加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2m1和苔 黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿 色，说明核糖的存在 。
试剂
1、0. 04mol/L氢氧化钠溶液 2、酸性乙醇溶液 3、95％乙醇 4、乙醚 5、1.5M硫酸 6、浓氨水 7、0.1mol/L硝酸银溶液 8、三氯化铁浓盐酸溶液 9、苔黑酚乙醇溶液 10、定磷试剂 (1)17％硫酸，将17m1浓硫酸(比重1. 84)缓缓加到83ml水中。 (2)2．5％钼酸铵溶液：2．5g钼酸铵溶于100m1水中。 (3)10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮棕色瓶内保 存。 临用前将上述三种试剂与水按如下比例混匀：(1):(2):(3):H2O= 1:1:1:2（v/v），溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效。
酵母RNA的提取及鉴定
学习用碱裂解法提取RNA，了解RNA的组分，并 掌握鉴定RNA组分的方法。
实验四酵母RNA的提取
实验四酵母RNA的提取一、原理酵母含有丰富的核酸，其中DNA较少，而RNA较多(约占干重的3-10%)，加之菌体收集容易，所以多用酵母作为提取RNA的材料。
本实验用浓盐法提取RNA，基本过程和原理是：用10%氯化钠使核糖核蛋白中的RNA解聚并溶于盐溶液中，离心除去菌体残渣及变性蛋白质后，调节溶液的pH值至RNA的等电点，RNA即可沉淀析出。
本法提取的RNA已变性并有部分降解，工业上常将其进一步水解，以制备核苷酸、核苷和碱基等。
如要避免RNA降解，可用苯酚法提取。
通过鉴定RNA的组成成分可对RNA定性。
磷酸：磷酸可与钼酸铵作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下被还原为蓝色的钼蓝。
嘌呤碱：它们能与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化物沉淀。
核糖：核糖与酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚反应生成绿色化合物。
二、试剂与仪器(一)试剂：1．干酵母2．10%氯化钠溶液3．6摩尔/升盐酸溶液4．乙醚5．10%硫酸溶液6．钼酸铵试剂：2克钼酸铵溶于100毫升10%硫酸7．10%维生素C溶液8．0.1摩尔/升硝酸银溶液9．1摩尔/升氨水。
10．Fe3+-HCL试剂：0.99克硫酸高铁铵〔NH4Fe(S04)2·12H20〕溶1000毫升浓盐酸中。
11.5%苔黑酚乙醇溶液。
(二)仪器：1．沸水浴2．离心机三、操作：1.酵母RNA的提取①干酵母约0.3克置于离心管内，加入10%氯化钠5毫升，搅匀后置沸水浴加热10分钟。
②取出离心管，流水猝冷后，3000rpm离心10分钟，上层即为RNA提取液，下层为菌体残渣及变性蛋白质沉淀。
③将上层清液小心倾入另一离心管中，逐滴加6摩尔/升盐酸，边加边搅拌，随着pH下降，RNA逐渐沉淀析出，当调节pH至2.O-2.5(接近RNA等电点)时，沉淀最多，此时，静置几分钟，然后在3000rpm离心10分钟。
收集RNA沉淀。
用少量乙醚洗涤以除去脂类和色素等杂质。
2.RNA的水解在上述RNA沉淀中，加入10%硫酸5毫升，搅匀，沸水浴加热5分钟，使RNA水解。
酵母中RNA的提取与含量测定
酵母中RNA的提取与含量测定酵母是一类广泛应用于工业生产中的微生物，具有高温抗性、高碱性和高盐度等特殊环境适应能力，可生产出酵母菌辅酶、乳酸、醋酸、酒精、面包等产品。
酵母的研究也成为生物学、生物技术等领域的重要课题之一。
RNA（核糖核酸）是生命体中发挥重要生物学功能的分子之一，能够参与DNA复制、转录和翻译等生命过程，是研究生物学、分子生物学和基础医学等领域的重要手段之一。
因此，酵母中RNA的提取与含量测定是酵母研究的重要内容之一。
酵母中RNA的提取方法主要包括以下几个步骤：1.预处理样品：将培养的酵母细胞通过离心和去除培养基中的各种杂质，得到净化后的酵母细胞。
2.细胞破碎：通过化学方法或物理方法对细胞膜进行破坏，将细胞内的RNA暴露出来。
3.溶解RNA：加入适量的含有RNA保护剂（如二硫苏糖）的缓冲液，使RNA得到保护，不会受到核酸酶的影响，可以得到RNA溶液。
4.精制RNA：通过酚/氯仿提取及异丙醇沉淀的方法分离出纯化的RNA。
5.分析RNA：通过吸光度测定、电泳或荧光分析等方法检测RNA的纯度和含量。
酵母中RNA的含量测定可通过紫外吸收光度法进行。
该方法利用RNA在260nm处的吸收峰和RNA在280nm处的吸收峰的比值，来计算RNA的浓度。
其计算公式为：RNA浓度 = OD260值× 40 ug/ml × 稀释倍数其中，OD260值为RNA样品的吸光度值；40ug/ml为RNA样品在260nm处的吸收系数；稀释倍数为样品的稀释倍数。
除紫外吸收光度法外，也可以采用其他方法如电泳或荧光分析来测定RNA的含量。
总之，酵母中RNA的提取和含量测定可为酵母研究提供重要的实验基础和理论支持，为探索酵母生物学和基因工程等应用领域提供更为广阔的前景和新的研究突破。
实验六 酵母RNA的提取及组份鉴定
2.5g鉬酸铵溶于100mL水中；
10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水，棕色并保存溶液；
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17％硫酸：
2.5％鉬酸铵：10％抗坏血酸：
水＝1：1：1：2（V/V）。
二、材料
干酵母粉。
三、器材
移液管
2.0mL（×1）,1mL（×4）；移液枪；量筒10mL（×1）,50mL（×1）；滴管；水浴锅；低速离心机；研钵；天平。操作方法
二、RNA组份鉴定
将所提取的核酸转移到试管中，加入
1.5M硫酸5mL,沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
1．嘌呤碱：
取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL
0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
2．核糖：
取水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液
0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
一、酵母RNA提取
称5g干酵母粉悬浮于30mL
0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入大试管，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心10分钟后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000r/min离心5min。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，第一次洗涤后3000r/min离心5min，第二次洗涤后过滤，将沉淀转移到滤纸上，沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量，计算：
实验六酵母
目的要求
（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH
酵母RNA的提取和定量测定
酵母RNA的提取和定量测定131140033 习盼一、实验目的：1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法2、掌握用苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验目的：酵母核酸中RNA含量较多，DNA少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，加入乙醇可使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的沉降。
在酸性条件下，RNA分子中的核糖基转变为α-呋喃甲醛，后者与苔黑酚（3,5-二羟甲苯）作用生成绿色复合物，可用比色法测定。
三、实验器材和试剂：器材：1、干酵母粉2、pH试纸3、电子天平4、烧杯（100ml）5、量筒6、抽滤瓶7、布氏漏斗8、吸管9.离心机10、水浴锅11、分光光度计试剂：1、0.2%NaOH溶液2、乙酸3、95%乙醇4、标准RNA溶液（0.1mgRNA/ml）4、苔黑酚一三氯化铁试剂四：实验步骤：1、RNA的提取：称取7.9692g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌。
冷却，加入乙酸用石蕊试纸调节提取液pH至酸性（5~6），离心15分钟（4000r/min），取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边搅拌边加。
加完后静置10分钟，待完全沉淀后，抽滤。
滤渣先用95%乙醇洗两次（每次10ml），洗完离心5分钟（4000r/min），再用无水乙醚洗涤2次（每次10ml），抽滤得到滤渣即为粗RNA，可作测定含量用。
2、标准曲线的绘制：取六只试管，按下表操作：3、样品的测定：取0.0104gRNA粗品用蒸馏水溶解并用100ml容量瓶定容。
取1ml液体置于试管6中，加蒸馏水1.0ml，苔黑酚试剂2.0ml，连同上步6只试管一起沸水浴保温45min，冷却。
测定其A670nm。
根据标准曲线求得RNA的质量（mg）。
ω=m1/m2*100%式中ω：RNA的质量分数（%）m1:样液中测得的RNA质量（mg）m2:样液中样品的质量（mg）四、实验结果：提取的粗RNA质量为0.1951g。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
验
迅速冷却，提取液离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀
碱法是用稀碱溶液使细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋
白质和菌体后
,的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
Exit 生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
生
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。
甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚 反应，产生显色复合物。 ⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit 生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物
一、RNA的粗提取：
化
二、水解RNA
学
三、RNA组分鉴定
实
验
生命科学学院
实验步骤
酵母RNA的提取及组分鉴定
生 一、RNA的提取 物 1.7g酵母悬浮于0.2％ 化 氢氧化钠溶液70ml中。 学 2.将悬浮液转移至 实 150ml锥形瓶中，在沸 验 水浴上加热30分钟，冷
开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线
上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食
指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。
Exit
生命科学学院
酶的特异性及影响酶活性的因素
移
液
生 物 化 学 实 验
生 入水解液1ml ，加入三氯
物
化铁的浓盐酸溶液2ml和
化
苔黑酚的乙醇溶液3滴，
学
实
在沸水浴中加热，观察试
验
管内颜色变化。解释原因。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验七酵母rna的提取及鉴定.doc
实验七酵母rna的提取及鉴定.doc一、实验原理RNA是核酸的一种，在细胞中负责遗传信息的传递和蛋白质的合成。
RNA可分为信使RNA(mRNA)、核糖体RNA(rRNA)和转运RNA(tRNA)等多种类型，酵母菌中大部分RNA是rRNA 和tRNA，也存在少量的mRNA。
提取酵母RNA需要破解细胞壁和细胞膜等结构，并且细胞内含有大量核酸酶，因此提取纯度较高的RNA比较困难。
RNA的提取可以通过化学方法和物理方法两种方式实现。
化学方法主要是利用离子交换、酚-氯仿提取、硅胶柱层析等技术，较为复杂且需要一定的技术经验；物理方法主要是利用超声波、玻璃珠破碎法等技术，可以快速有效地提取RNA。
本实验采用物理法加化学法结合的方法提取酵母RNA，并通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的纯度和完整性。
二、实验步骤2.1 材料准备(1) 酵母菌法国版工业菌株(Saccharomyces cerevisiae);(2) TRIzol试剂盒(Thermo Fisher Scientific公司);(3) 稀释HCl溶液(3 mol/L);(4) 75%(w/v)的酸性酚;(5) 氯仿;(6) 层析级异丙醇;(7) 等电聚丙烯酰胺缓冲液(pH 7.0，0.025 mol/L Tris/HCl，0.192 mol/L草酸二钠，0.0025 mol/LEDTA)。
2.2 RNA提取(1) 取一支含3 mL YPD液体培养基的酵母菌液，在恒温摇床上培养至OD600=0.8-1.0。
收集菌体，迅速离心10 min，将菌体沉淀在低温下保存。
(2) 在无菌条件下，向2mL微离心管中加入500μl冰冻的脚本称重的玻璃珠，加入250μl TRIzol试剂，加入500μl氯仿混合液(高速离心样品质量的20%)。
(3) 用冰缓慢振荡离心管10次，将离心管放置于室温下2min，加入250μl乙醇混合液(浓度为75%)搅拌溶解沉淀。
(4) 将悬液转到色谱柱上(色谱柱预先加入2 g等体积的硅胶)，离心管内加入250μl TRIzol试剂并重复以上操作，将悬液转移到同一色谱柱上。
【精品】酵母RNA的提取与鉴定
【精品】酵母RNA的提取与鉴定
酵母是广泛应用于生物学研究的模式生物之一，因为它们具有较小的基因组，短的生命周期和适应性强。
在酵母研究中，提取RNA是常见的操作，因为RNA是在基因表达调控中起重要作用的分子之一。
本文将介绍酵母RNA的提取方法和鉴定实验。
1. 准备样品：将酵母转移到含有5 mL YPD培养基的试管中，在30°C下培养过夜。
2. 收集细胞：将培养的酵母细胞移至1.5 mL离心管中，离心2分钟，2000rpm。
将上清液倒掉。
3. 细胞破碎：加入300 ul裂解缓冲液含有β-丙硫氨酸（β-mercaptoethanol），使每个细胞含有至少0.5 mM β-丙硫氨酸。
用盐或玻璃珠打碎细胞，破碎细胞的进程中需要冷却架。
破碎细胞，离心2分钟，13000rpm。
4. 取RNA：将上清液转移到一个新的1.5 mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿，混合搅拌，离心10分钟，13000rpm。
RNA会出现在水相中，将水相转移到一个新的离心管中。
6. 干燥：将离心管在室温下风干10-15分钟，或将RNA转移到新的离心管或板中，在室温下干燥。
1. 电泳：将提取的RNA在2%琼脂糖凝胶中电泳，根据RNA的分子量判断RNA提取过程中是否有降解。
2. 比色法：用比色法测定RNA的浓度，通常比色法可以快速精确地测定核酸浓度。
3. 分光光度法：分光光度法可以通过测量RNA的260 nm和280 nm吸收值，计算出RNA 纯度。
总之，提取酵母RNA是简单易行的，对于酵母基因表达研究是至关重要的，可以应用多种方法进行RNA鉴定。
食品实验六酵母RNA的提取与定量测定
【实验材料和主要仪器、试剂】
1、实验材料：
酵母粉 (或酵母片)
2、实验仪器：
试管及试管架、研钵、锥形瓶、离心机等。
【实验材料和主要仪器、试剂】
3、实验试剂： 0.04mol/LNaOH溶液、酸性乙醇溶液、 1.5mol/L硫酸溶液 、浓氨水、 0.1mol/L硝酸银溶液 、氯化铁浓盐酸 溶液、苔黑酚乙醇溶液、钼酸铵试剂 （将2g钼酸铵溶解在100mL10%硫酸 中）
2、了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组 分的方法。
【实验原理】
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱 性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可 以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA 的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷 酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解 液中可以测出上述组分的存在。
【注意事项】
样品中蛋白质含量较高时，应先用5%三氯乙 酸溶液沉淀蛋白质后再测定。
定磷试剂含有还原剂抗坏血酸，抗坏血酸很容 易被空气中的氧所氧化，使定磷试剂失效。因 此可以改用钼酸铵试剂定磷。核酸分子中的有 机磷经强酸消化后形成无机磷，在酸性条件下, 无机磷与钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀。
【操作步骤】
1、RNA的提取：将5g酵母粉（或15片酵母片） 先干粉研磨均匀，然后用30mL 0.04mol/L氢氧 化钠溶液分次悬浮，将悬浮液分次转移至100 毫升三角瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷 却。离心(3000r/min)15分钟，向上清液中缓缓 倾入15 mL酸性乙醇溶液。注意要一边搅拌一 边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后，离心 (3000r/min)3分钟，弃去清液，沉淀可在空气 中干燥，即为RNA粗制品。
3rna的组分鉴定1嘌呤碱取水解液1ml加入过量约2ml浓氨水然后加入约1ml01moll硝酸银溶液观察有无嘌呤碱的银化合物絮状沉淀生2核糖取1支试管加入水解液1ml三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液02ml沸水浴中加热
酵母RNA的提取及组分鉴定
(二) RNA的水解 两管沉淀物中各加入1.5mol/L H2SO4 2.5ml后 合并，沸水浴10min，使其充分水解。 (三) RNA组分鉴定（取试管3支编号） 1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴， 加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴 混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜 色变化。 2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试 剂6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴 中加热5～10min，观察颜色变化。 3. 嘌呤试验：3号管，取5% AgNO3 10滴， 加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水 解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～ 10min，观察颜色变化。
四、结果与计算 管号 1号 2号 颜色
3号
五、注意事项 (一) 酵母研磨要充分； (二) 沸水中加热时要时常摇动试管； (三) 硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消 散后再加水解液。
Hale Waihona Puke 思考题 1．本实验为什么要选用酵母作为提取RNA 的实验原料？ 2．实验过程中酵母细胞为什么要充分研磨？
三、操作步骤 (一) 酵母中RNA的制备 1. 取0.5g干酵母置研钵中，加入0.04mol/L NaOH 4ml，磨3～5min，使其成匀浆； 2. 将酵母匀浆倒入1支大试管中，在沸水中加热 30min； 3. 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平； 4. 2000r/min离心15min，将两上清液分别倒入 另两小试管中，弃去沉淀； 5. 各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊 试纸检查。 6. 上述溶液猛力摇匀后，徐徐倒入两支各盛有 2.5ml酸性乙醇的试管中，即有白色沉淀析出。 7. 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步 实验。
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2.鉴定：取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟， 将RNA水解。
1)水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生 絮状嘌呤银化合物,有时沉淀出现比较慢,需要静止10几分钟。
2)取水解液0.5mL,加苔黑酚-三氯化铁试剂1mL，加热至沸1min,观
察颜色变化。
注意事项：离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基 本一样。否则会遭成离心机转子的损坏。
下次试验：DNA定量测定（二苯胺法）
实验十、酵母RNA的提取及鉴定
一、原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于
2%。 RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加 乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
1. 2. 3. 4. 5.
二、实验仪器 离心机 水浴锅 电炉 烧杯 量筒
三、实验试剂
1. 2. 3.
干酵母粉 0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。 乙酸
4.
5. 6. 7. 8.
95%乙醇
无水乙醚 10%硫酸
氨水
5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100：称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠 溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸 干可再加5~10ml氢氧化钠）。然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性 （pH试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。